中藥復(fù)方扶正平消膠囊揮發(fā)油成分的GC-MS分析

呂 磊，李 玲，田文君，張 海，李悅悅，張國慶，趙 亮(第二軍醫(yī)大學(xué)，.肝膽外科醫(yī)院藥材科，上海200438;.藥學(xué)院分析測試中心，上海200433)

扶正平消膠囊為第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院院內(nèi)制劑，由本院肝外二科陳漢教授經(jīng)多年臨床應(yīng)用驗(yàn)方“清消丸”(曾又名“腫瘤丸”)改變劑型而得。扶正平消膠囊由黃芪、吳茱萸、桃仁、浙貝母、白芍等28味中藥組成，針對(duì)中醫(yī)學(xué)所稱腫瘤患者氣滯血瘀、熱度內(nèi)蘊(yùn)、肝氣疏泄、氣陰兩虛的病機(jī)理論，采用行氣破血、扶正抗邪的抗癌中藥對(duì)癥治療，并結(jié)合臨床長期研究，篩選精煉組方而成，具有扶正祛邪，活血散結(jié)的功效。我院曾對(duì)原方進(jìn)行過較為深入的基礎(chǔ)和臨床研究，證明其能延長肝癌鼠的生存期［1］。

扶正平消膠囊組方中含有眾多富含揮發(fā)油成分的藥材，如莪術(shù)、三棱、紅花、千年健、川芎等。現(xiàn)代藥理研究表明，許多揮發(fā)油成分具有抗腫瘤活性［2］。扶正平消膠囊在我院用于治療肝臟腫瘤多年，且臨床效果較好，我們認(rèn)為，這與其中含有豐富的揮發(fā)油成分密切相關(guān)。本文運(yùn)用GC-MS技術(shù)首次對(duì)中藥復(fù)方制劑扶正平消膠囊中揮發(fā)油成分進(jìn)行分析、鑒別，為其質(zhì)量控制及進(jìn)一步的臨床研究提供了重要依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Thermo Trace GC Ultra氣相色譜儀，Thermo DSQⅡ質(zhì)譜儀(美國賽默飛世爾公司)，Xcalibur工作站。揮發(fā)油測定器(上海華連醫(yī)療器械有限公司);METTLER AE240型電子天平(德國梅特勒公司);LX-02藥材粉碎機(jī)(上海利祥公司)。

1.2 試藥 扶正平消膠囊由本院制劑室提供，批號(hào)20110401、20110601和20110801。所用試劑乙醚為分析純，水為重蒸水，載氣為高純氦氣。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油的提取 精密稱取扶正平消膠囊內(nèi)容物適量置于圓底燒瓶中，加蒸餾水500 ml，按照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄“揮發(fā)油測定項(xiàng)”中甲法提取揮發(fā)油［3］，得到淡黃色、味濃香的油狀液體，得油率為0.16%。取樣品10 μl以0.5 ml無水乙醚溶解。

2.2 氣相條件 色譜柱TR-5MS(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，分流比 10∶1，進(jìn)樣口溫度 250 ℃，程序升溫(起始溫度40℃ ，以10℃/min的速率升至150℃，然后以5℃/min升至280℃，并保持5 min)，傳輸線溫度260℃，載氣流速1 ml/min。

2.3 質(zhì)譜條件 電離方式:EI源;電子能量70eV;離子源溫度200℃;質(zhì)量范圍(m/z):50～500;檢測器增益1.0×105;溶劑延遲時(shí)間3 min;質(zhì)譜采集時(shí)間29 min。

2.4 扶正平消膠囊揮發(fā)油的GC-MS圖譜 取以乙醚溶解的扶正平消膠囊揮發(fā)油，按“2.2”和“2.3”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣1 μl，得到揮發(fā)油的總離子流圖，如圖1所示。

圖1 扶正平消膠囊揮發(fā)油總離子流圖(批號(hào):20110801)

2.5 扶正平消膠囊揮發(fā)油成分的GC-MS鑒別結(jié)果

每個(gè)組分的質(zhì)譜圖通過計(jì)算機(jī)檢索與標(biāo)準(zhǔn)NIST譜庫對(duì)照，以匹配度為基礎(chǔ)(SI＞800)結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行篩選。以各色譜圖扣除溶劑峰的全部峰面積作為100%，通過色譜峰面積歸一化法計(jì)算得出各化學(xué)成分的相對(duì)百分含量。共鑒定出73個(gè)化合物，并對(duì)峰進(jìn)行了歸屬，結(jié)果見表1。

