• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    模擬胃環(huán)境中絲素蛋白復(fù)合材料的溶蝕機制

    2012-11-16 11:31:46陳忠敏張艷冬胡仁建
    絲綢 2012年4期
    關(guān)鍵詞:絲素聚乙烯醇胃液

    陳忠敏,張艷冬,羅 琴,胡仁建

    (重慶理工大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院,重慶 400054)

    模擬胃環(huán)境中絲素蛋白復(fù)合材料的溶蝕機制

    陳忠敏,張艷冬,羅 琴,胡仁建

    (重慶理工大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院,重慶 400054)

    以聚乙二醇為增塑劑,通過水相共混法制備了不同比例的絲素蛋白/聚乙烯醇/聚乙二醇復(fù)合材料。利用紅外光譜對復(fù)合材料進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征,并通過失重試驗、紅外光譜(FTIR)、X-射線衍射(XRD)、掃描電鏡(SEM)對復(fù)合材料在模擬胃環(huán)境中的溶蝕機制進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,絲素蛋白/聚乙烯醇/聚乙二醇復(fù)合材料的溶蝕降解首先從絲素蛋白的溶出、分解,并形成細(xì)微孔道開始,然后胃液通過細(xì)微孔道逐步深入并溶蝕聚乙二醇和聚乙烯醇。該絲素蛋白/聚乙烯醇/聚乙二醇復(fù)合材料具有潛在的藥物緩釋應(yīng)用前景。

    絲素蛋白;聚乙烯醇;聚乙二醇;藥物緩釋材料;溶蝕機制

    藥物緩釋給藥與傳統(tǒng)給藥相比,可以減少給藥次數(shù)、維持血液中藥物的濃度,以解決藥物濃度不穩(wěn)定的問題,提高藥物療效,降低藥物毒副作用,減輕病人多次用藥的痛苦,提高病人的用藥依從性,對于提高臨床用藥水平具有重大意義,成為近年來國內(nèi)外新藥物制劑領(lǐng)域的研發(fā)熱點之一[1]。藥物緩釋系統(tǒng)中的藥物載體通常有兩類,即合成高分子載體和天然高分子載體。合成高分子載體存在著生物相容性差、不易降解的缺點,其應(yīng)用范圍受限。天然高分子載體因具有優(yōu)良的生物降解溶蝕性、生物相容性等而成為藥物緩釋載體研究領(lǐng)域的熱點之一。

    再生蠶絲素蛋白(SF)是一種纖維狀蛋白質(zhì)材料,對人體無毒副作用、免疫原性,具有良好的生物相容性和生物降解性[2],可加工成各種形狀,具有成為理想的藥用緩釋載體材料的應(yīng)用潛力。研究發(fā)現(xiàn),SF在一般水中幾乎無溶解性,但在存在著各種活性蛋白酶的胃液等中時卻能快速溶解并水解,存在著降解性能和速率、降解產(chǎn)物不可控的缺點。國內(nèi)外研究中有篩選合適的固化工藝來提高絲素的結(jié)晶區(qū)比例法,以及通過復(fù)合材料性能互補的原理,將絲素與其他高分子接枝或混合法來改造其溶蝕降解性能。其中,分別利用聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)對絲素蛋白修飾改造的研究有不少報道[3-7]。PVA具有無毒、親水性高、成膜性好、生物相容性好及力學(xué)性能良好等特性,且可生物降解。PEG具有中性、無毒、良好的生物相容性和血液相容性,且是迄今為止已知的蛋白質(zhì)聚合物中蛋白和細(xì)胞吸收水平最低的聚合物。但這些化合物的修飾也只是讓絲素蛋白減緩了溶蝕降解的速度,卻不能達(dá)到逐步遞次溶蝕降解從而緩釋藥物的目的。在對SF、PVA、PEG結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上,本研究選用SF與PVA、PEG依次共混制備法,制備出了不同配比的SF/PVA/PEG復(fù)合材料,重點考察了材料在模擬胃液中的溶蝕現(xiàn)象、溶蝕過程變化,從而為緩釋藥物提供條件。

    1 試 驗

    1.1 材 料

    廢棄繭殼(西南大學(xué)生物技術(shù)學(xué)院);碳酸鈉、乙醚、無水氯化鈣、乙醇(市售,分析純);聚乙烯醇1799、聚乙二醇400(進(jìn)口分裝);胃蛋白酶(Sigma公司分裝);中性蛋白酶(國藥集團(tuán)南寧化學(xué)試劑有限公司);透析袋(進(jìn)口分裝),標(biāo)定截留相對分子質(zhì)量為14 000,使用前按使用說明在2 %碳酸氫鈉和l mmol/L EDTA(pH8.0)中煮沸10 min,并用蒸餾水洗凈。

