46例甲狀腺乳頭狀癌中甲狀腺素受體β1表達(dá)的意義

任 蓉，高卓平，趙繼元

(1.西安市交通大學(xué)附屬廣仁醫(yī)院耳鼻喉頭頸外科；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，陜西 西安 710004)

46例甲狀腺乳頭狀癌中甲狀腺素受體β1表達(dá)的意義

任 蓉1，高卓平1，趙繼元2

(1.西安市交通大學(xué)附屬廣仁醫(yī)院耳鼻喉頭頸外科；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，陜西 西安 710004)

目的研究TRβ1在PTC標(biāo)本中的表達(dá)及其與PTC臨床特征之間的關(guān)系；初步探討TRβ1在PTC發(fā)生發(fā)展以及侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及其可能的機(jī)制，對(duì)PTC分子靶向治療中靶點(diǎn)的選擇提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法通過免疫組化染色檢測(cè)TRβ1在46例PTC組織中的表達(dá)，觀察其差異，并分析其與患者臨床資料中的性別、年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、包膜浸潤(rùn)及TNM分期之間的關(guān)系。結(jié)果PTC組織中的TRβ1表達(dá)陽性率高于癌旁組織(χ2=4.423，P=0.035)及正常組織(P<0.05)。TRβ1在PTC組織中的表達(dá)與患者性別及年齡無明顯相關(guān)性(P>0.05)；與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、包膜浸潤(rùn)以及TNM臨床分期存在明顯相關(guān)，轉(zhuǎn)移組中TRβ1表達(dá)率明顯高于非轉(zhuǎn)移組(P<0.05)。結(jié)論研究結(jié)果提示TRβ1有可能成為判斷PTC預(yù)后及復(fù)發(fā)的指標(biāo)。

甲狀腺激素受體；甲狀腺乳頭狀癌

甲狀腺乳頭狀癌(Papillary thyroid carcinoma，PTC)是近些年來最常見的臨床甲狀腺惡性腫瘤，約占全身惡性腫瘤的4%[1]，近些年來PTC的發(fā)病率呈明顯的上升趨勢(shì)，大約已占甲狀腺癌的60～70%。甲狀腺乳頭狀癌的特點(diǎn)是：發(fā)生轉(zhuǎn)移較早，同時(shí)PTC具有較高轉(zhuǎn)移率。有臨床研究發(fā)現(xiàn)：在很多已經(jīng)發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中有許多還并不能觸及甲狀腺癌原發(fā)灶。但是有時(shí)轉(zhuǎn)移病灶生長(zhǎng)緩慢，統(tǒng)計(jì)顯示有時(shí)腫瘤出現(xiàn)囊性改變，與頸部淋巴結(jié)核、囊性纖維瘤、淋巴結(jié)炎或各種囊腫樣病變很難區(qū)分，對(duì)診斷PTC術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)帶來了難度[5]。因此進(jìn)一步研究PTC侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制并探討針對(duì)PTC轉(zhuǎn)移的治療策略對(duì)提高PTC患者的生存率，改善PTC的療效均具有積極的意義。綜上所述，本研究的目的是檢測(cè)46例PTC和21例甲狀腺良性病變?cè)诿庖呓M織化學(xué)中TRβ1；評(píng)價(jià)TRβ1在協(xié)助判斷PTC預(yù)后中的臨床應(yīng)用價(jià)值；探討TRβ1與PTC轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究的病例及標(biāo)本來源于西安市第四醫(yī)院、西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院以及西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院耳鼻喉-頭頸外科2007-10～2010-10收治的46例PTC患者，其中男性19例，女性27例，年齡29～63歲，平均年齡為46.2±6.3歲。所有病例均為首次治療，術(shù)前均未行化療、放療等抗癌治療，并有相應(yīng)完整的檔案(包括臨床分期、病理分級(jí)和隨訪資料)。46例PTC患者TNM臨床分期情況：Ⅰ期10例，Ⅱ期19例，Ⅲ期15例，Ⅳ期2例。對(duì)照組：收集同期21例非癌性甲狀腺結(jié)節(jié)旁正常甲狀腺組織(以下簡(jiǎn)稱正常甲狀腺組織)，與上述46例PTC病例在年齡、性別等方面無明顯差異。

1.2 方法

1.2.1 取材 詳細(xì)描述并記錄切除的原發(fā)性甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)本的大體情況，并選出癌巢大、壞死少的PTC、癌旁甲狀腺組織及正常甲狀腺組織做為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本。