表1 扶正平消膠囊揮發(fā)油成分鑒別結(jié)果

峰號(hào) 保留時(shí)間歸屬27 17.38 2-sopropenyl-4，8-dimethyl-1，2，3，4，5，6，8-octahydronaphthalene(min) 化合物名稱 分子式 分子量(m/z) 匹配度 相對(duì)含量(%)沒藥28 17.55 2，4-bis(1，1-dimethylethyl)-phenol C14H22O 206 823 0.71 桃仁29 17.70 (1S-cis)-1，2，3，5，6，8-hexahydro-4，7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-naphthalene C15H24 204 816 0.29 C15H24 204 833 0.27 三棱、沒藥、吳茱萸30 17.82 isoaromadendrene epoxide C15H24O 220 816 0.11 莪術(shù)31 18.30 ［S-(Z，Z)］-4，8-tetramethyl-3，7-cyclodecadiene-1-methanol C15H26O 222 818 1.11 莪術(shù)32 18.49 α-guaiene C15H24 204 856 2.27 莪術(shù)33 18.86 (-)-spathulenol C15H24O 220 813 0.09 川芎34 18.95 caryophyllene oxide C15H24O 220 810 0.02 莪術(shù)35 19.18 cis-5-ethenyl-5-methyl-4-(1-methylethenyl)-2-(1-methylethylidene)-cyclohexanone C15H22O 218 929 0.02 —36 19.25 8，9-dehydro-9-formyl-cycloisolongifolene C16H22O 230 851 0.24 莪術(shù)37 19.56 (8S)-1-methyl-4-isopropyl-7，8-dihydroxy-spiro［tricyclo［4.4.0.0(5，9)］decane-10，2'-oxirane］C15H24O3 252 837 0.27 —38 19.71 ［1R-(1α，4α，7α)］-decahydro-1，1，7-trimethyl-4-methylene-1H-cycloprop-azulene-7-ol C15H24O 220 857 0.02 吳茱萸39 19.93 Cadinol C15H26O 222 871 0.06 莪術(shù)40 19.97 muurolol C15H26O 222 808 0.06 吳茱萸41 20.17 α-cadinol C15H26O 222 833 0.26 莪術(shù)42 20.27 ［1R-(1α，4α，8α)］-Decahydro-1，4-dimethyl-7-(1-methylethylidene)-1-naphthalenol C15H26O 222 906 0.40 —43 20.46 neocurdione C15H24O2 236 917 0.01 莪術(shù)44 20.82 (E，E)-3，7-dimethyl-10-(1-methylethylidene)-3，7-cyclodecadien-1-one C15H22O 218 922 0.01 莪術(shù)45 21.05 3-butylidene-1(3H)-isobenzofuranone C12H12O2 188 929 0.12 川芎46 21.16 6，10-dimethyl-3-(1-methylethyl)-6-cyclodecene-1，4-dione C15H24O2 236 897 0.15 莪術(shù)47 21.37 aromadendrene oxide C15H24O 220 847 0.02 乳香48 21.49 ［3S-(3R，6E，10E，11R)］-3，4，5，8，9，11-hexahydro-3，6，10-trimethyl-cyclodeca-furan-2(3H)-one C15H22O2 234 865 0.04 莪術(shù)49 21.57 2-hydroxy-5-(3-methyl-2-butenyl)-4-(1-methylethenyl)-2，4，6-cycloheptatrien-1-one C15H18O2 230 857 0.02 血竭50 21.62 6-(1-hydroxymethylvinyl)-4，8-dimethyl-3，5，6，7，8-hexahydro-1H-naphthalen-2-one C15H22O2 234 872 0.02 紅花51 21.70 5，7，8-trimethyl-dihydrocoumarin C12H14O2 190 850 0.93 莪術(shù)52 21.99 4-methoxy-2-(1-phenylethyl)phenol C15H16O2 228 889 0.05 當(dāng)歸53 22.25 norethynodrel C20H26O2 298 916 0.01 —54 22.60 ［3S-(3α，6α，9α)］-3，4，6，7，8，9-octahydro-6-methyl-3，9-bis(methylene)-azulene［4，5］furan-2(3H)-one C15H18O2 230 927 0.35 —55 22.79 3，4-dihydroxy-5-(3-methyl-2-butenyl)-2-(3-methyl-1-oxobutyl)-4-(4-methyl-1-oxo-3-pentenyl)-2-cyclopenten-1-one C21H30O5 362 885 0.02 —56 23.31 1，4-dimethyl-7-(1-methylethyl)-azulene-2-ol C15H18O 214 843 0.17 —57 23.40 7-(4-methoxybenzylidene)bicycle［4.1.0］heptane C15H18O 214 920 0.15 三棱58 24.03 6-methoxy-2-(1-buten-3-yl)-naphthalene C15H16O 212 881 0.10 三棱59 24.09 13，14-dimethyl-2，11-dioxatricyclo［10.2.2.0(4，9)］hexadeca-3(8)，5，13，15-tetraene-4，7-dione C16H16O4 272 833 0.11 —60 24.33 1-heptatriacotanol C37H76O 536 852 0.04 —61 24.73 2，3-diethyl-4，5，6，7，8，9，10，11，12，13-decahydrobenzocyclododecene C20H32 272 860 0.03 —62 24.88 4-acetoxy-17-hydroxy-androst-5-ene-17-carbonitrile C22H31O3 357 880 0.04 —63 25.30 ［S-(E，Z，E，E)］-3，7，11-trimethyl-14-(1-methylethyl)-1，3，6，10-cyclotetradecatetraene C20H32 272 841 4.28 —64 25.46 ［1R-(1R，3E，7E，11R，12R)］-4，8，12，15，15-pentamethyl-bicyclo［9.3.1］pentadeca-3，7-dien-12-ol C20H34O 290 890 12.71 —65 25.81 9-cis-retinal C20H28O 284 843 0.01 —66 26.33 16H-kauran-16-ol C20H34O 290 884 0.02—