    1.2 SF粉末的制備

    將繭殼用乙醚浸泡48 h除去蠟質(zhì),用蒸餾水洗凈,干燥后用無水乙醇在室溫下浸泡24 h除去部分有機物和雜質(zhì),洗凈、干燥。用0.5 %的Na2CO3將干凈繭殼煮沸30 min,3次,用蒸餾水洗滌干燥得到纖維狀絲素蛋白。用苦味酸胭脂紅溶液檢驗絲膠脫除情況。

    將絲素纖維溶解在CaC12/C2H5OH/H2O(摩爾比1︰2︰8)的有機無機混合溶劑中,將溶解液裝入標(biāo)定截留相對分子質(zhì)量為14 000的透析袋內(nèi)透析3 d,取出,使用中性蛋白酶進(jìn)行酶解,酶解條件為:pH6.0~7.0,溫度50~55 ℃。酶解完成后放入-40 ℃超低溫5~10 min使酶失活。用超濾膜過濾并用雙蒸水多次沖洗后,以冷凍干燥法得到SF粉末。

    1.3 SF/PVA/PEG復(fù)合材料的制備

    稱取PVA 2 g,在95 ℃水浴加熱至完全溶解,按照文獻(xiàn)[8]中得到的SF/PVA最佳配比(質(zhì)量比30/70)加入SF粉末,攪拌20 min。取混合溶液按照(SF+PVA)/PEG質(zhì)量比分別為90︰10、80︰20、70︰30加入PEG,繼續(xù)攪拌5 h,濃縮使其總質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到約10 %,得到SF/PVA/PEG共混液。

    取5 mL共混液放入自制成膜裝置中,室溫放置6 h后再放入烘箱,在50 ℃條件下干燥4 h,之后再放置在室溫條件下平衡10 h,得到膜片狀材料樣品。將制得的樣品放入干凈樣品袋密封保存、待用。

    1.4 SF/PVA/PEG材料溶蝕試驗

    將上述制備的不同配比的SF/PVA/PEG材料裁剪成長×寬×厚=10 mm×10 mm×30 μm的薄片,干燥12 h后取出稱重w,再將膜片放入溫度恒定在(37±1)℃、200 mL的模擬胃液中[模擬胃液按照2010藥典(附錄)配制],20 r/min下攪拌。分別在1、2、3、4 h取出膜片,沖洗干凈后干燥稱重為w1。根據(jù)下式計算失重率:

    同時分別將在人工胃液中溶蝕了1、2、3、4 h的各薄膜片樣品取出進(jìn)行儀器表征。

    1.5 表 征

    分析天平(SL202N上海明橋精密科學(xué)儀器有限公司)用于失重分析測試。傅立葉變換紅外光譜儀(Perkin Elmer Sectrum 100)用于復(fù)合材料結(jié)構(gòu)表征及對在人工胃液中溶蝕前后取出的膜材料結(jié)構(gòu)構(gòu)象變化進(jìn)行表征,采用KBr壓片法進(jìn)行。掃描電子顯微鏡(LEO-supra35 德國ZEISS公司生產(chǎn))用于在人工胃液中溶蝕前后取出的膜材料進(jìn)行表面結(jié)構(gòu)觀察。X-射線衍射(D/max 2500X射線衍射儀,日本理學(xué)公司)用于在人工胃液中溶蝕前后取出的膜材料進(jìn)行結(jié)晶變化考察。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 SF/PVA/PEG復(fù)合材料紅外表征

    圖1所示為SF、PVA、SF/PVA及SF/PVA/PEG材料的紅外光譜特征峰值。從圖1可以看出,SF/PVA 材料中出現(xiàn)了2種高分子的特征吸收峰,為3 264 cm-1(ν,O-H,吸收峰寬而鈍),1 662 cm-1(νC=O,酰胺Ⅰ),1 538 cm-1(δN-H,酰胺Ⅱ),1 406 cm-1(δC-H2)等,說明兩者已混合。而在添加了PEG成為SF/PVA/PEG材料后,除了屬于(ν, C-H)的吸收峰2 917 cm-1往低波數(shù)方向移動以外,其余各吸收峰與SF/PVA材料吸收峰相比較,均向高波數(shù)方向發(fā)生了移動。紅外光譜圖確認(rèn)了SF/PVA/PEG復(fù)合材料,同時顯示了SF和PVA的結(jié)合可能是通過基團(tuán)分子間作用力,如氫鍵等的相互作用而結(jié)合,SF的分子構(gòu)象發(fā)生了變化,在添加了較為微量的PEG后,材料中SF的分子構(gòu)象進(jìn)一步發(fā)生了改變,其羥基的吸收峰幅變寬。

