高效液相外標法測定長效乳酸環(huán)丙沙星注射液的效果分析

徐秀榮 陳宗靜 潘琦雯 黃迪海 張從敬 劉霞 張再輝 張華 秦卓明③* （山東省健牧生物藥業(yè)有限公司 濟南 250100 ②濟南市生物藥品工程技術中心 ③山東省農(nóng)業(yè)科學院家禽研究所 濟南）

?

高效液相外標法測定長效乳酸環(huán)丙沙星注射液的效果分析

徐秀榮①②陳宗靜①潘琦雯①黃迪海①②張從敬①②劉霞①②張再輝①②張華①②秦卓明①②③*（①山東省健牧生物藥業(yè)有限公司 濟南 250100 ②濟南市生物藥品工程技術中心 ③山東省農(nóng)業(yè)科學院家禽研究所 濟南）

本研究以Inertsil ODS-3C18為色譜柱，乙腈-0.025mol/L磷酸溶液(13:87)(用三乙胺調節(jié)pH值至3.0±0.1)為流動相，277nm為檢測波長，利用峰面積，建立外標法定量檢測乳酸環(huán)丙沙星的含量。結果顯示：測得長效乳酸環(huán)丙沙星的線性范圍為10~60μg/ml(r=0.9995)，平均回收率為99.43%，RSD為0.21%(n=9)。說明高效液相外標法操作簡便、快速、重現(xiàn)性好、結果準確。

乳酸環(huán)丙沙星 高效液相色譜 外標法

乳酸環(huán)丙沙星是第三代喹諾酮類抗菌藥物，對革蘭氏陽性、革蘭氏陰性菌均有良好的抗菌作用，抗菌譜廣，抗菌力強，已廣泛用于畜禽及小動物的各種感染性疾病的治療。為進一步提高藥用效果，結合藥物緩釋技術，成功研制出長效乳酸環(huán)丙沙星注射液。目的是促使乳酸環(huán)丙沙星緩慢地釋放入動物體內，確保血藥濃度“峰谷”在一定時期保持在有效濃度范圍之內，且有效避免藥物短時間內濃度過高，超過治療血藥濃度范圍，產(chǎn)生毒副作用，進而達到毒副作用小、治療效果好、減少用藥次數(shù)，大大提高經(jīng)濟效益。

采用高效液相色譜法內標法測定乳酸環(huán)丙沙星注射液含量在農(nóng)業(yè)部《獸藥質量標準》2003年版[1]和其他文獻[3]中已有明確規(guī)定，但此法在檢測中需要配置對照品溶液及內標溶液，步驟繁瑣，費時費工，且成本較高。本文在參照《中國藥典》2005年版二部[3]及其他文獻[4]的基礎上，建立了一種新的高效液相色譜法外標法，只需配置對照品溶液，具有操作簡便、快速、重現(xiàn)性好、結果準確等特點。

1 儀器和試劑

（1）P1000高效液相色譜儀，SPD-UV100紫外檢測器，購自美國熱電儀器集團TSP公司。BP211D十萬分之一電子天平購自北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司。（2）環(huán)丙沙星對照品購自中國藥品生物制品檢定所，含量為84.9%，批號為130451-200802，裝量為0.1g。緩釋長效乳酸環(huán)丙沙星注射液中試產(chǎn)品，規(guī)格為10ml：0.4g，批號為20111101、20111102和20111103；乳酸環(huán)丙沙星注射液，規(guī)格為10ml：0.2g，批號為20111101、20111102和20111 103；上述產(chǎn)品均由山東省健牧生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。乙腈為色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司生產(chǎn)。其它試劑為分析純，水為重蒸餾水。

2 測定條件及方法

2.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-3C18柱；5μm，4.6×250mm。購自美國熱電儀器集團TSP公司。流動相：0.025mol/L磷酸溶液-乙腈(87:13)(用三乙胺調節(jié)pH值至3.0±0.1)，檢測波長為277nm，流速為1.0ml/min，進樣量：10μl。

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取環(huán)丙沙星對照品20mg，置200ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液；精密量取對照品溶液4.0ml，置10ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算，校正因子。

2.3 供試品溶液的制備和測定 精密量取樣品2.0ml(約相當于環(huán)丙沙星80mg)，置100ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液5.0ml，置100ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜圖見圖1，環(huán)丙沙星保留時間是11.3min。

