血清MFGE8與CA125、CEA對乳腺癌診斷價值探討

李杰寶 張家衡

乳腺癌(breast cancer)早期診斷是提高患者治愈率和降低死亡率的關(guān)鍵。乳腺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物的研究已取得迅速發(fā)展，但尋找特異性強(qiáng)、靈敏度高的理想標(biāo)志物仍是目前臨床醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)。

乳脂肪球因子8(human milk fat globule EGF factor Ⅷ，MFGE8)最早在小鼠乳房上皮細(xì)胞內(nèi)被發(fā)現(xiàn)[1]，隨后該蛋白在不同的物種內(nèi)獨(dú)立地被鑒定出來，并給予了不同的命名[2-5]，如 BA-46(人 )、PAS-6/7 或 lactadherin(牛 )、P47(豬 )，另外，在小鼠的精子細(xì)胞上，該蛋白根據(jù)其結(jié)構(gòu)功能也被命名為SED1(Secreted protein containing EGF repeats and Discoidin/F5/8 complement domains 1，SED1)[6]。目前，在乳腺癌患者的血清中發(fā)現(xiàn)，MFGE8水平明顯高于乳腺良性腫瘤患者和正常人群水平。為此，筆者對乳腺癌患者血清MFGE8、CA125和CEA進(jìn)行聯(lián)合檢測，探討其在乳腺癌診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 乳腺癌患者62例(乳腺癌組)，均為女性，平均年齡57.6歲，均經(jīng)病理確診。其中浸潤性導(dǎo)管癌48例，導(dǎo)管內(nèi)癌12例，浸潤性小葉癌2例。乳腺良性腫瘤患者49例(良性組)，均為女性，平均年齡53.4歲，亦經(jīng)病理確診。其中纖維腺瘤32例，乳腺腺病11例，漿細(xì)胞性乳腺炎6例。對照組105例，為筆者所在醫(yī)院保健體檢科同期女性健康體檢者，平均年齡47.5歲，體檢結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)乳腺疾病及其他腫瘤。各組一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 MFGE8、CA125和CEA檢測方法 晨起空腹采靜脈血，迅速分離血清，-20 ℃保存。采用美國羅氏E170及配套試劑，以電化學(xué)方法檢測CA125和CEA水平。方法簡述如下，采用雙抗夾心法，(1)生物素化的抗CA125單克隆抗體和釕(Ru)標(biāo)記的抗CA125單克隆抗體混勻，形成夾心復(fù)合物；(2)加了鏈霉親和素包被和微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上；(3)反應(yīng)混合液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管進(jìn)行測定。CEA檢測方法同CA125。血清MFGE8水平檢測采用親和素-生物素ELISA法，檢測試劑盒為武漢CUSABIO公司產(chǎn)品，酶標(biāo)儀為Thermo multiskan MK3。方法簡述如下，實驗操作按試劑盒說明書進(jìn)行，設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔(0 pg/ml，390 pg/ml，780 pg/ml，1560 pg/ml，3120 pg/ml，6250 pg/ml，12500 pg/ml，25000 pg/ml)和待測實驗組及對照組孔，分別加樣100 μl，37 ℃反應(yīng)120 min；棄去液體，甩干，每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液100 μl，37 ℃反應(yīng)60 min；洗板5次；依次每孔加底物90 μl，顯色，加終止液50 μl；雙波長比色測定OD值并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，查出相應(yīng)的濃度。

1.3 臨界值設(shè)定 CEA臨界值為3.4 ng/ml，CA125臨界值為25 U/ml，超過臨界值判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采取SPSS 13.0軟件行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以()表示，組內(nèi)行配對t檢驗，組間行成組t檢驗，計數(shù)資料采用檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組MFGE8、CA125和CEA血清水平比較 三項指標(biāo)的檢測結(jié)果分別在乳腺癌組與良性組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；在乳腺癌組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果見表1。

表1 三組間三項指標(biāo)檢測結(jié)果()

表1 三組間三項指標(biāo)檢測結(jié)果()

組別 MFGE8(pg/ml) CA125(U/ml) CEA(ng/ml)乳腺癌組(n=62) 6638.50±3529.30 34.58±31.26 4.39±3.25良性組(n=49) 199.35±102.36 8.69±7.26 1.30±0.90對照組(n=105) 201.58±99.35 8.99±7.43 1.40±0.70