    圖1 SF/PVA/PEG不同比例復(fù)合材料紅外光譜Fig.1 FTIR spectra of composite materials consisting of different ratios of SF, PVA and PEG

    2.2 模擬胃液中的溶蝕研究

    2.2.1 溶蝕失重試驗結(jié)果

    SF/PVA/PEG材料是以其作為緩控釋藥用載體材料應(yīng)用目標(biāo)而設(shè)計的,所以對該材料進(jìn)行了體外溶蝕性能測試,測試采用了模擬胃液。圖2為SF/PVA/PEG復(fù)合材料在模擬胃液中的溶蝕失重曲線。試驗中純SF不能成膜,其粉末狀物質(zhì)在放入人工胃液后大約2 min就完全溶解,確認(rèn)了SF在有蛋白酶存在的胃液環(huán)境中的快速溶解性。圖2顯示了純PVA膜、SF/PVA和不同配比的SF/PVA/PEG膜材料隨時間溶蝕的失重曲線。

    圖2 SF/PVA/PEG不同比例復(fù)合材料溶蝕失重曲線Fig.2 Weight loss curves of composite materials consisting of different ratios of SF, PVA and PEG

    由圖2可知,各種材料在1 h內(nèi)發(fā)生了較大幅度的溶蝕,到4 h時失重的增幅不大,這可能是其中的PVA和PEG具有較大的溶蝕抵抗所致。圖2d顯示純PVA膜在模擬胃液中的溶蝕4 h失重率為22.7 %,但SF/PVA(30︰70)復(fù)合材料4 h失重率增大到了46.2 %(圖2c),由于SF的添加量占30 %,如果30 %的SF完全溶失,PVA部分的失重也僅為16.2 %,這可能是由于SF和PVA之間是通過氫鍵而結(jié)合,使得PVA的一些親水性基團(tuán)被卷入分子線團(tuán)內(nèi)部,減少了和人工胃液中的強酸性液體及蛋白酶接觸所致。在SF/PVA比例仍為30︰70,再加入10 %的PEG,即(SF+PVA)/PEG配比為90︰10的復(fù)合材料中,4 h失重率為55.2 %(圖2b);(SF+PVA)/PEG配比為70︰30的復(fù)合材料4 h失重率達(dá)到了65.5 %(圖2a),說明在加入PEG后,PEG介入了SF與PVA間的結(jié)合中,PEG自身帶有很多羥基,使整個復(fù)合材料的羥基數(shù)量增大較多,在一定程度上提高了復(fù)合材料與胃液的接觸,增大了溶蝕速度。PEG含量越高則材料的溶蝕速度越快。這與紅外光譜結(jié)果一致,說明通過調(diào)節(jié)SF、PEG在整個復(fù)合材料系統(tǒng)中的含量,可以調(diào)節(jié)材料的溶蝕釋藥性。

    2.2.2 溶蝕機理研究

    考察SF/PVA/PEG復(fù)合材料溶蝕前后材料表面、基團(tuán)構(gòu)象、結(jié)晶性等的變化,對該復(fù)合材料在模擬胃液中的溶蝕機理進(jìn)行了研究。

    圖3所示(SF+PVA)/PEG各組分比例為90︰10(其中SF/PVA為30︰70)的共混材料的人工胃液溶蝕前后的SEM圖片。圖3a為溶蝕前形貌,可見表面光滑的膜片上均勻鑲嵌著很多顆?;蚓€段,認(rèn)為是SF片段;溶蝕1 h后,片段的數(shù)量有了明顯減少(圖3b);溶蝕4 h后,SF片段基本消失,膜片呈現(xiàn)出平整光滑狀態(tài),膜片變薄(圖3c)。這可能是SF/PVA/PEG復(fù)合材料的溶蝕首先通過SF片段的溶出、分解而進(jìn)行的。對照失重曲線結(jié)論,4 h后PVA和PEG也應(yīng)有部分溶蝕,即表面溶蝕導(dǎo)致了膜片變得薄且光滑。

