接觸低濃度苯系物工人血細(xì)胞計(jì)數(shù)和血漿中P16／CDKN2A蛋白含量的變化及其意義

于碧鯤，金永龍，國(guó) 佳，李 鵬，杜忠君，劉 穎

（1.廣東省深圳市龍崗區(qū)疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生科，廣東 深圳510182；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院腫瘤生物治療中心，吉林 長(zhǎng)春130041；3.吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)教研室，吉林 長(zhǎng)春130021）

接觸低濃度苯系物工人血細(xì)胞計(jì)數(shù)和血漿中P16／CDKN2A蛋白含量的變化及其意義

于碧鯤1，金永龍2，國(guó) 佳2，李 鵬3，杜忠君3，劉 穎3

（1.廣東省深圳市龍崗區(qū)疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生科，廣東 深圳510182；2.吉林大學(xué)第二醫(yī)院腫瘤生物治療中心，吉林 長(zhǎng)春130041；3.吉林大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)教研室，吉林 長(zhǎng)春130021）

目的：探討在低于職業(yè)接觸限值情況下，長(zhǎng)期接觸苯系物對(duì)工人血細(xì)胞計(jì)數(shù)和血漿中P16／CDKN2A蛋白含量的影響情況，為更好地進(jìn)行苯系物污染的監(jiān)測(cè)和監(jiān)督工作提供理論基礎(chǔ)。方法：選擇深圳市某印刷企業(yè)從事印刷作業(yè)工齡超過2年的50名工人作為接觸組，選擇該企業(yè)不接觸苯系物的50名行政和后勤工作人員作為對(duì)照組。對(duì)2組人員進(jìn)行血常規(guī)檢測(cè)；ELISA法檢測(cè)接觸組和對(duì)照組人員血漿中P16／CDKN2A蛋白含量；同時(shí)測(cè)定接觸組工作環(huán)境中苯系物的濃度。結(jié)果：接觸組和對(duì)照組工作環(huán)境中苯系物濃度均低于職業(yè)接觸限值；接觸組和對(duì)照組工人白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量和血小板計(jì)數(shù)均在正常范圍內(nèi)，2組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；接觸組工人血漿P16／CDKN2A蛋白含量均值低于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：在低于職業(yè)接觸限制情況下，長(zhǎng)期接觸低濃度苯系物對(duì)工人血細(xì)胞計(jì)數(shù)和血漿中P16／CDKN2A蛋白含量無(wú)明顯影響。

苯系物；P16／CDKN2A蛋白；血細(xì)胞計(jì)數(shù)

苯、甲苯和二甲苯常通稱為“苯系物”，存在于多種作業(yè)環(huán)境中，印刷業(yè)使用的油墨常采用含苯、甲苯和二甲苯等的溶劑作為稀釋劑，因此印刷作業(yè)工人在工作過程中會(huì)接觸到苯系物并可能引起潛在的危害［1－2］。苯系物的主要職業(yè)危害是引起造血系統(tǒng)發(fā)生病變，長(zhǎng)期接觸可以引起慢性中毒，早期常表現(xiàn)為白細(xì)胞減少為主的血細(xì)胞計(jì)數(shù)改變。此外，研究［3－6］表明：P16／CDKN2A 與苯中毒引起的白血病發(fā)病關(guān)系密切。隨著衛(wèi)生監(jiān)督部門對(duì)苯系物污染監(jiān)管力度的加大，多數(shù)企業(yè)污染水平均在職業(yè)接觸限值之下，但是迄今為止仍有有關(guān)低劑量苯系物接觸后對(duì)工人健康產(chǎn)生危害的報(bào)道［7－9］，因此，本文作者以深圳市的某印刷企業(yè)作為研究對(duì)象，觀察在低于職業(yè)接觸限值情況下對(duì)作業(yè)工人血細(xì)胞計(jì)數(shù)及血漿中P16／CDKN2A蛋白含量的影響，探討在該接觸水平的情況下對(duì)工人健康的影響，為更好地進(jìn)行苯系物污染的監(jiān)測(cè)和監(jiān)督工作提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 于2011年6月選擇深圳市某印刷企業(yè)的從事印刷作業(yè)的50名工人作為接觸組，包括印刷、絲印和過膠崗位，工齡均超過2年，其中男性31名，女性19名，年齡21～46歲，年齡中位數(shù)為31歲，工齡2～19年，工齡中位數(shù)為6年；選擇該企業(yè)不接觸苯系物的行政和后勤工作人員50名作為對(duì)照組，包括人事部、生控部、收發(fā)部、財(cái)務(wù)部、訂裝部、采購(gòu)部、統(tǒng)計(jì)部和報(bào)關(guān)部，其中男性25名，女性25名，年齡20～43歲，年齡中位數(shù)為29歲，工齡1～18年，工齡中位數(shù)為7年。接觸組和對(duì)照組人員在年齡、性別、工齡構(gòu)成方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。以上研究對(duì)象近2周內(nèi)均無(wú)發(fā)熱和感冒癥狀，不患有可能影響研究結(jié)果的疾病，如腫瘤、糖尿病和結(jié)核病等，未長(zhǎng)期服用特殊的藥物和保健品。