2.2 各組MFGE8、CA125和CEA陽性率比較 乳腺癌組MFGE8、CA125和CEA的陽性率分別是65.4%、50.9%和30.3%，良性組分別為7.9%、5.5%、3.2%，對照組分別為1.2%、0.8%、0.3%，各組間兩兩比較，P均<0.05。2.3 MFGE8、CA125和CEA聯(lián)合檢測對乳腺癌診斷的價值及評價 三項標(biāo)志物對乳腺癌的診斷中(表2)，以MFGE8的敏感性最高(65.4%)，特異性以CEA最高(97.6%)。若三種標(biāo)志物任意兩兩聯(lián)合，均提高檢出敏感性，以MFGE8和CA125聯(lián)合最高(75.3%)，而特異性略有降低：若三者聯(lián)合，敏感性可以提高到85.3%，特異性降低不多(88.1%)，準(zhǔn)確性最高(91.9%)。

表2 乳腺癌組MFGE8、CA125、CEA的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性

3 討論

早期診斷、早期治療是提高乳腺癌患者生存率的關(guān)鍵[7]。乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的檢測可反映腫瘤的生物學(xué)特性，對指導(dǎo)治療、輔助診斷、判斷預(yù)后均有重要意義[8]。單一的腫瘤標(biāo)志物可能靈敏度、準(zhǔn)確性不夠高，器官特異性不夠強(qiáng)，聯(lián)合檢測可彌補(bǔ)單指標(biāo)檢測的不足。目前發(fā)現(xiàn)，與乳腺癌相關(guān)的標(biāo)志物有CEA、CA125、CA153、P53、TPS、乳清蛋白等，這些標(biāo)志物被廣泛應(yīng)用于乳腺癌的早期診斷和預(yù)后評估，但目前腫瘤的診斷還沒有一種絕對特異的腫瘤標(biāo)志物，大多標(biāo)志物敏感性高者特異性較低，而特異性高者敏感性亦較低，不能較好的對腫瘤作出診斷和鑒別診斷。為彌補(bǔ)單一腫瘤標(biāo)志物在臨床檢測中敏感性和特異性的不足，選擇MFGE8、CEA和CA153聯(lián)合檢測來診斷乳腺癌。

MFGE8是一種乳汁脂肪小球表面的親脂性糖蛋白，乳脂由分化的乳腺上皮細(xì)胞合成，然后經(jīng)膜包被分泌入乳導(dǎo)管腔，包被于脂滴表面的這層膜稱為乳脂肪球膜(MFGE)，主要由糖蛋白、蛋白、膽固醇、磷脂構(gòu)成[9]。乳脂肪球因子8(MFGE8)又稱lactadherin或SED1，是乳脂肪球膜(MFGE)主要的糖蛋白之一，由乳腺上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、不成熟樹突狀細(xì)胞分泌。盡管乳脂肪球因子最初發(fā)現(xiàn)于乳中，但它在乳中的具體作用還不是很清楚，不過在乳腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，MFGE8的分泌量顯著提高[10]。Kamran等[11]研究發(fā)現(xiàn)，MFGE8通過辨認(rèn)暴露于凋亡上皮細(xì)胞表面的絲氨酸與凋亡的上皮細(xì)胞結(jié)合，并促進(jìn)吞噬細(xì)胞對凋亡細(xì)胞的清除，缺乏MFGE8的小鼠乳腺組織凋亡的細(xì)胞數(shù)增多，乳腺退化和脂肪細(xì)胞再生受阻，并隨乳腺退化的進(jìn)行，乳腺組織出現(xiàn)炎癥。Newburg等[12]報道，MFGE8不僅能促進(jìn)凋亡上皮細(xì)胞的清除，還可抑制輪狀病毒，從而對乳腺起保護(hù)作用。MFGE8在乳腺癌細(xì)胞表面表達(dá)呈上調(diào)趨勢，其抗體能抑制該蛋白的作用。MFGE8能通過循環(huán)入血，因此，在乳腺癌患者血清中能檢測出較高水平，而在正常健康女性及乳腺良性腫瘤患者血清中，MFGE8水平低，兩者比較有顯著性差異[13]。本研究結(jié)果顯示，通過比較，作為乳腺癌診斷相關(guān)標(biāo)志物，MFGE8的敏感性最高(65.4%)，特異性以CEA最高(97.6%)。若三種標(biāo)志物任意兩兩聯(lián)合，均提高檢出敏感性，以MFGE8和CA125聯(lián)合最高(75.3%)，而特異性略有降低。若三者聯(lián)合，敏感性可以提高到85.3%，特異性降低不多(88.1%)，準(zhǔn)確性最高(91.9%)，所以認(rèn)為，MFGE8可以和CA125、CEA一同作為診斷乳腺癌的指標(biāo)，可作為乳腺癌聯(lián)合檢測的指標(biāo)之一，對乳腺癌的早期診斷具有重要的意義。既提高了敏感性，又提高了診斷符合率，可以為臨床診斷提供參考。考慮假陽性的影響，臨床應(yīng)結(jié)合影像學(xué)等檢查手段，提高診斷率，減少誤診率。

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