1.2.2 制作石蠟切片

1.2.3 免疫組化結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

TRβ1在PTC組織中的陽性表達(dá)部位位于腫瘤細(xì)胞胞核，陽性染色為淡黃色、棕黃色或棕褐色，呈顆粒狀或團(tuán)塊狀。所有切片均分別采用盲法閱片，由2名資深病理科醫(yī)生完成，當(dāng)結(jié)果不一致時(shí)，進(jìn)行協(xié)商并統(tǒng)一判定，最終結(jié)果以細(xì)胞核或胞質(zhì)呈棕黃(褐)色為陽性，每張切片在高倍鏡視野下計(jì)數(shù)細(xì)胞，先按染色強(qiáng)度打分：0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色，染色強(qiáng)度需與背景著色相對(duì)比；再按陽性細(xì)胞所占百分比打分：0分為陰性，1分為陽性細(xì)胞≤10%，2分為11%～50%，3分為51%～75%，4分為>75%。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比的乘積≥2分為免疫反應(yīng)陽性(+)。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

TRβ1蛋白在PTC組織及癌旁甲狀腺組織、正常甲狀腺組織中表達(dá)差異的比較采用列聯(lián)表χ2檢驗(yàn)；統(tǒng)計(jì)所收集原發(fā)性甲狀腺乳頭狀癌患者臨床資料中的性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等指標(biāo)，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用t檢驗(yàn)分析組間差異；TRβ1與臨床病理指標(biāo)關(guān)系研究根據(jù)不同的臨床指標(biāo)數(shù)據(jù)分別采用卡方檢驗(yàn)。并采用趨勢(shì)卡方檢驗(yàn)對(duì)各組TRβ1陽性表達(dá)率進(jìn)行趨勢(shì)檢驗(yàn)。分別列出χ2值、P值，P<0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TRβ1在PTC、PTC癌旁及正常甲狀腺組織中的表達(dá)

46例PTC組織中TRβ1陽性表達(dá)率54.35%(25/46)，癌旁甲狀腺組織中陽性表達(dá)率32.61%(15/46)，正常甲狀腺組織中的陽性率僅28.57%(6/21)。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，TRβ1表達(dá)陽性率PTC組織高于癌旁組織(χ2=4.423，P=0.035)；PTC組織高于正常組織(P<0.05)。(見圖1)

圖1 TRβ1在PTC、PTC癌旁及正常甲狀腺組織中的表達(dá)(*P<0.05)

2.2 TRβ1表達(dá)與PTC臨床病理指標(biāo)關(guān)系

TRβ1蛋白在PTC組織中的表達(dá)與患者的性別及年齡無明顯相關(guān)性(P>0.05)；與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、包膜浸潤(rùn)以及TNM臨床分期存在明顯相關(guān)，轉(zhuǎn)移組中TRβ1的表達(dá)明顯高于非轉(zhuǎn)移組(P<0.05)。(見表1)

表1 TRβ1在PTC標(biāo)本中的表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系

2.3 TRβ1表達(dá)免疫組化圖(見圖1)

圖1 不同組織中TRβ1表達(dá)情況

A：TRβ1在PTC中的強(qiáng)陽性表達(dá)(SP×200)

B：TRβ1在PTC中的陽性表達(dá)位于癌細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀。(SP×400)

C：TRβ1在正常甲狀腺組織中的陰性表達(dá)(SP×200)

D：TRβ1在正常甲狀腺組織中的陰性表達(dá)(SP×100)

3 討論

PTC是人類頭頸部疾病中的常見病和多發(fā)病，而PTC則是甲狀腺惡性腫瘤中最常見的一種，在臨床所有的內(nèi)分泌腫瘤中，PTC也是最常見的惡性腫瘤之一，PTC約占內(nèi)分泌惡性腫瘤的91.5%，而最常見的甲狀腺惡性腫瘤就是甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)。“具有明確的濾泡細(xì)胞分化，典型的乳頭及濾泡結(jié)構(gòu)，特征性胞核改變的甲狀腺惡性上皮腫瘤”是世界衛(wèi)生組織腫瘤學(xué)分類對(duì)甲狀腺乳頭狀癌的定義。其中定義關(guān)于“細(xì)胞核具有粗大的乳頭及特征性細(xì)長(zhǎng)分枝的標(biāo)志性形態(tài)，并包括核溝、核內(nèi)包涵體、毛玻璃樣核，并且細(xì)胞核同時(shí)具有程度不同的異型性”是典型的PTC標(biāo)志性乳頭狀結(jié)構(gòu)。對(duì)甲狀腺癌如果能夠做到早期、正確診斷，同時(shí)給予積極手術(shù)治療，則就可最大可能的改善甲狀腺癌患者現(xiàn)有的生存率，使其生存時(shí)間達(dá)到延長(zhǎng)的目的[2]。甲狀腺乳頭狀癌的一大顯著特點(diǎn)為早期即易發(fā)生轉(zhuǎn)移[3]，盡管目前乳頭狀癌的患者術(shù)后恢復(fù)情況較好，總體生存率高于其他常見惡性腫瘤，但仍有研究顯示發(fā)生轉(zhuǎn)移的PTC患者預(yù)后比未發(fā)生者差[4]，有報(bào)道，甲狀腺癌診為良性結(jié)節(jié)切除后殘癌率為50～70%。