圖1 緩釋長效乳酸環(huán)丙沙星注射液的HPLC色譜圖

3 結果

3.1 線性范圍 精密量取對照品溶液1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，6.0ml，分別置10ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別取10μl注入液相色譜儀，記錄各濃度的色譜峰面積，以環(huán)丙沙星的峰面積為縱坐標，環(huán)丙沙星濃度為橫坐標，根據(jù)色譜結果，繪制標準曲線(圖2)，并對峰面積進行回歸，計算線性回歸方程。環(huán)丙沙星濃度在10~60μg/ml呈良好的線性關系，其線性回歸方程及相關系數(shù)為：y=83091.7x+34799.4，r=0.9995 (n=6)。

圖2 緩釋長效乳酸環(huán)丙沙星注射液的標準曲線

3.2 精密度試驗 在上述色譜條件下，分別精密量取環(huán)丙沙星標準曲線中10、20、30μg/ml三種濃度的對照品溶液，依法測定峰面積，分別重復進樣6次，結果證實方法精密度良好，RSD分別為0.6%，0.8%，0.9%，n=6。

3.3 穩(wěn)定性試驗 分別精密量取制備好的同一份供試品溶液分別在0、2、4、8和24h依法進行測定，記錄峰面積，結果峰面積基本不變，RSD為0.6%，n=5。

3.4 重復性試驗 按供試品溶液制備方法制備同一批號環(huán)丙沙星供試品溶液5份，依法測定，記錄峰面積，結果證明重復性良好，RSD為0.9%，n=5。

3.5 回收率試驗 用已知含量的原料按處方配制成樣品含環(huán)丙沙星相當于標示量的80%，100%，120%，按2測定條件及方法項下的方法制備對照品溶液及供試品溶液，注入液相色譜儀，以峰面積計算含量，計算得平均回收率為99.43%，RSD為0.21%，n=9。

回收率試驗的結果可以看出此方法測定長效乳酸環(huán)丙沙星注射液中的環(huán)丙沙星是可行的，其所得數(shù)據(jù)是可靠的，該方法定量準確，回收率高。

3.6 樣品測定 精密量取不同批次的長效乳酸環(huán)丙沙星注射液及普通乳酸環(huán)丙沙星注射液樣品，按上述供試品制備方法制得供試品溶液，依法測定，計算；與農(nóng)業(yè)部《獸藥質量標準》2003年版中乳酸環(huán)丙沙星注射液的內標法對比，經(jīng)過統(tǒng)計學分析，二者沒有差異。詳細結果見附表。

附表 樣品含量測定結果(n=2) (%)

產(chǎn)品長效乳酸環(huán)丙沙星注射液普通乳酸環(huán)丙沙星注射液 批號201010012010100220101003201010012010100220101003 外標法99.299.599.798.699.298.3 內標法99.199.3100.198.799.198.5 相對偏差0.10.10.20.10.10.1

4 小結與討論

（1）本文對不同批次的長效乳酸環(huán)丙沙星注射液采用高效液相色譜法外標法對環(huán)丙沙星的含量進行檢測。通過對線性范圍的考察、精密度試驗、穩(wěn)定性試驗、重復性試驗和回收率試驗對測定方法經(jīng)過了驗證。結果表明，本方法重現(xiàn)性好、結果準確，符合測試要求，可用于長效乳酸環(huán)丙沙星注射液中環(huán)丙沙星的含量測定。又用普通乳酸環(huán)丙沙星注射液作了相應的對比，得出高效液相色譜法外標法同樣適用于普通劑型。（2）乳酸環(huán)丙沙星注射液的含量測定在農(nóng)業(yè)部《獸藥質量標準》2003年版[1]及其他文獻[3]中均采用高效液相色譜法內標法，此法在檢測中需要配置對照品溶液及內標溶液，浪費試劑、操作繁瑣。而高效液相色譜法外標法，只需配置對照品溶液，其操作簡便、快速、重現(xiàn)性好、結果準確。（3）本文的色譜條件同樣適用于長效乳酸環(huán)丙沙星注射液的有關物質的測定。

[1] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部．獸藥質量標準2003年版[S]. 2003: 75.

[2] 中華人民共和國藥典2005年版二部[S]. 北京: 化學工業(yè)出版社, 2005: 附錄28.

[3] 羅亞虹, 伍軍, 盧丹等. 高效液相色譜法測定乳酸環(huán)丙沙星注射液的含量[J]. 中國藥事, 2002, 16(2): 106-107.

[4] 鐘玉蓮, 楊穎, 劉麗芳等. 反相高效液相色譜法測定乳酸環(huán)丙沙星注射液的含量[J]. 中國藥品標準, 2000, 1(1): 42-43.

（2012–05–18）

S859.79+7

A

1007-1733(2012)09-0014-02