蘇木乙酸乙酯部位的化學(xué)成分研究*

唐開亮 ，殷志琦 **，張 健 ，張慶文 ，蔡 璐 ，葉文才 ，4

1中國(guó)藥科大學(xué) 天然藥物化學(xué)教研室，南京 210009；2江蘇省中醫(yī)藥研究院 轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，南京 210028；

3澳門大學(xué)中華醫(yī)藥研究院中藥質(zhì)量研究國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，澳門 999078；

4暨南大學(xué) 中藥及天然藥物研究所，廣州 510632

蘇木為豆科云實(shí)屬植物蘇木（Caesalpinia sappan L.）的干燥心材，被《中國(guó)藥典》（一部）收載，為我國(guó)傳統(tǒng)中藥，具有去腫消炎、抗菌利膽、活血化瘀之功效。臨床上主要用于治療跌打損傷，經(jīng)閉痛經(jīng)，產(chǎn)后淤阻，胸腹刺痛，外傷腫痛[1]。此外，蘇木作為天然色素，廣泛用于食品、日化、皮革及植物染色等行業(yè)，在病理實(shí)驗(yàn)中還被用作細(xì)胞組織切片的染色劑[2]。國(guó)內(nèi)外學(xué)者針對(duì)蘇木的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)其主要含有蘇木素類、原蘇木素類、高異黃酮類、査耳酮類及其他黃酮類成分[3-5]。為進(jìn)一步探索其有效成分,本課題組對(duì)蘇木化學(xué)成分進(jìn)行了研究,從醇提物乙酸乙酯部位分離并鑒定15個(gè)化合物,其中化合物5～7、9～13為首次從蘇木植物中分離得到。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 藥材

蘇木藥材購自亳州藥材市場(chǎng)，產(chǎn)于安徽各地，經(jīng)中國(guó)藥科大學(xué)生藥教研室秦民堅(jiān)教授鑒定為蘇木Caesalpinia sappan L.的干燥心材，標(biāo)本保存于中國(guó)藥科大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室。

1.2 儀器與試劑

X-4熔點(diǎn)測(cè)定儀（溫度計(jì)未校正）；Bruker AV-500和AV-300型核磁共振儀；Agilent 1100 Series LC/MSD Trap質(zhì)譜儀。

柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；薄層色譜硅膠GF254（煙臺(tái)化工研究所）；Sephadex LH-20（美國(guó)Pharmacia公司）；所用試劑均為市售分析純。

1.3 提取與分離

干燥的蘇木飲片10 kg，80%乙醇加熱回流提取3 次，時(shí)間分別為 2 h、2 h、1.5 h，提取液合并、減壓濃縮至無醇味。濃縮液加適量的水，用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯部分（約1.0 kg）和水部分（約1.0 kg）。乙酸乙酯萃取部位（820 g）經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脫 （100∶0→100∶100），TLC 檢識(shí)，合并得到5個(gè)流份（Fr.1～5）。從Fr.5中經(jīng)硅膠柱色譜分得化合物 1（10 mg）、2（10 g）、3（10 mg）、4（1 g）。 Fr.2 經(jīng)硅膠柱色譜以石油醚-乙酸乙酯（100∶1→100∶100）梯度洗脫，Sephadex LH-20 柱色譜經(jīng)氯仿-甲醇（1∶1）純化，結(jié)合重結(jié)晶分別得到化合物 5（100 mg）、6（10 mg）、7（200 mg）、8（10 mg）、9（10 mg）、10（10 mg）、11（10 mg）、12（10 mg）、13（10 mg）。 Fr.3 經(jīng)硅膠柱色譜以二氯甲烷-甲醇（100∶1→100∶20）梯度洗脫，Sephadex LH-20 柱色譜以氯仿-甲醇（1∶1）為洗脫劑純化，結(jié)合重結(jié)晶得化合物14（50 mg）、15（10 mg）。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物5 白色針狀結(jié)晶 （甲醇），mp 288～290℃，ESI-MS m/z：455[M-H]-。1H-NMR（C5D5N，500 MHz） δ：5.50（1H，t，J=3.0 Hz，H-12），3.46（1H，m，H-3ɑ），2.64 （1H，d，J=10.5 Hz，H-18），1.26（3H，s），1.24（3H，s）1.07（3H，s），1.04（3H，s），1.01（3H，d，J=6.3 Hz，H-30），0.96 （3H，d，J=6.3 Hz，H-29），0.91（3H，s）。13C-NMR （C5D5N，125 MHz）δ：179.9 （C-28），139.3 （C-13），125.7 （C-12），78.2 （C-3），55.9（C-5），53.6 （C-18），48.2 （C-17），48.1 （C-9），42.5（C-14），40.0 （C-8），39.5 （C-19），39.4 （C-4），39.4（C-20），39.1 （C-1），39.0 （C-10），37.5 （C-7），37.1（C-22），33.6（C-21），31.1（C-23），28.8（C-15），28.7（C-2），24.9（C-16），23.8（C-11），23.8（C-27），21.4（C-30），18.6（C-6），17.5（C-26），17.5（C-29），16.6（C-24），15.5（C-25）。 以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]對(duì)照一致，確定化合物5為熊果酸（ursolic acid）。