    圖4所示為(SF+PVA)/PEG配比為90︰10的膜材料溶蝕前后紅外光譜圖。圖4a中觀察到1 651 cm-1(νC=O,酰胺Ⅰ),1 543 cm-1(δN-H,酰胺Ⅱ), 1 243 cm-1(δ, 酰胺Ⅲ)處SF的特征吸收峰和3 279cm-1(ν,O-H),2 917 cm-1(ν,C-H),1 419 cm-1(δC-H2),1 142 cm-1(δC-H)處PVA、PEG的特征吸收峰。圖4b中SF的特征吸收峰1 651 cm-1(νC=O,酰胺Ⅰ),1 543 cm-1(δN-H,酰胺Ⅱ),1 238 cm-1(δ,酰胺Ⅲ)較a減弱,而PVA、PEG的特征吸收峰變化不明顯,圖4c、d、e中SF的特征吸收峰逐漸減弱,而屬于PVA、PEG的特征吸收峰中位于3 500~3 200 cm-1處的-OH吸收峰略有變寬,可能是分子間結(jié)合所致。這表明復(fù)合材料是通過SF首先溶出溶蝕,然后PVA、PEG間相互有分子間結(jié)合,與此同時還在逐步緩慢溶出。這和SEM觀察結(jié)果一致。

    圖4 ((SF+PVA)︰PEG=90︰10)膜溶蝕前后紅外光譜圖Fig.4 FTIR spectra of composite materials ((SF+PVA)︰PEG=90︰10)before and after being erode

    圖5所示為(SF+PVA)/PEG(90︰10)膜材料溶蝕前后X-射線衍射圖譜。從圖5可以看出,未溶蝕的SF/PVA/PEG復(fù)合材料是一個SF和PVA重疊的寬衍射峰,溶蝕后的復(fù)合材料的衍射峰逐漸尖銳化,到溶蝕4 h后衍射峰更加尖銳、清楚。這可能是復(fù)合材料的非晶區(qū)在溶蝕過程中首先被降解,使得溶蝕后的材料晶區(qū)比例增加,推測膜材料成分中首先被溶蝕的是SF和PVA的非晶區(qū)域。隨著溶蝕的進(jìn)行,材料呈現(xiàn)出結(jié)晶部分增強的趨勢,將逐漸變得易碎。

    作為一種藥物緩釋載體材料,其溶蝕過程直接控制了藥物的釋放。通過對材料溶蝕機制的分析可以初步推測出材料負(fù)載藥物時的釋藥機制,從SEM觀察的材料表面形貌變化、紅外光譜分析的基團(tuán)構(gòu)象變化和X-射線圖譜結(jié)晶變化分析結(jié)果可看出,SP/PVA/PEG材料的釋藥機制是通過SP首先溶出降解,形成細(xì)微孔道,此時可釋藥;而后隨著PVA非晶區(qū)降解,以及PEG羥基結(jié)合外界水分、酶等形成溶蝕降解,使材料釋藥孔隙再次增大,此時藥物可繼續(xù)釋放;隨著材料結(jié)晶區(qū)區(qū)域緩慢溶蝕降解,藥物釋放也隨之緩慢進(jìn)行至全部溶出。

    圖5 ((SF+PVA)︰PEG=90︰10)膜溶蝕前后X-射線衍射圖譜Fig.5 XRD curves of composite materials ((SF+PVA)︰PEG=90︰10)before and after being eroded

    3 結(jié) 語

    采用水相共混的方法制備的SF/PVA/PEG復(fù)合材料,IR表征分析認(rèn)為PEG的加入增強了SF和PVA分子間相互結(jié)合。采用模擬胃液降解的方法探討SF/PVA/PEG復(fù)合材料的溶蝕現(xiàn)象和過程,結(jié)果表明,材料的溶蝕是通過SF溶出,形成細(xì)微孔道,而后隨著溶蝕時間延長PEG再緩慢溶出,同時逐步溶蝕PVA完成。以其溶蝕機制可推測釋藥機制,SF/PVA/PEG復(fù)合材料具備應(yīng)用于緩釋藥物載體的前景。

    [1] 楊立群,楊丹,孟舒,等.絲素蛋白作為藥物緩釋載體的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥生物技術(shù),2009,4(6):449-451.

    [2] 盧神州.絲素蛋白材料的生物學(xué)性能[J].絲綢,2007(12):58-62.

