同步固—液雙相泌尿生殖道支原體培養(yǎng)、鑒定和藥敏

陳玉蓮 徐濤 翁杏花 馬碧藍(lán) 李磊邦

(臺山市人民醫(yī)院檢驗科 廣東臺山 529200)

支原體(mycoplasma)是一類大小和結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜介于細(xì)菌和病毒之間,無細(xì)胞壁,可通過濾菌器,能在無生命的培養(yǎng)基中生長繁殖的最小原核微生物。支原體包括解脲脲原體(Uu)與人型支原體(Mh)是人類泌尿道和生殖道常見寄生菌之一,在特定情況下可致病,是引起非淋球菌性尿道炎(NGU)的主要病原體[1]。NGU發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過淋病,因泌尿道和生殖道不是無菌的,所以往往是混合感染。固體培養(yǎng)是支原體培養(yǎng)的“金標(biāo)準(zhǔn)”,液體培養(yǎng)補(bǔ)充支原體鑒定和藥敏。我院對6363例疑似非淋菌性尿道炎(NGU)患者用固-液雙相泌尿生殖道支原體培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗,報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2010年1月至2011年6月在本院就診的疑似非淋菌性尿道炎的6363例患者。其中,男性為皮膚科門診及泌尿外科門診患者,共1468例,年齡20～60歲,平均年齡40歲；女性為婦產(chǎn)科門診及皮膚科門診患者,共4895例,年齡20～55歲,平均年齡38歲。

1.2 標(biāo)本的采集

1.2.1 女性患者標(biāo)本 采集宮頸分泌物,暴露宮頸后,用無菌棉球?qū)m頸口外的粘液拭去,然后用無菌肉湯拭子插入宮頸管內(nèi)2cm處,旋轉(zhuǎn)拭子,15～20s后取出,置于配套的無菌試管中立即送檢。

1.2.2 男性患者標(biāo)本 取尿道分泌物,用無菌棉球拭去尿道口分泌物,用無菌肉湯拭子自尿道口插入1～2cm,旋轉(zhuǎn)拭子并停留20s取出置于配套的無菌試管中立即送檢。在采集標(biāo)本前,患者應(yīng)1周內(nèi)未使用任何抗菌藥物治療,且應(yīng)在排尿后2h采集。前列腺液由臨床醫(yī)生按摩前列腺后采集,放入無菌試管中立即送檢。

1.3 支原體固體、液體培養(yǎng)及藥敏試驗

固體培養(yǎng)基用上海恩科生物有限公司生產(chǎn)的解脲脲原體和人型支原體的選擇顯示培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)、鑒定和藥敏采用試劑為Mycoplasma IST2支原體試劑盒,由法國生物梅里埃公司生產(chǎn),藥敏試劑盒內(nèi)有9種抗菌藥物,即強(qiáng)力霉素、交沙霉素、氧氟沙星、紅霉素、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、阿齊霉素、克拉霉素、原始霉素。實驗室具體操作和結(jié)果判斷嚴(yán)格按照支原體試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 方法

將取自女性的宮頸拭子、男性尿道拭子或前列腺液,同時接種在固體培養(yǎng)基(解脲脲原體/人型支原體)和Mycoplasma IST2支原體液體培養(yǎng),35℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)(固體培養(yǎng)放入CO2發(fā)生片在密閉的環(huán)境中會自動形成5%～10%的CO2環(huán)境)24～48h后。

1.5 結(jié)果觀察

固體培養(yǎng)基在低倍鏡下觀察菌落形態(tài),解脲脲原體—棕褐色海膽樣菌落(菌落中有沙粒狀物質(zhì))、人型支原體—油煎蛋樣菌落；液體培養(yǎng)基肉眼觀察染色變化,是否變紅,是否清亮；固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)相結(jié)合,固體培養(yǎng)看菌落、液體培養(yǎng)看鑒定和藥敏。

2 結(jié)果

2.1 支原體感染檢出率

在6363例標(biāo)本中,支原體陽性總數(shù)為2087例,陽性率為32.8%,具體的檢出情況詳見表1。兩者經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。

表1 6363例患者支原體培養(yǎng)陽性率[例(%)]

2.2 支原體對抗菌藥物的耐藥性

解脲脲原體、人型支原體、解脲脲原體和人型支原體混合感染,對9種抗菌藥物的藥敏試驗結(jié)果,見表2。

表2 2087例支原體屬對9種抗菌藥物體外的耐藥率[例(%)]

2.3 固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)相符率

固體培養(yǎng)主要解決混有其他微生物支原體感染,固-液培養(yǎng)相符率,見表3。

表3 固體、液體培養(yǎng)相符率(%)