1.2 主要儀器及試劑 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞公司），GC2010型氣相色譜儀（日本島津公司），TWA－300型低流量空氣采樣器（江蘇省建湖電子儀器儀表廠），人P16／CDKN2A ELISA檢測(cè)試劑盒（美國(guó)Rapidbio公司），酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio Tek公司）。

1.3 作業(yè)環(huán)境監(jiān)測(cè) 按照GBZ 159－2004《工作場(chǎng)所空氣中有毒物質(zhì)監(jiān)測(cè)采樣規(guī)范》和GBZ／T160.42－2004《工作場(chǎng)所空氣中有毒物質(zhì)測(cè)定芳香烴類化合物》中規(guī)定方法，對(duì)作業(yè)環(huán)境含苯系物的6個(gè)工作崗位和對(duì)照組人員的9個(gè)辦公區(qū)域進(jìn)行空氣采樣和測(cè)定，每種毒物均采樣3份，用空氣采樣器（活性炭管法）采樣，采用溶劑解吸－氣相色譜法分析。

1.4 標(biāo)本的收集 接觸組和對(duì)照組人員每人采集靜脈血3 m L，分2個(gè)抗凝管存放，其中1 m L用于血常規(guī)檢測(cè)血細(xì)胞計(jì)數(shù)變化，另外2 m L血液樣本當(dāng)日3000 r·min－1離心30 min分離血漿，置于－20℃冰箱保存?zhèn)錅y(cè)。

1.5 血漿中P16蛋白含量的檢測(cè) 采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測(cè)，具體操作步驟按照試劑盒方法進(jìn)行：以P16／CDKN2A抗體包被酶標(biāo)板，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL，樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL，空白孔不加，除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃恒溫箱溫育60 min，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1 min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次，每孔加入底物A和底物B各50μL，37℃避光孵育15 min，每孔加入終止液50μL，15 min內(nèi)，在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度（A）值。在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)A值作為縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，年齡和工齡差異比較采用秩和檢驗(yàn)，性別差異比較采用χ2檢驗(yàn)，血常規(guī)結(jié)果組間比較采用單因素方差分析，血漿P16／CDKN2A蛋白含量組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 接觸組和對(duì)照組工作崗位環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果 苯系物監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示：接觸組各工作崗位的苯、甲苯和二甲苯濃度范圍均在短時(shí)間接觸容許濃度（PC－STEL）之下，合格率100%，其中苯和二甲苯濃度低于儀器的最低檢出限；對(duì)照組各工作區(qū)域的苯、甲苯和二甲苯濃度均低于儀器的最低檢出限，見表1。

表1 深圳市某印刷廠工作崗位苯系物檢測(cè)結(jié)果Tab.1 The detection results of concentrations of benzene series in one printing plant in Shenzhen city

2.2 接觸組與對(duì)照組人員血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果 接觸組與對(duì)照組人員的白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白含量（HGB）和血小板計(jì)數(shù)（PLT）均在正常范圍，接觸組的 WBC、RBC和PLT值低于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；接觸組HGB值高于對(duì)照組，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 深圳市某印刷廠苯系物接觸組與對(duì)照組人員血常規(guī)檢查結(jié)果Tab.2 The results of blood routine examination of benzene series of the subjects in exposed group and control group of one printing plant in Shenzhen city （n＝50，±s）

表2 深圳市某印刷廠苯系物接觸組與對(duì)照組人員血常規(guī)檢查結(jié)果Tab.2 The results of blood routine examination of benzene series of the subjects in exposed group and control group of one printing plant in Shenzhen city （n＝50，±s）

Group WBC（×109 L－1） RBC（×1012 L－1） HGB［ρB／（g·L－1）］ PLT（×109 L－1）Exposed 5.65±1.20 5.15±0.57 141.76±13.72 211.44±42.17 Control 5.76±0.75 5.18±0.81 135.92±17.10 220.42±53.92

2.3 接觸組與對(duì)照組人員血漿中P16／CDKN2A蛋白含量檢測(cè)結(jié)果 接觸組血漿P16／CDKN2A蛋白含量為（13.18±4.83）ng·L－1，低于對(duì)照組的（13.90±4.69）ng·L－1，但與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

在職業(yè)活動(dòng)中，苯及其同系物主要以蒸汽形態(tài)經(jīng)呼吸道進(jìn)入人體，少量可經(jīng)皮膚吸收，苯系物的慢性毒作用主要表現(xiàn)為對(duì)造血系統(tǒng)的損傷，如引起白細(xì)胞和血小板減少等，另外還可對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生影響，以及對(duì)皮膚黏膜的刺激作用［10］。國(guó)內(nèi)也有關(guān)于長(zhǎng)期低劑量接觸苯系物導(dǎo)致工人白細(xì)胞發(fā)生減少及對(duì)造血系統(tǒng)產(chǎn)生影響的報(bào)道［7－9］，這些報(bào)道的苯系物暴露水平均在職業(yè)接觸限值之下，但是暴露水平要高于本研究。本研究結(jié)果顯示：接觸組與對(duì)照組人員血中WBC、RBC、HGB和PLT均在正常范圍，接觸組人員血中WBC、RBC和PLT值低于對(duì)照組，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；接觸組人員HGB值高于對(duì)照組，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明在本研究的暴露情況下，苯系物接觸對(duì)血液系統(tǒng)無(wú)明顯的影響。

