葛根總黃酮口服自微乳載藥系統(tǒng)的處方優(yōu)化

陳 倩 陳 晨 管清香 (吉林大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長春 130021)

自微乳化給藥系統(tǒng)(SMEDDS)是由藥物、油相、表面活性劑和助表面活性劑組成的混合物，在溫和攪拌或胃腸道蠕動(dòng)下，自發(fā)形成粒徑小于100 nm的O/W型微乳，能提高脂溶性藥物的生物利用度，是新型、有效的口服給藥系統(tǒng)〔1〕。葛根總黃酮為中藥葛根(Radix Pueraiae)的有效部位，具有抗心絞痛、降血壓、降低心肌耗氧量、改善缺血、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用，尤其在治療心腦血管疾病方面療效確切，安全性較高〔2〕。但其親水性和親油性均較差，口服給藥后，生物利用度很低，在很大程度上限制了其應(yīng)用。將葛根總黃酮制成自微乳制劑可改善其溶解度，提高生物利用度。本實(shí)驗(yàn)以自乳化時(shí)間、粒徑大小為指標(biāo)，篩選葛根總黃酮自微乳的最佳處方。

1 材料與方法

1.1 儀器 SK-1型快速混勻器，HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋，THZ-82水浴恒溫振蕩器(金壇市江南儀器廠);AB204-N電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);Malvern Nano-ZS型激光粒度分析儀(英國馬爾文儀器有限公司);Shmisadezu LC-10A Tvp高效液相色譜儀(日本島津)。

1.2 試劑 中鏈甘油三酯(MCT，德國利寶益公司);油酸乙酯(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，分析純);橄欖油(法克拉利司兄弟公司，食品級);Cremophor EL 35(德國BASF公司贈(zèng)送);Labrasol，Transcutol P(法國Gattefosse公司贈(zèng)送);吐溫-80(天津市華東試劑廠，化學(xué)純);PEG400(北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司，化學(xué)純);1，2-丙二醇(北京化工廠，分析純);葛根總黃酮(純度：61.17%，西安賽邦醫(yī)藥科技有限公司);葛根素標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢驗(yàn)所);甲醇(Fisher Scientific，色譜級);重蒸水。

1.3 方法

1.3.1 不同油相、表面活性劑及助表面活性劑的配伍研究

選擇中鏈甘油三酯、油酸乙酯、橄欖油三種油相;Labrasol、Cremophor EL 35、吐溫-80三種表面活性劑;PEG400、Transcutol P、1，2-丙二醇三種助表面活性劑以 40∶30∶30(W/W/W)于(37±0.5)℃水浴中渦旋混勻后加入100倍蒸餾水，中速磁力攪拌下乳化，目測法觀察自乳化效果〔3〕。篩選出穩(wěn)定的配伍進(jìn)行偽三元相圖的研究。

1.3.2 空白偽三元相圖的繪制 采用滴定法繪制偽三元相圖〔4〕。將表面活性劑與助表面活性劑按照一定的質(zhì)量比混合，作為混合表面活性劑，表面活性劑與助表面活性劑的重量比記為Km。分別精密稱取表面活性劑與助表面活性劑(Km分別為1∶1、3∶1、5∶1)混勻后，與油相按不同比例混合，于(37 ±0.5)℃水浴中在中速磁力攪拌下用37℃的蒸餾水進(jìn)行滴定，目測法觀察并記錄形成澄清透明、帶有少許淡藍(lán)色乳光微乳液臨界點(diǎn)時(shí)各成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(W/W)。以油相、混合表面活性劑、水相為相圖的三個(gè)頂點(diǎn)。采用Origin軟件繪制偽三元相圖，確定最佳Km值。

1.3.3 粒徑和Zeta電位的測定 自微乳樣品用37℃蒸餾水稀釋100倍后，采用馬爾文激光粒度分析儀進(jìn)行粒徑和Zeta電位測定。結(jié)果為樣品三次測定的平均值。

1.3.4 自乳化時(shí)間的測定 通過目測法觀察自乳化時(shí)間〔5〕。取1 g自乳化液，分散到100 ml的蒸餾水中，于(37±0.5)℃水浴中在中速磁力攪拌下用肉眼觀察完全分散的時(shí)間。結(jié)果為樣品三次測定的平均值。

1.3.5 最大載藥量的測定 色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);保護(hù)柱為 Dikama(4.6 mm ×10 mm);流動(dòng)相為甲醇-水(40∶60，V/V);柱溫為22 ℃;檢測波長為250 nm;流速為1.0 ml/min;進(jìn)樣量為20 μl。

將過量的葛根總黃酮加入到1 g空白自微乳化制劑中，密閉狀態(tài)下于37℃水浴恒溫振蕩器中振蕩72 h達(dá)到平衡，吸取上清液，4 000 r/min離心10 min，精密稱取一定量的樣品，用甲醇溶解定容至10 ml，0.45 μm微孔濾膜過濾后，采用HPLC法測定葛根總黃酮含量，平行操作3次，計(jì)算載藥量。

2 結(jié)果

2.1 不同油相、表面活性劑及助表面活性劑的配伍研究 見表1。中鏈甘油三酯和油酸乙酯為油相時(shí)獲得的處方遇水稀釋后可以發(fā)生自微乳化，說明中鏈脂肪酸酯的自微乳化能力強(qiáng)于長鏈的普通油酯。配伍的9個(gè)處方中，2號處方澄清度高，藍(lán)色乳光強(qiáng)，且組成處方的輔料口服安全性高，因此選擇中鏈甘油三酯為油相，Cremophor EL 35為表面活性劑、Transcutol P為助表面活性劑進(jìn)行偽三元相圖的研究。