甲狀腺癌患者多手術(shù)切除大部甲狀腺腺體，其甲狀腺功能受到影響，故服用甲狀腺素多需終身伴隨，才可維持正常體內(nèi)的甲狀腺素水平，而不影響患者身體機(jī)能。而甲狀腺素對(duì)腫瘤的影響近年已有文獻(xiàn)報(bào)道，甲狀腺素可能對(duì)腫瘤具有促進(jìn)作用。Cristofanilli等[6]發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性甲狀腺功能低下的女性患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)明顯下降，這些數(shù)據(jù)表明，甲狀腺激素的生物學(xué)作用可能為乳腺癌的一個(gè)重要病因。但并非所有的臨床流行病學(xué)研究都與這一結(jié)論一致，Robert等[7]通過研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺功能低下反而對(duì)肝癌是一個(gè)危險(xiǎn)因素，這提示甲狀腺素在不同的腫瘤中可能發(fā)揮的功能也不盡相同。Liu等[8]的研究表明，三碘甲狀腺原氨酸(T3)可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖，并可在一些乳腺癌細(xì)胞株中協(xié)同E2促細(xì)胞增殖的作用，這是甲狀腺素促進(jìn)腫瘤發(fā)展的直接證據(jù)。這些研究對(duì)腫瘤的預(yù)防和治療研究領(lǐng)域提供新的思路。甲狀腺素進(jìn)入細(xì)胞后發(fā)揮一系列的生物學(xué)功能與細(xì)胞內(nèi)的甲狀腺素受體(Thyroid hormone receptors，TRs)關(guān)系密切，因此細(xì)胞內(nèi)TRs的表達(dá)水平在細(xì)胞對(duì)甲狀腺素應(yīng)答中具有重要的作用。有研究顯示，在一部分乳腺癌患者的腫瘤組織中TRs出現(xiàn)異常的表達(dá)，特別是TRβ1的陽性率明顯高于正常組織，表明TRβ1可能會(huì)在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展中均發(fā)揮了重要的作用。

甲狀腺激素(T3)是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育和分化的重要激素，它的調(diào)節(jié)作用主要需依賴與TRs相結(jié)合才能發(fā)揮作用[9]。盡管甲狀腺激素很早即已被發(fā)現(xiàn)，但TRs的研究相對(duì)則滯后了許多。直到1986年，Weinberger等[10]首次成功克隆出TRs的cDNA，目前已知當(dāng)時(shí)獲得的基因?yàn)門Rβ1，位于人染色體3p24.1，編碼TR-β多個(gè)亞型蛋白。研究人員隨后進(jìn)一步使用Northernblot方法以TRβ1基因?yàn)樘结槞z測(cè)了多種正常組織，發(fā)現(xiàn)TRβ1基因在正常組織中廣泛表達(dá)。隨后有學(xué)者以TRβ1基因cDNA為探針，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞系及原發(fā)性腫瘤TRβ1基因mRNA的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明該基因在多種腫瘤中表達(dá)發(fā)生改變。這一發(fā)現(xiàn)為TRs的研究展開了一個(gè)廣闊的前景。

有研究表明，TRs在腫瘤中的異常包括突變和表達(dá)水平異常。腫瘤中TRs的單一突變較少，多數(shù)為多發(fā)突變，多數(shù)突變點(diǎn)位于TR與T3結(jié)合的LBD區(qū)，并發(fā)現(xiàn)其突變程度與腫瘤分期呈正相關(guān)，惡性程度越高其突變位點(diǎn)也越多[11]。突變的TRs由于失去了與T3的結(jié)合能力因此會(huì)表現(xiàn)為甲狀腺激素抵抗綜合征(Resistance to Thyroid Hormone Syndrome，RTHS)，由于本研究旨在探討正常的TRβ1在PTC中的表達(dá)及意義，因此在病理選擇中我們排除了RTHS的患者。Takano等[12]通過檢測(cè)PTC切除標(biāo)本也發(fā)現(xiàn)，PTC中TRβ1失活性的突變發(fā)生率較低，因此大部分PTC中的TRβ1為功能正常的TRs。

