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    人乳頭瘤病毒基因型與宮頸病變關(guān)系的研究

    2012-12-26 09:35:08周世媛薄立偉王艷麗牛成玲謝建生
    關(guān)鍵詞:危型細(xì)胞學(xué)感染率

    周世媛 薄立偉 王艷麗 牛成玲 謝建生 柴 健

    1.河南省人口和計(jì)劃生育科研院(鄭州,450000);2.深圳市婦幼保健院

    ·臨床研究·

    人乳頭瘤病毒基因型與宮頸病變關(guān)系的研究

    周世媛1薄立偉1王艷麗1牛成玲1謝建生2,*柴 健1

    1.河南省人口和計(jì)劃生育科研院(鄭州,450000);2.深圳市婦幼保健院

    目的:了解人乳頭瘤病毒(HPV)感染基因型分布,探討不同HPV基因型感染與宮頸病變的關(guān)系。方法:收集門診就診者宮頸脫落細(xì)胞行液基薄層細(xì)胞檢測(cè)并按照TBS分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷,同時(shí)應(yīng)用低密度基因芯片技術(shù)進(jìn)行HPV檢測(cè)和基因型分析(15種高?;蛐汀?種低?;蛐秃虲p8304基因)。結(jié)果:862例標(biāo)本中,共檢出19種HPV基因型。宮頸細(xì)胞學(xué)正常(NILM)組前3位HPV基因型是HPV 11、6和42,HPV單一與多重感染分別占75.86%和24.14%;細(xì)胞學(xué)異常組居前3位的HPV基因型是HPV 16、52和58,HPV單一與多重感染分別占71.11%和28.89%,該組以高危型HPV感染為主(88.71%)。細(xì)胞學(xué)正常組和異常組HPV感染率分別是11.28%和64.66%(χ2=299.33,P<0.05)。隨宮頸病變級(jí)別遞增,HPV感染率呈增高趨勢(shì)。結(jié)論:不同的HPV基因型具有不同的致病力,HPV多重感染與宮頸病變的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),HPV感染率隨宮頸病變程度增加而增加。

    人乳頭瘤病毒 基因分型 宮頸病變

    人乳頭瘤病毒(HPV)感染是引起子宮頸癌和宮頸上皮細(xì)胞病變的主要病因。目前全世界已發(fā)現(xiàn)的120余種HPV基因型中,約有40種涉及生殖道感染,20余種與腫瘤有關(guān)[1]。根據(jù)宮頸癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素,將HPV分為高危型和低危型兩大類。長(zhǎng)期持續(xù)高危型HPV感染可以誘發(fā)宮頸癌及癌前病變,低危型HPV可以導(dǎo)致生殖器尖銳濕疣、皰疹等疾?。?]。感染不同型HPV,其預(yù)后結(jié)果、診治、預(yù)防的標(biāo)準(zhǔn)不盡相同,因此檢測(cè)高危型和低危型HPV具有重要臨床價(jià)值。本文應(yīng)用低密度基因芯片技術(shù)對(duì)臨床標(biāo)本進(jìn)行HPV檢測(cè)并分析基因型分布,探討HPV基因型與子宮頸病變的相關(guān)性。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本來(lái)源

    隨機(jī)選取2008年7月~2011年8月來(lái)本院婦科門診就診的有性生活史、非月經(jīng)期婦女862例,年齡35.2±5.6歲。用采樣刷收集宮頸脫落細(xì)胞,用液基薄層細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)(TCT)檢測(cè)宮頸細(xì)胞后,將剩余標(biāo)本置于-20℃保存,用于HPV DNA檢測(cè)。按照TBS分類標(biāo)準(zhǔn),將標(biāo)本分為5組:正常及炎癥或良性反應(yīng)性改變(NILM)視為細(xì)胞學(xué)正常組共514例;意義不明確的不典型鱗狀細(xì)胞(ASC-US)以上級(jí)別視為細(xì)胞學(xué)異常組共348例,其中ASCUS 196例,低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)96例,高度上皮內(nèi)病變(HSIL)54例,鱗狀細(xì)胞癌(SCC)2例。

    1.2 研究方法

    1.2.1 TCT檢測(cè)將保存液中的標(biāo)本經(jīng) Thin Prep2000系統(tǒng)處理后,制成直徑2cm薄層細(xì)胞涂片,95%乙醇固定,HE染色,鏡檢。按照TBS分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)診斷。