3 討論

目前,從人類泌尿生殖道中分離出的支原體有5種。其中分離較高、致病性較強(qiáng)的主要是解脲脲原體和人型支原體。支原體可產(chǎn)生脲酶、IGA蛋白酶、磷脂酶,可引起泌尿系統(tǒng)感染、妊娠期感染、新生兒疾病、生殖道外感染等。通過開展支原體培養(yǎng)近13年臨床觀察,非淋菌性尿道炎遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過淋病,而且存在復(fù)合感染,快速準(zhǔn)確診斷是對因治療的關(guān)鍵。

采用液體培養(yǎng)基鑒定泌尿生殖道中的解脲脲原體(Uu)和人型支原體(Mh)是各級實驗室廣泛開展的檢驗項目,其是根據(jù)液體培養(yǎng)基和試條反應(yīng)杯的染色變化來判斷陽性和陰性,簡單方便。但由于泌尿生殖道不是無菌的,還有其他微生物,僅憑Uu為尿素陽性、Mh為精氨酸陽性作為鑒定的依據(jù)仍存在不足。因此,判斷支原體陽性的結(jié)論最終是建立在固體培養(yǎng)基上的典型支原體菌落。在檢驗時,如果混合其他微生物感染,則須將固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)相結(jié)合,以確保鑒定的準(zhǔn)確性。在檢驗的過程中,如果液體變紅且清亮,可以不用固體培養(yǎng)；如果液體變紅但渾濁,則需增加固體培養(yǎng),以確保檢驗的準(zhǔn)確性。

本文的試驗結(jié)果表明,泌尿生殖道支原體屬陽性檢出率為32.8%,其中Uu陽性率為75%、Mh陽性率為2%、Uu+Mh混合感染陽性率為26%。Uu陽性率明顯高于Mh和Uu+Mh陽性率,與何玥等[1]報道一致。

支原體無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),對以破壞細(xì)胞壁為主要的抗菌藥物,如青霉素、頭孢菌素等β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物天然不敏感,因此,不宜選用β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物治療[2～3]。本試驗結(jié)果表明,常規(guī)治療支原體感染的抗菌藥物中,喹諾酮類抗菌藥物作用機(jī)制為抑制微生物DNA旋轉(zhuǎn)酶,由于使用方便,在國內(nèi)外應(yīng)用較為廣泛。但由于我國喹諾酮類抗菌藥物在人類、動物界的廣泛應(yīng)用,導(dǎo)致Uu對喹諾酮類抗菌藥物的耐藥性急劇上升[4～5]。表2結(jié)果顯示,Uu對環(huán)丙沙星和氧氟沙星耐藥率很高[6],環(huán)丙沙星和氧氟沙星敏感率僅為8.46%和16.14%；Uu最敏感的抗菌藥物為原始霉素、交沙霉素、克拉霉素、強(qiáng)力霉素、阿齊霉素,與國內(nèi)報道基本一致[7]。由此可見,我院應(yīng)慎用喹諾酮類抗菌藥物治療Uu感染,在治療的過程中,可結(jié)合患者的綜合情況選用抗菌藥物,以減少耐藥菌株的產(chǎn)生。強(qiáng)力霉素、交沙霉素是治療泌尿生殖道感染經(jīng)驗用藥的首選藥物。

[1] 何玥,潘偉芳,竇宇紅,等.2007年泌尿生殖道支原體感染狀況及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2009,19(13):1760～1761.

[2] 李蕾,鄒先彪,劉少卿,等.263例泌尿生殖道支原體藥敏試驗結(jié)果分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2006,16(8):947～948.

[3] 王維鵬,金正江.不孕不育患者解脲脲支原體培養(yǎng)及耐藥性研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2007,17(1):110～111.

[4] 費(fèi)迎明,趙文,金法翔,等.泌尿生殖道解脲脲支原體、人型支原體檢測與耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2008,18(9):1315～1316.

[5] 羅迪青,周曉琳,余敏君,等.不同培養(yǎng)時間與培養(yǎng)基pH值對體外實驗中喹諾酮類抗解脲脲支原體藥物敏感性的影響[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2007,17(9):1048～1050.

[6] 張有忠.泌尿生殖道支原體和脲支原體感染及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2010,20(16):2527～2528.

[7] 史訓(xùn)忠,李春仙,陳敏,等.解脲脲支原體耐藥性變化分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2009,19(3):325～327.

[8] 陳東科,孫長貴.實用臨床微生物學(xué)檢驗與圖譜[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2011:553～554.

[9] 叢玉隆.檢驗醫(yī)學(xué)高級教程[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2010:922～923.