養(yǎng)心康片對慢性心功能不全模型兔心肌細胞超微結構的影響*

任培華 冼紹祥 孫敬河 楊忠奇

（1.廣州醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510120；2.廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510405）

慢性心力衰竭是由于多種原因引起的心室充盈或射血能力受損的一種臨床綜合征。養(yǎng)心康片是本課題組對應用中醫(yī)藥方法治療心衰進行了大量的臨床和實驗研究后取得的研究成果。研究顯示［1-3］，養(yǎng)心康片能劑量依賴性地改善心衰模型的血流動力學指標，延緩心衰的進程，降低模型動物血清一氧化氮水平，并可減輕心肌、肝細胞的水腫，改善肺瘀血；治療充血性心力衰竭的臨床總有效率為80%。本研究通過觀察養(yǎng)心康片對慢性心力衰竭模型兔左心功能和心肌超微結構的影響，進一步探討本方的作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物 實驗動物選用純種新西蘭兔，體質(zhì)量1.8～2.5 kg，雌雄各半，由廣州中醫(yī)藥大學實驗中心提供，許可證編號SCXK（粵）2008-0020。

1.2 藥物與儀器 養(yǎng)心康片（由紅參、黃芪、麥冬、五味子、毛冬青、益母草、葶藶子等組成，0.4 g/片，內(nèi)裝100片，每片相當于生藥2 g），廣州中一藥業(yè)有限公司生產(chǎn)?？ㄍ衅绽忻郎虾Ｊ┵F寶制藥有限公司生產(chǎn)（批號0905032H）。IE33彩色多普勒超聲診斷儀（美國飛利浦公司）；AO超薄切片，日立H-600透射電鏡。

1.3 分組與造模 實驗前適應性飼養(yǎng)3 d，將實驗動物隨機分成空白對照組和造模組（1∶5）。動物模型的建立參照 Mauric［4］方法，結扎冠狀動脈?？瞻讓φ战M只開胸，預置縫線后不結扎冠脈。造模成功后，將造模組隨機分成模型組、卡托普利組、養(yǎng)心康片低劑量組、養(yǎng)心康片中劑量組、養(yǎng)心康片高劑量組，每組5只。

1.4 給藥方法 各組在造模后第5日開始給藥，卡托普利組：給予卡托普利1.2 mg/kg；養(yǎng)心康片低劑量組給予養(yǎng)心康片0.17 g/kg；養(yǎng)心康片中劑量組給予養(yǎng)心康片0.51 g/kg；養(yǎng)心康片高劑量組給予養(yǎng)心康片1.53 g/kg。將藥物研磨成粉后加蒸餾水溶解，配成15 mL的溶液，每日1次灌胃，共4周?？瞻讓φ战M和模型組給予等體積的蒸餾水。

1.5 標本采集與檢測 （1）心臟彩超檢測。實驗結束后第2日行心臟彩超檢測。用3%戊巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉，胸部脫毛，備皮后仰臥位于診查床上，以探頭頻率1～5 MHz，行經(jīng)胸超聲心動圖檢查。M型超聲于胸骨旁長軸切面測量左室射血分數(shù)（LVEF）、左室短軸縮短率（LVFS）和左室舒張末容積（LVEDV），以上數(shù)據(jù)均測量3個心動周期取平均值。（2）透射電鏡觀察取模型兔的新鮮心臟左室前壁近心尖處的心肌組織，大小為1～2mm3，3%戊二醛固定，制作電鏡標本后觀察。電鏡標本的制作和觀察由廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院電鏡室協(xié)助完成。

1.6 統(tǒng)計學處理 應用SPSS15.0軟件。實驗數(shù)據(jù)以（）表示，應用單因素方差分析。多組間計量資料均數(shù)先進行方差齊性的Levene檢驗，方差齊時，采用LSD法；方差不齊時，采用Tamhane’T2法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各組LVEDV、LVEF和LVFS比較 見表1。模型組的LVEDV最高，空白對照組的LVEDV最低，卡托普利組、中劑量組和高劑量組與模型組比較，其間LVEDV的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。各組間LVEF和LVFS比較，空白對照組最高，模型組最低，中劑量組和高劑量組與模型組比較，其差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。中劑量組和高劑量組與卡托普利組比較，LVEF和LVFS值的差別有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

表1 各組LVEDV、LVEF、LVFS 比較（）

表1 各組LVEDV、LVEF、LVFS 比較（）

與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與卡托普利組比較，▲P＜0.05。

組別 n LVEDV（mL） LVEF（%） LVFS（%）空白對照組 5 2.20±1.14 83.60±2.79 48.20±3.27模型組 5 4.12±1.19**64.80±12.07** 33.20±9.36**卡托普利組 5 2.90±0.75△ 68.60±4.93** 34.60±3.20**養(yǎng)心康片低劑量組 5 3.58±0.72* 70.20±8.13** 36.20±6.14**養(yǎng)心康片中劑量組 5 2.71±0.42△ 79.00±5.45△△▲ 43.60±5.41△△▲養(yǎng)心康片高劑量組 5 2.83±0.37△ 78.60±4.50△△▲ 43.60±4.50△△▲