    1.2.2 HPV DNA檢測(cè)取保存液中脫落細(xì)胞標(biāo)本1.5ml,15 000r/min離心 10min,按照文獻(xiàn)[3]方法提取DNA。應(yīng)用低密度基因芯片技術(shù)進(jìn)行HPV檢測(cè)和基因型分析,包含HPV15種高?;蛐?、5種低危基因型和Cp8304基因型。檢測(cè)系統(tǒng)中的PCR擴(kuò)增,基因芯片雜交,洗膜及底物顯色的實(shí)驗(yàn)步驟,結(jié)果判讀見(jiàn)文獻(xiàn)[4]。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果

    2.1 HPV基因型分布和感染狀況

    在862例標(biāo)本中,共檢出19種HPV基因型。在正常組514例標(biāo)本中檢出HPV陽(yáng)性58例,基因型14種,HPV基因數(shù)73個(gè),前3位基因型依次是HPV11(17.81%)、HPV6(16.44%)、HPV42(9.59%)。其中低危型HPV占43.84%(32/73),高危型占50.68%(37/73);HPV單一感染占75.86%(44/58),多重感染占 24.14%(14/58),其中二重、三重感染分別占22.41%(13/58)和1.72%(1/58),并且以HPV11結(jié)合其它HPV基因型的多重感染最多見(jiàn),占20.69%(6/29),高危型多重感染率為48.28%(14/29)。異常組348例標(biāo)本檢測(cè)出HPV 225例,HPV基因型19種,HPV基因數(shù)310個(gè),居前3位基因型依次是 HPV16(21.61%)、HPV52(12.58%)、HPV58(10.97%)。構(gòu)成比 <1%的基因型是HPV39(0.97%)和HPV51(0.65%),其中低危型HPV占8.71%(27/310),高危型占88.71%(275/310)。HPV單一感染占71.11%(160/225),多重感染占28.89%(65/225),其中二、三、四重及以上感染分別占21.33%(48/225)、6.22%(14/225)和 1.33%(3/225)。在多重感染中以 HPV16結(jié)合其它基因型最為常見(jiàn),占16%(24/150),高危型多重感染率為82%(123/150)。異常組高于正常組高危型多重感染率(χ2=13.57,P<0.05)。見(jiàn)表1。

    表1 兩組對(duì)象感染HPV基因型分布情況(例)

    HPV基因 正常組(n=514)單一感染 多重感染 構(gòu)成比(%)異常組(n=348)單一感染 多重感染 構(gòu)成比(%)52 2 1 4.11 22 17 12.58 53 2 1 4.11 5 7 3.87 56 0 0 0.00 1 4 1.61 58 3 2 6.85 18 16 10.97 59 0 0 0.00 2 3 1.61 66 0 0 0.00 6 8 4.52 68 1 2 4.11 5 8 4.19低危型11 7 6 17.81 1 14 4.84 6 7 5 16.44 0 8 2.58 42 4 3 9.59 2 2 1.29其它Cp8304 3 1 5.48 5 3 2.58合計(jì)44 29 100 160 150 100

    2.2 HPV感染與子宮頸病變的關(guān)系

    在862例標(biāo)本中,HPV感染率是32.83%(283/862),正常組和異常組感染率分別是11.28%(58/514)和64.66%(225/348),兩組相比其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=299.33 ,P<0.05)。NILM、ASC - US、LSIL、HSIL和SCC 5組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。組間兩兩比較,NILM 與 ASC-US組,ASC-US與LSIL組,LSIL與HSIL+SCC組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( χ2=141.08,P<0.05; χ2=9.25,P<0.05;χ2=4.34,P< 0.05)。HPV 感染率隨宮頸病變級(jí)別升高,呈增高趨勢(shì),見(jiàn)表2。

    表2 細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果與HPV感染的關(guān)系

    3 討論

    宮頸癌發(fā)病率居女性惡性腫瘤第2位,其中80%發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家[5]。HPV已被普遍認(rèn)為是引起宮頸癌及其癌前病變的主要原因,99.7%的宮頸癌患者被發(fā)現(xiàn)有HPV感染,而HPV感染的基因型及感染持續(xù)時(shí)間與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)[6]。