    [3] 顧卓,馮惠,王建軍,等.絲素-聚乙烯醇共混溶液靜電紡絲及其含銀納米纖維形態(tài)研究[J].合成技術(shù)及應(yīng)用,2008,23(1):11-13.

    [4] 薛華育,顧卓,戴禮興,等.再生絲素/聚乙烯醇共混納米纖維的制備及表征[J].高分子材料科學(xué)與工程,2007,23(6):240-243.

    [5] 寧麗,薛淼,黃海寧,等.皮膚再生膜的生物相容性系列研究[J].中國修復(fù)重建外科雜志,2000,14(1):44-48.

    [6] 張興,堵國成,陳堅.聚乙烯醇降解酶研究進(jìn)展[J].中國生物工程雜志,2003,23(2):69-73.

    [7] LI M Z, NORIHIKO M, DAI L X, et al. Preparation of porous poly (vinyl alcohol )-silk fi broin (PVA/SF) blend membranes[J].Macromolecular Materials and Engineering,2001,286(9): 529-533.

    [8] 陳忠敏,郝雪菲,范開.鑲嵌納米級再生絲素蛋白聚乙烯醇膜的制備及促細(xì)胞生長性能[J].生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志,2010,27(6):1292-1297.

    Dissolution mechanism of composite materials consisting of SF, PVA and PEG in the simulated gastric juice

    CHEN Zhong-min, ZHANG Yan-dong, LUO qin, HU Ren-jian
    (College of Pharmacy and Bioengineering, Chongqing University of Technology, Chongqing 400054, China)

    The composite materials consist of different ratios of silk fibroin (SF), polyvinyl alcohol (PVA) and polyethylene glycol (PEG) which were prepared through the water phase blending method with polyethylene glycol as the plasticizer. The transformation of the composite materials before and after dissolution were investigated by the weight loss test, FTIR spectroscopy, scanning electron microscopy (SEM), and X-ray diffraction (XRD).The results reveal that the composite materials dissolve beginning with the digestion,decomposition of SF and formulation of micro-pores, and then the gastric juice dissolves PEG and PVA step by step through micro-pores. The composite materials are looked forward to using in the drug control-release system.

    Silk fibroin; Polyvinyl alcohol; Polyethylene glycol; Drug control-release materials; Degradation mechanism

    TS149

    A

    1001-7003(2012)04-0001-04

    2011-12-15;

    2012-01-30

    重慶市高等學(xué)校優(yōu)秀人才支持計劃(2011CQ04);國家教育部留學(xué)回國人員科研啟動基金資助(2006CR01)