2.2 各組心肌細胞超微結構 空白對照組：可見正常肌小節(jié)，肌絲完整，明暗帶結構清晰，Z線、M線清楚，可見線粒體及肌漿網(wǎng)，結構清楚，數(shù)量正常；細胞核核膜清楚，染色質(zhì)分布正常。模型組：肌小節(jié)變形，心肌細胞肌絲斷裂，排列紊亂，肌膜水腫，肌膜下局部線粒體增多，嵴消失，明暗帶結構模糊，Z線增粗，M線不清晰；細胞核核膜部分溶解、消失，邊緣欠規(guī)則，染色質(zhì)分布異常?？ㄍ衅绽M：心肌細胞肌絲有斷裂，排列較紊亂，肌膜水腫，肌膜下局部線粒體增多，嵴模糊部分肌細胞崩解，明暗帶結構模糊，細胞核核膜有溶解、消失，邊緣尚規(guī)則，染色質(zhì)分布異常。養(yǎng)心康片低劑量組：心肌細胞肌絲有斷裂，排列較紊亂，肌膜水腫，肌膜下局部線粒體增多，密度尚可，嵴模糊，明暗帶結構模糊，Z線增粗，細胞核核膜有溶解、消失，染色質(zhì)分布異常。養(yǎng)心康片中劑量組：心肌細胞肌絲偶有斷裂，排列尚可，肌膜輕度水腫，肌膜下局部線粒體數(shù)量可，密度正常，嵴膜欠清楚，嵴存在，明暗帶結構欠清楚。細胞核核膜偶有溶解失。養(yǎng)心康片高劑量組：肌小節(jié)可見，肌節(jié)結構基本清楚，肌絲尚完整，明暗帶結構較清晰，可見Z線、M線，線粒體及肌漿網(wǎng)，數(shù)量增多，結構正常，嵴結構基本清楚；細胞核核膜清楚，染色質(zhì)分布基本正常。

圖1 各組心肌細胞超微結構電鏡圖

3 討 論

慢性心力衰竭是由于多種原因引起的心室充盈或射血能力受損的一種臨床綜合征，是多種心臟疾病的終末階段。目前治療以提高心衰患者的生活質(zhì)量，改善遠期預后，降低死亡率為主要目標。養(yǎng)心康片以人參補益心氣、麥冬養(yǎng)心陰為君，臣以黃芪、五味子助人參、麥冬補氣養(yǎng)陰，佐以益母草、毛冬青活血利水，葶藶子瀉肺消腫；諸藥配伍共奏益氣養(yǎng)陰、活血利水之功效。實驗研究顯示［2］，大劑量養(yǎng)心康能明顯降低心衰模型動物的心率、收縮壓、左室舒張末壓，心室等容收縮期中室內(nèi)壓上升的最大速率（+dp/dtmax）及心室等容舒張期中室內(nèi)壓下降的最大速率（-dp/dtmax），且呈劑量依賴性。本實驗研究結果顯示養(yǎng)心康片可以降低心衰模型兔的舒張末容積，提高其左室射血分數(shù)和縮短率，改善心衰模型兔的心功能，療效優(yōu)于卡托普利。其療效與劑量呈一定的相關性。

電鏡結果顯示養(yǎng)心康片高劑量組肌小節(jié)可見，肌節(jié)結構基本清楚，肌絲尚完整，明暗帶結構較清晰，線粒體及肌漿網(wǎng)數(shù)量增多，結構正常，嵴結構基本清楚，未見明顯腫脹。細胞核核膜清楚，染色質(zhì)分布基本正常。而模型組肌小節(jié)變形，心肌細胞肌絲斷裂，排列紊亂，肌膜水腫，肌膜下局部線粒體增多，密度增高，嵴消失，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，部分肌細胞崩解，明暗帶結構模糊，細胞核核膜部分溶解、消失，邊緣欠規(guī)則，染色質(zhì)分布異常。卡托普利組、養(yǎng)心康片低劑量組和中劑量組的電鏡超微結構改變介于兩者之間。結果表明養(yǎng)心康片可以改善心衰模型兔心臟的超微結構，有防止心衰模型兔心室重構的作用，并與劑量有一定的相關性，可以作為慢性心力衰竭傳統(tǒng)療法的補充。

［1］冼紹祥，徐志均，黃衍壽，等.養(yǎng)心康對心功能不全動物模型的血流動力學研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2001，12（2）：91.

［2］徐志均.養(yǎng)心康對心衰兔模型的藥效學研究［J］.中華實用中西醫(yī)雜志，2005，18（6）：191.

［3］劉華榮，劉少波，阮蓉，等.養(yǎng)心康和保心康治療充血性心力衰竭的臨床研究［J］.中國臨床醫(yī)學，2001，8（3）：253.

［4］Mauric PY，Marjorie B，Stuart MC.Comparison of in vivo and in vitro haemodynamic function in experimental heartfailure：use of echocar-diography［J］.Cardio Res，1996，31：873.