    生殖道HPV感染非常普遍,在女性一生中,生殖道HPV感染的幾率>75%,且多數(shù)HPV感染能自然清除[7],但高危型HPV的持續(xù)感染會(huì)增加宮頸癌前病變及宮頸癌的發(fā)生,且不同的HPV基因型具有不同的致病力。因此,HPV基因型檢測(cè)是診斷和處理宮頸病變的重要依據(jù)。在所有HPV基因型中,目前已明確有15個(gè)型與宮頸癌相關(guān),屬于高危型,包括 HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82。但仍有一些HPV基因型因感染率較低,其致癌的危險(xiǎn)性有待于進(jìn)一步的研究。在世界范圍內(nèi)HPV16是引發(fā)宮頸癌的最主要的基因型,其次多數(shù)地區(qū)是HPV18。除這兩個(gè)基因型外,其他HPV基因型的分布存在明顯的地區(qū)差異[8]。在本研究中,細(xì)胞學(xué)異常組HPV感染率為64.66%,高危型HPV感染占88.71%,低危型占8.71%。最常見(jiàn)的基因型是 HPV16(21.61%),其次為 HPV52(12.58%),第3位是 HPV58(10.97%),而 HPV18感染率則較低,僅占5.81%。這與我國(guó)和亞洲其他地區(qū)的研究結(jié)果相一致,只是各型感染率略有不同[9]。在細(xì)胞學(xué)正常組中,HPV感染率為11.28%,低危型和高危型HPV基因型分別為43.84% 和50.68%,常見(jiàn)的HPV感染基因型是 HPV11、6、42和16。說(shuō)明即使宮頸細(xì)胞沒(méi)有異常情況下,HPV感染以低危型為主,高危型發(fā)病趨勢(shì)依然存在。提示對(duì)有性生活史的婦女即使無(wú)宮頸細(xì)胞學(xué)異常改變,HPV篩查及基因分型檢測(cè)也不容忽視。

    女性生殖道HPV感染存在基因型單一感染與多重感染。有學(xué)者認(rèn)為在宮頸癌的發(fā)生過(guò)程中HPV基因型多重感染比單一感染危險(xiǎn)度高,且多重感染患者出現(xiàn)持續(xù)感染的危險(xiǎn)性更大,而HPV持續(xù)感染是宮頸病變發(fā)生的主要原因[10]。本研究中,細(xì)胞學(xué)異常組與正常組HPV基因型多重感染分別為28.89%和24.14%,其中最多見(jiàn)的基因型在異常組是HPV16(16%),正常組是HPV11(20.69%),兩組均以二重感染為主(21.33%,22.41%),這與Hwang等[11]研究結(jié)果相似。而兩組的高?;蛐投嘀馗腥韭史謩e為82%和48.28%,存在差異,說(shuō)明HPV基因型多重感染與宮頸病變的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。而對(duì)于高危型HPV多重感染是否能加速宮頸病變的進(jìn)展,高危型與低危型 HPV混合感染時(shí),對(duì)宮頸病變的發(fā)展是否會(huì)起到一定的劑量-效應(yīng)協(xié)同作用,還都有待進(jìn)一步研究。

    宮頸病變是一種常見(jiàn)的婦科疾病,其發(fā)生與多種因素有關(guān),宮頸部位如果感染了特定基因型的HPV將會(huì)增加其病變發(fā)展為宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)[12]。本研究發(fā)現(xiàn),隨著宮頸病變程度的不斷增加,HPV的感染率亦伴隨著增加。從細(xì)胞學(xué)正常組11.28%到異常組64.66% ,顯著升高,而發(fā)展至宮頸鱗狀上皮癌,HPV感染率則達(dá)100%;且組間兩兩比較,NILM與ASC-US組、ASC-US與LSIL組、LSIL與HSIL+SCC組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,說(shuō)明HPV感染與宮頸病變程度增加呈正向關(guān)系,提示HPV感染與宮頸癌前病變及宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。同時(shí)本研究中還發(fā)現(xiàn),細(xì)胞學(xué)異常組出現(xiàn)的高危 HPV39、51、56、59、66基因型,在正常組沒(méi)有發(fā)現(xiàn);高?;蛐统鼿PV35、53、68外,其它HPV基因型出現(xiàn)率均高于正常組,而在正常組中常見(jiàn)的低危HPV11、6、42基因型和Cp8304,在細(xì)胞學(xué)異常組則明顯較低。提示一些HPV基因型出現(xiàn)在宮頸細(xì)胞學(xué)異常人群中較多,而在正常人群中出現(xiàn)較少或不出現(xiàn),有可能是引發(fā)高度宮頸病變或有較高的致癌性HPV;而出現(xiàn)在宮頸細(xì)胞學(xué)正常人群中較多,在宮頸細(xì)胞異常人群中出現(xiàn)較少或不出現(xiàn)的基因型有可能不致癌,進(jìn)一步提示各HPV基因型對(duì)宮頸上皮致病力不同。這些結(jié)論的證實(shí)還有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量并對(duì)HPV感染人群進(jìn)行跟蹤隨訪,了解HPV基因型的轉(zhuǎn)歸和發(fā)展。如果此結(jié)論成立,就可以了解本地區(qū)引發(fā)宮頸癌及癌前病變的高危HPV基因型和低危HPV基因型,幫助醫(yī)務(wù)人員根據(jù)患者所感染的HPV基因型,預(yù)見(jiàn)宮頸病變的發(fā)展,并對(duì)是否需要治療、治療后情況進(jìn)行評(píng)估。