    陳忠敏(1968- ),女,教授,主要從事醫(yī)用藥用材料研究。

    猜你喜歡
    絲素聚乙烯醇胃液
    改性復(fù)合聚乙烯醇食品包裝膜研究進(jìn)展
    絲素蛋白改性羧基化棉織物的制備與表征
    藏藥佐太在模擬胃液、腸液中的汞溶出差異
    中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:28
    聚乙烯醇膠粘劑在育秧紙缽中的應(yīng)用
    天津造紙(2016年1期)2017-01-15 14:03:28
    早產(chǎn)兒胃液培養(yǎng)在早發(fā)性感染診斷中的價值
    瘤胃液在牛羊疾病中的臨床應(yīng)用
    絲素蛋白對重金屬離子吸附性能的研究
    蠶桑通報(2015年1期)2015-12-23 10:14:30
    聚乙烯醇/淀粉納米晶復(fù)合膜的制備及表征
    中國塑料(2015年3期)2015-11-27 03:42:15
    絲素蛋白微針溶脹給藥系統(tǒng)的研究
    絲綢(2015年7期)2015-02-28 14:56:30
    三種檢測方法在胃液隱血試驗中的臨床應(yīng)用評價
    99久久综合免费| 少妇人妻久久综合中文| 一级毛片电影观看| 久久久久网色| 一个人免费看片子| 久久中文字幕一级| 成人国产av品久久久| 亚洲精品乱久久久久久| 人妻人人澡人人爽人人| av线在线观看网站| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美日韩成人在线一区二区| 免费av中文字幕在线| 老司机影院成人| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲成国产人片在线观看| 美女福利国产在线| 亚洲伊人色综图| 国产三级黄色录像| 亚洲人成电影免费在线| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久久久久人人人人人| 91精品三级在线观看| 国产成人影院久久av| 人妻久久中文字幕网| 亚洲专区字幕在线| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产男女超爽视频在线观看| 国产97色在线日韩免费| 99久久99久久久精品蜜桃| 韩国高清视频一区二区三区| 妹子高潮喷水视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 99热网站在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 久久久久视频综合| 一本色道久久久久久精品综合| 久久久久国产一级毛片高清牌| 一级毛片电影观看| 黄色毛片三级朝国网站| 老司机影院成人| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲少妇的诱惑av| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产一区二区激情短视频 | 国产精品一区二区免费欧美 | 国产亚洲欧美在线一区二区| av超薄肉色丝袜交足视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 午夜免费鲁丝| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 免费观看人在逋| 一区二区av电影网| 国精品久久久久久国模美| 性色av一级| 免费在线观看完整版高清| 亚洲人成电影观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久 成人 亚洲| 纯流量卡能插随身wifi吗| 啦啦啦 在线观看视频| 久9热在线精品视频| 黄色怎么调成土黄色| 999精品在线视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 又大又爽又粗| 成人影院久久| 性色av一级| 男女床上黄色一级片免费看| 免费观看a级毛片全部| 久久影院123| 99久久综合免费| 永久免费av网站大全| videosex国产| 日韩三级视频一区二区三区| 久久人妻熟女aⅴ| 日本av免费视频播放| 成人国产av品久久久| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久久久精品人妻al黑| 午夜影院在线不卡| 在线观看免费视频网站a站| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 岛国在线观看网站| a级毛片黄视频| 欧美黄色淫秽网站| 淫妇啪啪啪对白视频 | 搡老岳熟女国产| 色94色欧美一区二区| 国产色视频综合| 亚洲精品乱久久久久久| av在线播放精品| 老司机亚洲免费影院| 国产高清视频在线播放一区 | 人人澡人人妻人| 一级黄色大片毛片| 少妇被粗大的猛进出69影院| 最近最新中文字幕大全免费视频| 视频区图区小说| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 一级毛片精品| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 韩国精品一区二区三区| avwww免费| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 人成视频在线观看免费观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 精品欧美一区二区三区在线| 人妻人人澡人人爽人人| h视频一区二区三区| 久久久久久久久久久久大奶| 午夜免费鲁丝| 午夜精品国产一区二区电影| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美另类一区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产男女超爽视频在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 久久人人爽人人片av| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 后天国语完整版免费观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久精品国产亚洲av高清一级| 热99国产精品久久久久久7| 国产精品一二三区在线看| 在线精品无人区一区二区三| 国产97色在线日韩免费| a 毛片基地| 18禁国产床啪视频网站| 免费不卡黄色视频| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲三区欧美一区| 男男h啪啪无遮挡| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲av男天堂| 免费av中文字幕在线| 久久青草综合色| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 新久久久久国产一级毛片| 免费在线观看完整版高清| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产男人的电影天堂91| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 久久久精品区二区三区| 丁香六月天网| 超色免费av| 中文字幕av电影在线播放| 精品亚洲成国产av| 两性夫妻黄色片| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 精品亚洲成国产av| 亚洲美女黄色视频免费看| 丝袜美足系列| 欧美在线黄色| 成年人黄色毛片网站| 