P16是細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶2A（cyclin－dependent kinase inhibitor－2A，CDKN2A）的別名，P16／CDKN2A基因位于9號(hào)染色體短臂21區(qū)域，屬于細(xì)胞周期素依賴性激酶4抑制物（inhibitor of CDK4，INK4）家族成員，其基因產(chǎn)物P16／CDKN2A蛋白能負(fù)向調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程，可以與細(xì)胞周期蛋白D競(jìng)爭(zhēng)CDK4和CDK6，從而阻止視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白的磷酸化并且阻止細(xì)胞進(jìn)入 S 期， 使 細(xì) 胞 發(fā) 生 G1期 阻 滯［11］。P16／CDKN2A與苯中毒和白血病的發(fā)病關(guān)系密切，在苯中毒和白血病患者中可以觀察到P16／CDKN2A基因甲基化水平增高的現(xiàn)象，而引起P16／CDKN2A基因轉(zhuǎn)錄減少，進(jìn)而可能導(dǎo)致P16／CDKN2A蛋白表達(dá)減少，使進(jìn)入G1期的細(xì)胞增多，導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖［6，12］。本研究以工人血漿中P16／CDKN2A蛋白含量為觀察指標(biāo)，探討長(zhǎng)期低劑量苯系物接觸后可能產(chǎn)生的毒性作用，結(jié)果顯示：接觸組工人血漿中P16／CDKN2A蛋白含量低于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果表明：在本研究的接觸情況下，對(duì)工人血漿中P16／CDKN2A蛋白含量無(wú)明顯影響。

本研究所選的研究對(duì)象為同一間企業(yè)，苯系物的污染控制較好，其中苯和二甲苯濃度均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于職業(yè)接觸限值，由于不同企業(yè)的情況不同，雖多數(shù)企業(yè)均能達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)，但是苯系物的濃度存在差別，而且苯、甲苯和二甲苯的混合比例也不盡相同，因此為更好地了解長(zhǎng)期低劑量苯系物接觸可能產(chǎn)生的健康危害今后還需要擴(kuò)大樣本量和選擇更為敏感的指標(biāo)進(jìn)行觀察和研究。

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Changes of blood cell count and P16／CDKN2A protein content in plasma of workers exposed to low concentrations of benzene series and significance

YU Bi－kun1，JIN Yong－long2，GUO Jia2，LI Peng3，DU Zhong－jun3，LIU Ying3
（1.Department of Occupational Health，Shenzhen Longgang District Center for Disease Control ＆Prevention，Shenzhen 510182，China；2.Center of Biological Therapy for Tumor，Second Hospital，Jilin University，Changchun 130041，China；3.Department of Health Toxicology，School of Public Health，Jilin University，Changchun 130021，China）

Objective Below the national health standards，to observe the changes of the blood cell count and P16／CDKN2A protein content in plasma of workers who long－term exposed to benzene series，and to provide theoretical basis for better monitoring and supervision in benzene series pollution.Methods 50 workers which worked on operating environment more than 2 years were selected as exposed group in one printing plant in Shenzhen，and 50 administrative and logistic staffs in the same printing plant were used as control group.The inspections were taken on white blood cell count，red blood cell count，hemoglobin content and platelet count in two groups by blood routine examination.The plasma P16／CDKN2A protein content in two groups were detected by ELISA assay.The concentrations of benzene，toluene and xylene in exposed group in the operating and non－operating environment were determined at the same time.Results The benzene，toluene and xylene levels in exposed and control groups were lower than the national health standards.The white blood cell count，red blood cell counts，hemoglobin contents and platelet counts in two groups were all in normal range and had no significant differences between two groups（P＞0.05）.The average content of plasma P16／CDKN2A protein of the workers in the exposed group was lower than that in control group，but there was no significant difference between two groups（P＞0.05）.Conclusion In the exposure condition，long－term exposure to low concentrations of benzene series has no significant effects on blood cell count and plasma P16／CDKN2A protein content of the workers.

benzene series；P16／CDKN2A protein；blood cell count

R994.6

A

1671－587Ⅹ（2012）05－0965－04

2012－02－21

國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金資助課題（30700672）；廣東省深圳市龍崗區(qū)科技局基金資助課題（YLL2010016）；吉林大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)資助項(xiàng)目（201103080）

于碧鯤（1979－），男，黑龍江省大慶市人，主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，主要從事勞動(dòng)衛(wèi)生與職業(yè)病研究。

劉 穎（Tel：0431－85619133，E－mail：yliu99＠jlu.edu.cn）