    持續(xù)、高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生首要條件,從HPV感染癌前病變到宮頸癌的發(fā)生一般需要數(shù)年到十幾年,如果在此階段對(duì)HPV感染的基因型進(jìn)行早期篩查、早期診斷、及時(shí)治療,就可以極大程度地防止子宮頸癌的發(fā)生。

    1 田永強(qiáng),朱中元.以PCR為基礎(chǔ)的HPV檢測(cè)及其在宮頸癌篩查和治療中的價(jià)值[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué),2008,8(3):419 -422.

    2 Dell.G,Gaston K.Human papillomavirus and their role in cervical cancer[J].Cell Mol Life Sci,2001,58(12 -13):1923 -1942.

    3 Gravitt PE,Peyton CL,Alessi TQ,et al.Improved amplification of genital of genital human papillomaviruses[J].J C M,2000,38(1):357-361.

    4 周世媛,朱愛(ài)榮,薄立偉,等.低密度基因芯片檢測(cè)人乳頭瘤病毒基因型的研究[J].中國(guó)計(jì)劃生育學(xué)雜志,2012,20(5):342-345.

    5 喬有林.子宮頸癌篩查方法新進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2009,38(11):3-11.

    6 Walboomers JM,Jacobs MV,Manos MM,et al.Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide[J].J Pathol,1999,189(1):12 -19.

    7 Bouvard V,Baan R,Straif K,et al.A review of human carcinogens-Part B:biological agents.Lancet Oncol,2009,10(4):321 - 322.

    8 Wu Y,Chen Y,Li L,et al.Assisciations of high-resk HPV types and viral load with cervical cancer in China[J].J Clin Virol,2006,35:264-269.

    9 黃谷孫,林奕華,葉珊.宮頸炎患者人乳頭瘤病毒基因分型的研究[J].中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2008,9(3):189-192.

    10 Ho GY,Bierman R,Beardsley L,et al.Natural history of cervico vaginal papillomavirus infection in young women[J].N Engl J Med,1998,338:423 -428.

    11 Hwang HS,Park M,Lee SY,et al.Distribution and prevalence of human papillomavirus genotypes in routine pap smear of 2470 Korea women determined by DNA Chip[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2004,13(12):2153 -2156.

    12 Stoler MH.Human papillomaviruses and cervical neoplasia:a model for carcinogenesis.Int J Gynecol Pathol,2000,19:16 - 28.

    The study of relationship between human papillomavirus genotypes and cervical epithelial lesions

    Zhou Shiyuan1,Bo Liwei1,Wang Yanli1,Niu chengling1,Xie Jiansheng2,*,Chai Jian1
    1.Henan Research Institute for Population&Family Planning,Zhengzhou450000;2.Shenzhen Maternity&Infant Health Hospital

    *Corresponding author:Xie Jiansheng,Email:jinshengxie2000@yahoo.com.cn

    Objective:To investigate the cervical condition and genotypes of human papillomavirus(HPV)infection and explore the relationship between different genotypes of HPV infections and cervical epithelial lesions.Methods:Cervical exfoliated cells were collected from 862 outpatients and examined by thin-cytologic test,and the cervical cytological conditions were evaluated by The Bethesda System(TBS)as negative for intraepithelial lesion or malignancy((NILM)or different degrees of lesions.Low-density gene chip-based detection system for HPV genotypes(15 types of high-risk HPVs,5 types of lowrisk HPVs and CP8304)was employed to detect the HPV infections.Result:19 of 21 HPV genotypes were detected in 862 specimens.The most common HPV genotypes were HPV11,6,42 and 16 in NILM group,and HPV16,52 and 58 in cervical lesion group.The detection rate of HPVs in NILM and lesion group were 11.28%and 64.66%,respectively.The constituent ratios of single and multiple infections of HPV genotypes were 75.86%and 24.14%in NILM group,and 71.11%and 28.89%in lesion group,respectively.The high -risk HPV genotypes were the most prevalent HPV infections(88.71%)in lesion group.The distribution of different HPV genotypes varied with the different degrees of cervical lesions.Conclusion:There was a close relationship between the multiple infection of HPV genotypes and the development of cervical epithelial lesions.Infection of HPV(s)increased with the grade of cervical lesions.

    Human papillomavirus;Genotype;Cervical lesion

    10.3969/j.issn.1004 -8189.2012.11

    河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目

    2012-06-06

    *通訊作者:jianshengxie2000@yahoo.com.cn

    [責(zé)任編輯:張 璐]

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