热re99久久国产66热| 国产精品久久久av美女十八| 国产av又大| 国产99久久九九免费精品| av线在线观看网站| 免费高清在线观看视频在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 老司机深夜福利视频在线观看 | 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产成人精品无人区| 搡老乐熟女国产| 12—13女人毛片做爰片一| 大陆偷拍与自拍| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 女人久久www免费人成看片| 一本色道久久久久久精品综合| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 精品一区二区三卡| 精品乱码久久久久久99久播| 女性被躁到高潮视频| 国产日韩欧美视频二区| 777米奇影视久久| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产欧美日韩一区二区精品| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 窝窝影院91人妻| 久久人人爽人人片av| 美女午夜性视频免费| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 少妇的丰满在线观看| 午夜福利视频精品| 午夜视频精品福利| 国产欧美日韩一区二区三 | 日本av免费视频播放| 欧美少妇被猛烈插入视频| 亚洲欧美清纯卡通| 久久人人97超碰香蕉20202| 中文字幕人妻丝袜制服| 男女高潮啪啪啪动态图| 99久久人妻综合| 久久99一区二区三区| 男女国产视频网站| 国产日韩欧美亚洲二区| 中亚洲国语对白在线视频| 黄色毛片三级朝国网站| 久久中文看片网| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久国产精品影院| 黄频高清免费视频| 美女福利国产在线| 精品少妇黑人巨大在线播放| 一级毛片电影观看| 国产精品久久久av美女十八| 久久这里只有精品19| 下体分泌物呈黄色| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲 欧美一区二区三区| 免费少妇av软件| 后天国语完整版免费观看| 99国产精品一区二区三区| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产亚洲av高清不卡| 黑丝袜美女国产一区| 91大片在线观看| 女人精品久久久久毛片| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 91av网站免费观看| 精品高清国产在线一区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品欧美亚洲77777| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 欧美国产精品va在线观看不卡| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 高清在线国产一区| 国产日韩欧美亚洲二区| 一进一出抽搐动态| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 桃红色精品国产亚洲av| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 国产精品一区二区在线不卡| 国产又爽黄色视频| 最黄视频免费看| 9热在线视频观看99| 91成年电影在线观看| 搡老乐熟女国产| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产黄频视频在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| 成在线人永久免费视频| av国产精品久久久久影院| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 最黄视频免费看| 午夜激情av网站| 亚洲中文av在线| 午夜激情久久久久久久| 午夜免费成人在线视频| 国产av又大| 欧美日韩精品网址| 99精国产麻豆久久婷婷| av天堂久久9| 久久久精品区二区三区| 十八禁高潮呻吟视频| 97精品久久久久久久久久精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 黄色视频,在线免费观看| 国产一区二区在线观看av| 美国免费a级毛片| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 久久精品久久久久久噜噜老黄| 黄色毛片三级朝国网站| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| e午夜精品久久久久久久| 咕卡用的链子| 免费黄频网站在线观看国产| 国产亚洲精品久久久久5区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美性长视频在线观看| 国产男女超爽视频在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 久久毛片免费看一区二区三区| 最新在线观看一区二区三区| 欧美人与性动交α欧美软件| 久热这里只有精品99| 国产在线一区二区三区精| 欧美日本中文国产一区发布| a在线观看视频网站| 色婷婷av一区二区三区视频| 黑人操中国人逼视频| 欧美在线黄色| 最近最新中文字幕大全免费视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久香蕉激情| 精品一区在线观看国产| 久久久久久久国产电影| 日韩欧美免费精品| 久9热在线精品视频| 精品高清国产在线一区| www.自偷自拍.com| 午夜福利免费观看在线| 国产成人免费观看mmmm| 女性被躁到高潮视频| 青春草视频在线免费观看| 91av网站免费观看| www.熟女人妻精品国产| 性色av一级| 女人久久www免费人成看片| 老司机福利观看| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲久久久国产精品| 日本av免费视频播放| 在线观看免费高清a一片| 天天影视国产精品| 一区二区三区精品91| 亚洲专区字幕在线| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲人成77777在线视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久香蕉激情| 国产片内射在线| 久久久久久久国产电影| 男女之事视频高清在线观看| 欧美久久黑人一区二区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 日本av手机在线免费观看| 日韩视频在线欧美| 成人手机av| 国产亚洲精品一区二区www | 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲五月色婷婷综合| 国产伦理片在线播放av一区| 国产成人精品久久二区二区91| 美女扒开内裤让男人捅视频| av免费在线观看网站| 另类亚洲欧美激情| 色精品久久人妻99蜜桃| 高清av免费在线| 一级a爱视频在线免费观看| 91精品三级在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 一级a爱视频在线免费观看| 国产欧美亚洲国产| 亚洲精品乱久久久久久| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| www.av在线官网国产| 