老年前列腺癌患者超聲檢測血流分級與術后組織中基質金屬蛋白酶-2、-9表達的關系

袁 泉 詹正民 (武漢市第一醫(yī)院超聲科，湖北 武漢 430022)

前列腺癌發(fā)生發(fā)展過程中受多種蛋白的調節(jié)，其表達不僅與預后相關，而且對其生物學行為有重要調節(jié)作用?；|金屬蛋白酶(MMP)-2和-9是其家族的重要成員，對腫瘤的進展有重要作用，研究顯示MMP-2和-9的表達可能與血管生成密切相關〔1，2〕。超聲檢測血流分級的基礎依賴于腫瘤中的新生血管，同時超聲檢測作為術前診斷的重要技術，具有無創(chuàng)，操作簡單的特點，而且超聲在檢測中，可以有效地判斷血流〔3〕。本文通過超聲檢測前列腺癌老年患者血流分級，觀察其與術后癌組織中MMP-2和-9的表達關系，探討術前超聲檢測的價值，以期為臨床早期診斷及指導治療提供幫助。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2010年1月至2010年12月在南寧市第一人民醫(yī)院確診為前列腺癌并需要進行手術治療的老年患者共99例，年齡60～87歲，平均70.3歲。納入均符合WHO的診斷標準，并經病理學主治醫(yī)師再次確診。

1.2 超聲檢測方法 使用ALOKA Prosound F75型超聲儀，腔內探頭頻率6～10 MHz，分析血流分級。具體標準：0級：腫瘤內無血流顯示;Ⅰ級：腫瘤內1～2處點狀或條狀血流顯示;Ⅱ級：3～4條彩色血流顯示;Ⅲ級：5條以上彩色血流顯示〔4〕。

1.3 前列腺癌中MMP-2和-9的檢測方法 MMP-2和-9的濃縮液均購自北京中杉金橋生物技術有限公司，依不同配比稀釋后進行預實驗，選擇最適合的稀釋比例進行實驗的檢測。MMP-2和-9的檢測應用免疫組織化學技術的SP法。具體步驟：脫蠟后置于自來水中放置10 min，以3%H2O2去離子水進行孵育10 min，待高壓鍋蒸煮修復后分別滴加MMP-2或-9的一抗，室溫37℃孵育1～2 h或過夜，應用PBS緩沖液沖洗，每次5 min，共3次;加入二抗，室溫狀態(tài)孵育20 min，PBS緩沖液沖洗，每次5 min，共3次;加入辣根酶標記鏈霉卵白素，室溫狀態(tài)孵育約30 min，PBS緩沖液沖洗，每次5 min，共3次;DAB顯色后，應用自來水進行沖洗，蘇木素復染、脫水、透明、封片。實驗均由同一病理科主管技師進行操作，避免人為誤差。

1.4 統(tǒng)計學分析 應用SAS6.12進行t檢驗或χ2檢驗，多組間定量資料比較采用方差分析，并應用SNK法進行兩兩比較，同時對數據進行線性相關分析。

2 結果

2.1 前列腺癌中不同血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的關系 前列腺癌中MMP-2和-9的表達與不同血流分級相關，即隨著術前血流分級的增加，MMP-2和-9表達的陽性率明顯增加(P＜0.01)。見表1。

2.2 前列腺癌不同臨床病理特征中血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的差別 不同Gleason評分、增殖細胞核抗原(PCNA)、Ki67表達的前列腺癌血流分級與MMP-2和-9的表達差別均顯著(P＜0.01，P＜0.000 1)。見表2。

2.3 前列腺癌中血流分級與MMP-2和-9表達的相關性 經線性相關分析，血流分級與MMP-2表達的陽性率呈正相關性(r=0.49，P=0.029 3)，血流分級與MMP-9表達的陽性率呈正相關性(r=0.45，P=0.022 6)。

表1 前列腺癌中不同血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的比較( s，%)

表1 前列腺癌中不同血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的比較( s，%)

血流分級 n MMP-2 F值 P值 MMP-9 F值 P值0級 23 25.08±6.65 11.02 0.003 9 19.48±6.64 10.06 0.009 8Ⅰ級 25 35.43±6.54 34.16±7.46Ⅱ級 26 54.53±10.79 42.64±6.51Ⅲ級25 67.57±10.03 57.65±14.54

表2 前列腺癌不同臨床病理特征中血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的差別( s，%)

表2 前列腺癌不同臨床病理特征中血流分級與MMP-2和-9表達陽性率的差別( s，%)