峰號(hào) 保留時(shí)間(min) 化合物名稱 分子式 分子量(m/z) 匹配度 相對(duì)含量(%)歸屬67 26.46 ursodeoxycholic acid C24H40O4 392 802 0.02—68 27.27 perhydro-2-acetyl-4，7，7，10-tetramethyl benzochromen-3-one C19H30O3 306 900 0.01 —69 27.37 ［1S-［1α，4α，8α］］-ethenyldecahydro-4-hydroxy-5，8-tetramethyl-2-methylene-1-naphthalenepropanol C20H34O2 306 875 0.44 —70 27.55 2-［4-methyl-6-(2，6，6-trimethylcyclohex-1-enyl)hexa-1，3，5-trienyl］cyclohex-1-en-1-carboxaldehyde C23H32O 324 912 0.15 —71 27.69 3-(octadecyloxy)propyl ester-oleic acid C39H76O3 592 844 0.22 —72 28.05 2，6，10，15，19，23-hexamethyl-tetracosa-2，6，14，18，22-pentaene-10，11-diol C30H52O2 444 922 0.02 —73 28.43 (3α，11α，12α，14α)-pregn-5-ene-3，8，11，12，14，20-hexol C21H34O6 382 897 0.01—

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化 首先考察了乙醚超聲法提取揮發(fā)油，此法操作簡單，但提取率低，提取物圖譜峰容量少，后采用經(jīng)典的水蒸氣蒸餾法，獲得良好收率。GC條件主要考察了程序升溫的過程，經(jīng)過一系列優(yōu)化，最后選擇了起始溫度40℃，以兩個(gè)階段升至280℃并保持3 min的過程，保證了采樣時(shí)間短，峰容量大，分離度好。MS條件主要是對(duì)質(zhì)譜檢測范圍的選擇，在查閱相關(guān)文獻(xiàn)［4～14］并分析了組方中可能的揮發(fā)油成分后，選擇了50～500(m/z)。

3.2 鑒別結(jié)果分析 通過GC-MS分析總共鑒別出扶正平消膠囊中73個(gè)揮發(fā)油成分。從組分上看，由于扶正平消膠囊為一個(gè)含28味藥材的大組方，其揮發(fā)油包含萜類、芳香族和脂肪族等幾乎所有揮發(fā)油種類。從含量來看，多種藥材共同含有較為常見的含量較高的揮發(fā)油成分，如 n-2，6，6-trimethyl-bicyclo［3.1.1］hept-2-ene為莪術(shù)、當(dāng)歸、千年健、乳香共有，占10.56%，3-carene為莪術(shù)、吳茱萸、當(dāng)歸共有，占6.11%。通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)［4～14］，我們對(duì)鑒別出的成分都進(jìn)行了藥材歸屬，共有48個(gè)成分得到了歸屬，且大多來自于莪術(shù)，其次為三棱。未歸屬成分多為分子量較大，出峰位置比較靠后的物質(zhì)，其母核多為扶正平消膠囊單方藥材中所含成分，而實(shí)際只檢測出其衍生物。如油酸存在于川芎中，但卻并未被檢測出，而檢測出了以油酸為母核的71號(hào)化合物3-(octadecyloxy)propyl ester-oleic acid。推測這些未歸屬成分可能是在組方復(fù)雜環(huán)境下通過化學(xué)反應(yīng)所形成的，也不排除是由藥材因?yàn)樯L環(huán)境影響，而帶入其中的外來物質(zhì)，還有待進(jìn)一步研究。

3.3 本研究采用配有EI源的GC-MS技術(shù)，結(jié)合計(jì)算機(jī)自動(dòng)檢索匹配功能，對(duì)扶正平消膠囊中的揮發(fā)油成分進(jìn)行了分析，初步鑒別出73個(gè)化合物，其中48個(gè)化合物得到歸屬。本研究進(jìn)一步闡明了扶正平消膠囊的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，為其質(zhì)量控制及臨床研究提供了參考。

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