化合物6 白色粉末 （甲醇），mp 308～310℃，Libermann-Burchard反應(yīng)顯紫色，與齊墩果酸對(duì)照品在TLC中的Rf值及顯色行為一致，且兩者混合熔點(diǎn)不下降，因此確定化合物6為齊墩果酸（oleanolic acid）。

化合物7 黃色針狀結(jié)晶（甲醇），mp 96～98℃，ESI-MS m/z：271[M-H]-。1H-NMR（CD3COCD3，300 MHz） δ：8.86（1H，s，8-OH），7.72（1H，s，H-9），7.61（1H，dd，J=8.8 Hz，H-5），7.42（2H，d，J=11.4，1.8 Hz，H-2′，6′），7.06（2H，d，J=11.4，1.8 Hz，H-3′，5′），6.65（1H，d，J=8.8 Hz，H-6），5.36（2H，d，J=1.8 Hz，H-2），3.82 （3H，s，4′-OCH3），3.88 （3H，s，7-OCH3）。13CNMR（CD3COCD3，75 MHz） δ：180.8（C-4），161.8（C-4′），157.3 （C-7），156.0（C-8a），136.5 （C-9），133.0（C-2′，6′），130.1（C-8），128.0（C-1′），124.2（C-5），117.2（C-3），115.2 （C-4a），115.1 （C-3′，5′），111.4（C-6），69.0（C-2），61.2（7-OCH3），55.8（4′-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]對(duì)照一致，確定化合物7的結(jié)構(gòu)為高異黃酮類化合物纏結(jié)素（intricatin）。

化合物9 無色針狀結(jié)晶（丙酮），mp 143～148℃，ESI-MS m/z：183[M-H]-。1H-NMR（CD3COCD3，300 MHz） δ：8.05 （1H，s，-OH），6.13 （2H，s，H-2，6），3.74（6H，s，3，5-OCH3），3.62（3H，s，4-OCH3）。13CNMR （CD3COCD3，75 MHz） δ：154.9 （C-1，3，5），132.6 （C-4），94.0 （C-2，6），60.6 （3，5-OCH3），56.2（4-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)[8]對(duì)照一致，確定化合物 9 的結(jié)構(gòu)為 3，4，5-三甲氧基苯酚（3，4，5-trimethoxyphenol）。

化合物10 淡黃色針狀結(jié)晶（丙酮），mp 111～112℃，ESI-MS m/z：181[M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz） δ：9.78（1H，s，-CHO），9.58（1H，s，4-OH），7.21（2H，s，H-2,6），3.84（6H，s，-OCH3）。13CNMR （DMSO-d6，75 MHz） δ：191.1（-CHO），148.1（C-3,5），142.1（C-4），127.1（C-1），107.6（C-2,6），56.4（-OCH3）。綜合以上波譜數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)[9]對(duì)照，確定化合物10的結(jié)構(gòu)為丁香醛（syringaldehyde）。

化合物11 黃色粉末 （甲醇），mp 80～82℃，ESI-MS m/z：177[M-H]-。1H-NMR （CDCl3，300 MHz） δ：9.64 （1H，d，J=7.5 Hz，-CHO），7.40（1H，d，J=15.9 Hz，H-8），7.13 （1H，dd，J=8.2，1.9 Hz，H-6），7.07 （1H，d，J=1.8 Hz，H-2），6.96 （1H，d，J=8.2 Hz，H-5），6.59 （1H，dd，J=15.9，7.7 Hz，H-7），3.97（3H，s，-OCH3）。13C-NMR （CDCl3，75 MHz） δ：193.5（-CHO），153.0（C-8），149.0（C-4），146.9（C-3），126.6（C-1），126.4（C-7），124.0（C-6），115.0（C-5），109.5（C-2），56.0（-OCH3）。 以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對(duì)照一致，確定化合物11的結(jié)構(gòu)為松柏醛（coniferylaldehyde）。

化合物12 白色粉末 （甲醇），mp 210～211℃，ESI-MS m/z：167[M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz） δ：7.42 （2H，m，H-2，5），6.81 （1H，d，J=8.0 Hz），3.84 （3H，s，-OCH3）。13C-NMR （DMSO-d6，75 MHz） δ：167.6（-COOH），150.4（C-4），147.0（C-3），123.6 （C-6），114.8 （C-5），112.8 （C-2），55.5 （-OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]對(duì)照，確定化合物12的結(jié)構(gòu)為香草酸（vanillic acid）。

化合物13 無色結(jié)晶 （甲醇），mp 205～209℃，ESI-MS m/z：197[M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，300 MHz） δ：7.20 （2H，s，H-2，6)，3.79 （6H，s，3，5-OCH3）。13C-NMR （DMSO-d6，75 MHz） δ：167.8（-COOH），147.3（C-3，5），139.5 （C-4），122.4 （C-1），107.1（C-2，6），55.9（3，5-OCH3）。 綜合以上波譜數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)[11]對(duì)照，確定化合物13的結(jié)構(gòu)為4-羥基-3,5-二甲氧基苯甲酸（4-hydroxy-3，5-dimethoxy bezoic acid）。

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