臨床病理特征n 血流分級〔n(%)〕0～Ⅰ級 Ⅱ～Ⅲ級 χ2值 P值 MMP-2 t值 P值 MMP-9 t值 P值Gleason 43.694 7 ＜0.001 15.43 ＜0.000 1 12.32 ＜0.000 1≤6分 55 43(78.18)12(21.82)38.75±11.03 33.42±7.69＞7分 44 5(11.36)39(88.64)53.25±12.54 46.57±9.20 PCNA 13.763 0 0.000 2 10.85 0.002 9 11.29 0.000 2＜25% 47 32(68.09)15(31.91)39.85±8.74 33.02±9.84≥25% 52 16(30.77)36(68.23)49.86±8.93 44.35±7.64 Ki67 6.304 3 0.0120 8.54 0.010 3 9.07 0.008 6＜25% 49 30(61.22)19(38.78)40.32±7.06 33.95±8.73≥25% 50 18(36.00)32(64.00)48.75±7.39 43.53±8.29

3 討論

超聲對腫瘤的血流能較好地反映出來，已經在惡性腫瘤術前診斷中得到應用〔4〕，但是在前列腺癌術前分級中報道較少，而前列腺癌老年人多見，應用超聲術前診斷前列腺腫瘤簡便、易行，患者無痛苦，易于接受。實體腫瘤細胞的生長分為血管生長前期和血管化的浸潤性生長期，在血管前期，其原發(fā)腫瘤直徑常小于3 mm，中心部位主要靠彌散作用獲得營養(yǎng)，因此病變相對靜止，腫瘤生長緩慢，當腫瘤生長進入浸潤性生長期，此時將新生大量血管，此時影像學檢測血流將具有重要價值。當腫瘤細胞增殖時，MMP-2和-9以酶原形式分泌到基質中，不僅能夠在細胞表面活化其他促轉移的細胞因子，而且其還具有廣泛的底物特異性和強大的基質降解功能〔5，6〕。當腫瘤細胞惡變時，腫瘤細胞通過分泌MMP-2和-9來降解構成基底膜的成分，從而破壞了機體防御時腫瘤浸潤與轉移的自然屏障，促使腫瘤浸潤和轉移〔7，8〕。近來有研究顯示MMP家族對血管生成有重要促進作用〔2〕，因此，超聲檢測血流分級可能與MMP-2和-9表達有一定的相關性。本結果顯示前列腺癌隨著血流分級的增加，MMP-2和-9表達的陽性率明顯增加，且血流分級、MMP-2和-9的表達與腫瘤的Gleason評分、PCNA、Ki67表達密切相關，由于以上因素均與前列腺癌預后相關，因此術前檢測血流分級可能對判斷患者的預后有一定價值。超聲檢測是無創(chuàng)性檢測，能有效提供血流圖像，而且前列腺癌的癌組織中血管及血流均很豐富，也為超聲術前判斷腫瘤的生物學行為和指導治療提供了重要幫助。本實驗中顯示血流分級與MMP-2和-9的表達呈正相關性，這也直接證實了二者的協同作用，這與MMP-2和-9對血管生成的促進作用的研究結論一致，也為腫瘤血管學的超聲聲像研究提供了理論依據。綜上，術前對前列腺癌患者應用超聲檢測血流分級，能無創(chuàng)性地判斷腫瘤中血管形成情況，同時反映MMP-2和-9的表達特點，對于判斷腫瘤預后和指導臨床治療有一定價值。

1 Xiao LJ，Lin P，Lin F，et al.ADAM17 targets MMP-2 and MMP-9 via EGFR-MEK-ERK pathway activation to promote prostate cancer cell invasion〔J〕.Int J Oncol，2012;40(5)：1714-24.

2 劉愛東，龐久玲，劉士生.胃癌中基質金屬蛋白酶-9和CD105表達關系的研究〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(4)：886-7.

3 高 偉，黃 力.二維超聲和CT對前列腺癌術前分期的價值〔J〕.暨南大學學報(醫(yī)學版)，2005;26(6)：798-802.

4 麻繼紅，趙玉珍，紀小惠，等.腎癌彩色血流平均密度與病理組織學分級及微血管密度的對比研究〔J〕.中華超聲影像學雜志，2005;14(9)：682-4.

5 Wang Q，Diao X，Sun J，et al.Regulation of VEGF，MMP-9 and metastasis by CXCR4 in a prostate cancer cell line〔J〕.Cell Biol Int，2011;35(9)：897-904.

6 劉愛東，龐久玲，郭紅輝.基質金屬蛋白酶-9在胃癌中的表達及意義〔J〕. 現代中西醫(yī)結合雜志，2011;20(18)：2226-7.

7 Reis ST，Pontes JJ，Antunes AA，et al.MMP-9 overexpression due to TIMP-1 and RECK underexpression is associated with prognosis in prostate cancer〔J〕.Int J Biol Markers，2011;26(4)：255-61.

8 Aalinkeel R，Nair BB，Reynolds JL，et al.Overexpression of MMP-9 contributes to invasiveness of prostate cancer cell line LNCaP〔J〕.Immunol Invest，2011;40(5)：447-64.