2.2 空白偽三元相圖的繪制 根據(jù)2.1結(jié)果，確定了所用的油相為中鏈甘油三酯，表面活性劑為Cremophor EL 35、助表面活性劑為 Transcutol P。Km分別為 1∶1、3∶1、5∶1時(shí)空白SMEDDS的偽三元相圖見圖1。從圖1可見，Km增大，自微乳區(qū)面積增大，即Km越大形成的微乳區(qū)范圍越廣。但Km逐漸增大，體系中的表面活性劑比例增加，在一定程度上增加了對胃腸道的刺激性。在表面活性劑用量盡可能小的情況下，Km為1∶1時(shí)自微乳區(qū)域太小，故將自微乳處方中的Km值定為3∶1。

圖1 空白SMEDDS的偽三元相圖

表1 不同油相、表面活性劑及助表面活性劑的配伍結(jié)果

2.3 葛根總黃酮SMEDDS處方的確定 根據(jù)2.2結(jié)果，當(dāng)油相與混合表面活性劑之比大于5∶5時(shí)遇蒸餾水稀釋后無法發(fā)生自微乳化;油相與混合表面活性劑之比小于2∶8時(shí)雖然能發(fā)生自微乳化，但表面活性劑用量太大，綜合考慮多種因素將中鏈甘油三酯與Cremophor EL 35-Transcutol P混合表面活性劑(Km=3∶1)按2∶8、3∶7、4∶6、5∶5的比例混合，制備一系列自微乳化處方。以粒徑大小和自乳化時(shí)間為考察指標(biāo)確定優(yōu)化處方。

表2可見，表面活性劑的含量越高，得到的微乳粒徑越小，自乳化時(shí)間越長。其中，4號處方乳化后的粒徑明顯大于其他處方，且實(shí)驗(yàn)中外觀略渾濁;1、2、3號處方的粒徑均符合SMEDDS粒徑要求(小于100 nm)且相差不大。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，SMEDDS要在胃腸道內(nèi)自乳化并維持乳滴狀態(tài)，處方內(nèi)必須有30%～60%的表面活性劑，但大量的表面活性劑可能會(huì)刺激胃腸道，且導(dǎo)致體系黏度較大，熔點(diǎn)較高，自微乳化時(shí)間延長。故在表面活性劑與助表面活性劑盡可能小的前提下，以乳化速率較大及乳化后粒徑較小的3號處方為空白自微乳處方。

2.4 葛根總黃酮SMEDDS的制備工藝 按“1.3.5”的方法，經(jīng)HPLC法測定，最大載藥量為2.47%。故確定葛根總黃酮SMEDDS處方中葛根總黃酮的添加量為2.4%。

葛根總黃酮在油相中幾乎不溶，故稱取處方量葛根總黃酮在60℃水浴條件下溶于表面活性劑與助表面活性劑的混合物中，中速磁力攪拌下混勻，再將油相加入渦旋混合，充分溶解混勻后在37℃水浴中平衡1 h，得到葛根總黃酮SMEDDS(其中葛根總黃酮濃度為24 mg/g)。

表2 自乳化效率結(jié)果

圖2 葛根總黃酮自微乳的粒徑分布

2.5 葛根總黃酮SMEDDS處方的初步評價(jià) 圖2可見，葛根總黃酮SMEDDS處方含2.4%葛根總黃酮，39%油相(中鏈甘油三酯)，44%表面活性劑(Cremophor EL 35)，14.6%助表面活性劑(Transcutol P)。外觀為淡黃色澄清透明溶液，用37℃蒸餾水稀釋100倍后，得到澄清透明、具有藍(lán)色乳光的微乳液。葛根總黃酮SMEDDS的平均粒徑為27.31 nm，與載藥前平均粒徑26.82 nm相比，粒徑變化較小，且粒徑分布范圍窄;Zeta電位為－5.34 mv。

3 討論

中鏈甘油三酯對葛根總黃酮的自微乳化能力明顯強(qiáng)于長鏈的普通油酯，所以選其做為油相。實(shí)驗(yàn)中通過空白SMEDDS的偽三元相圖研究以及不同比例SMEDDS的自微乳效率考察，發(fā)現(xiàn)表面活性劑與助表面活性劑的比例Km=3∶1時(shí)較為理想。綜合考慮自微乳化效果、自微乳化時(shí)間以及穩(wěn)定程度，最終確定處方為：2.4%葛根總黃酮，39%油相(中鏈甘油三酯)，44%表面活性劑(Cremophor EL 35)，14.6%助表面活性劑(Transcutol P)。

1 Gao P，Akrmi A，Alvarez F.Characterization and optimization of AMG 517 supersaturatable self-emulsifying drug delivery system(S-EDDS)for improved oral absorption〔J〕.J Pharm Sci，2009;98(2)：516.

2 周毅生，賈永艷.葛根素固體分散體的制備及其體外研究〔J〕.中國藥學(xué)雜志，2003;38(1)：42-4.

3 崔淑霞，聶淑芳，張世忠，等.長春西汀自微乳化給藥系統(tǒng)的制備與體外評價(jià)〔J〕. 中國新藥雜志，2009;18(19)：1897-901.

4 魯 瑩，蔣雪濤.卵磷脂微乳的制備與理化性質(zhì)考察〔J〕.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2000;35(1)：52-5.

5 Bachynsky MO，Shah NH，Patel CI.Factors affecting the efficiency of selfemulsifying oral delivery system〔J〕.Drug Dev Ind Pharm，1997;23(8)：809-16.