目前資料表明，TRβ1可能在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演了一個(gè)很重要的角色，但目前研究結(jié)果對(duì)其在腫瘤中的作用仍未能達(dá)成一致，在不同腫瘤中TRβ1表達(dá)情況的檢測(cè)結(jié)果也有較大差別：Lin等[13]發(fā)現(xiàn)TRB1基因在肝癌細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)，并且與抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的nm23基因表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；而Nauman等[14]則報(bào)道TRB1在大多數(shù)腎癌組織中呈低表達(dá)。Puzianowska-Kuznicka[15]發(fā)現(xiàn)PTC中TRβ1蛋白表達(dá)水平比正常甲狀腺組織明顯升高，但其在腫瘤中的作用機(jī)制則仍未闡明。總結(jié)目前文獻(xiàn)報(bào)道，TRβ1在不同的腫瘤中可能發(fā)揮了截然不同的作用，因此探討其在PTC中的表達(dá)情況及可能的機(jī)制對(duì)揭示TRβ1的功能具有重要的意義。

本課題研究通過檢測(cè)46例PTC、PTC癌旁以及15例正常甲狀腺組織發(fā)現(xiàn)，TRβ1表達(dá)陽性率PTC組織高于癌旁組織及正常組織，并且TRβ1蛋白在PTC組織中的表達(dá)與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、包膜侵潤(rùn)以及TNM臨床分期存在明顯相關(guān)，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中TRβ1的表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。由此推斷，TRβ1的高表達(dá)可能意味著PTC的侵襲轉(zhuǎn)移以及預(yù)后不良。但正如前文所述，TRβ1的功能及作用機(jī)制較為復(fù)雜，因此我們并不能單以此斷定TRβ1為促癌分子，而應(yīng)盡量從分子機(jī)制方面闡明其在PTC中可能發(fā)揮的作用。

當(dāng)然由于條件所限，本實(shí)驗(yàn)采集樣本量較少，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析缺乏大量長(zhǎng)期隨訪統(tǒng)計(jì)，故而雖然初步發(fā)現(xiàn)TRβ1與PTC的侵襲轉(zhuǎn)移和臨床TNM分期有明顯的相關(guān)性，但本實(shí)驗(yàn)只是對(duì)TRβ1在PTC進(jìn)展中可能的作用做了初步探討，TRβ1在PTC組織中的表達(dá)水平顯著升高，提示該蛋白可能在PTC的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用，這些仍需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)來揭示。

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Expressionandclinicalsignificanceofthyroidreceptorbeta1in46papillarythyroidcarcinoma

RENRong1，GAOZhuo-ping1，ZHAOji-yuan2

(1.The Guang Ren Affiliated Hospital of Xi'an Jiao Tong University Department of Otolaryngology Head and neck surgery；2.The First Affiliated Hospital of Xi'an Jiao Tong University Department of Otolaryngology Head and neck surgery，xi'an 710004 China)

ObjectiveThis research was aimed to investigate the expression of TRβ1 in PTC specimens and the relationship between the clinical characters of PTC，uncover the potential role played by TRβ1 in PTC progress and invasion and the possible mechanism of molecular targeted therapy of PTC，provide theoretical and experimental basis for the choice of targeted therapy against PTC.MethodsTRβ1 expressions in PTC tissues were assaied by immunohistochemical staining，the optical microscope to observe the differences between groups，and analysis of clinical data with the gender，age，tumor size，lymph node metastasis，capsule invasion and TNM stage.ResultsThe chi-square test indicated that TRβ1 expression in PTC tissue was higher than in adjacent tissues (χ2= 4.423，P=0.035)as well as in normal tissue (P<0.05).TRβ1 protein in PTC tissues illustrated no relevance with patient's gender and age (P>0.05)；but significant corelated to tumor size，lymph node metastasis，capsule invasion，and TNM clinical stage presence (P<0.05).ConclusionThe result suggests that there may be a prognostic and recurrencal potential in PTC，TRβ1 may play an important role in PTC progress，further investigation was required to confirmed.

Thyroid hormone receptors； Papillary thyroid carcinoma

R762

A

1672-2639(2012)03-004-05

2012-04-15；責(zé)任編輯趙菊梅]