狂野欧美激情性xxxx| 一本大道久久a久久精品| 欧美av亚洲av综合av国产av| 男女免费视频国产| 国产人伦9x9x在线观看| 少妇粗大呻吟视频| videosex国产| 老司机午夜福利在线观看视频 | 一级毛片电影观看| 丝袜在线中文字幕| 性色av乱码一区二区三区2| 久久午夜综合久久蜜桃| 12—13女人毛片做爰片一| 香蕉丝袜av| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲精品在线美女| 午夜福利在线免费观看网站| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久久精品区二区三区| 叶爱在线成人免费视频播放| 久久ye,这里只有精品| 亚洲 国产 在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲少妇的诱惑av| 中亚洲国语对白在线视频| 免费在线观看日本一区| 国产在线一区二区三区精| 亚洲国产欧美一区二区综合| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲第一av免费看| 后天国语完整版免费观看| 国产成人免费无遮挡视频| 男人添女人高潮全过程视频| 欧美日韩成人在线一区二区| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产又爽黄色视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 99国产精品一区二区三区| 深夜精品福利| 欧美黄色淫秽网站| 999久久久精品免费观看国产| 午夜福利在线免费观看网站| 欧美另类亚洲清纯唯美| 激情视频va一区二区三区| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 欧美在线黄色| 国产色视频综合| 男男h啪啪无遮挡| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 不卡av一区二区三区| 免费在线观看完整版高清| 国产一区二区在线观看av| 午夜激情av网站| 99国产综合亚洲精品| 人人澡人人妻人| 国产又爽黄色视频| 欧美日韩一级在线毛片| a级毛片黄视频| 成在线人永久免费视频| 久久综合国产亚洲精品| 精品人妻一区二区三区麻豆| 欧美日韩成人在线一区二区| 老司机深夜福利视频在线观看 | 9色porny在线观看| 少妇精品久久久久久久| tocl精华| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产免费现黄频在线看| 伦理电影免费视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 后天国语完整版免费观看| 97人妻天天添夜夜摸| 国产av精品麻豆| 啦啦啦中文免费视频观看日本| av欧美777| 精品熟女少妇八av免费久了| 一级a爱视频在线免费观看| 一区二区三区激情视频| 天堂中文最新版在线下载| 国产免费一区二区三区四区乱码| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品亚洲av一区麻豆| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产一区二区三区av在线| 美女国产高潮福利片在线看| 久久久国产精品麻豆| 欧美久久黑人一区二区| av视频免费观看在线观看| 亚洲综合色网址| 波多野结衣av一区二区av| 日本av手机在线免费观看| 精品人妻1区二区| 欧美日韩福利视频一区二区| 一二三四在线观看免费中文在| 天堂中文最新版在线下载| 91老司机精品| 在线观看一区二区三区激情| 热99re8久久精品国产| 国产精品久久久久久精品古装| 1024视频免费在线观看| 色老头精品视频在线观看| 91av网站免费观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲久久久国产精品| 伦理电影免费视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 成人av一区二区三区在线看 | 欧美成人午夜精品| 欧美在线一区亚洲| 9191精品国产免费久久| 欧美激情极品国产一区二区三区| 91老司机精品| 亚洲第一青青草原| 高清av免费在线| 国产亚洲精品第一综合不卡| 一区二区av电影网| 亚洲精品中文字幕在线视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产日韩欧美亚洲二区| 成人手机av| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 后天国语完整版免费观看| 人妻人人澡人人爽人人| 另类亚洲欧美激情| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 岛国毛片在线播放| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 人成视频在线观看免费观看| 两个人看的免费小视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 天天操日日干夜夜撸| 脱女人内裤的视频| 啦啦啦免费观看视频1| 一区二区av电影网| 亚洲专区国产一区二区| 男女免费视频国产| 9色porny在线观看| 日韩视频在线欧美| 国产色视频综合| 日韩中文字幕欧美一区二区| 成在线人永久免费视频| 久久热在线av| 国产91精品成人一区二区三区 | 亚洲天堂av无毛| 老司机亚洲免费影院| 大香蕉久久网| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久久久久免费高清国产稀缺| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产精品一区二区在线不卡| 两个人免费观看高清视频| 欧美日韩一级在线毛片| 男人添女人高潮全过程视频| 色94色欧美一区二区| 狂野欧美激情性xxxx| 9热在线视频观看99| 亚洲av成人一区二区三| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲成国产人片在线观看| 少妇粗大呻吟视频| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲专区国产一区二区| 99国产综合亚洲精品| 亚洲色图综合在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 久久久久精品国产欧美久久久 | 9191精品国产免费久久| 久久天堂一区二区三区四区| 一进一出抽搐动态| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产在线视频一区二区| 老司机午夜福利在线观看视频 | 亚洲国产中文字幕在线视频| 两个人免费观看高清视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 成年av动漫网址| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲性夜色夜夜综合| 一本综合久久免费| 天堂8中文在线网| 成年av动漫网址| 最新的欧美精品一区二区| 国产亚洲av高清不卡| 久久人妻熟女aⅴ| 色婷婷久久久亚洲欧美| 99国产精品免费福利视频| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 亚洲av欧美aⅴ国产| 97人妻天天添夜夜摸| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| av不卡在线播放| 91精品三级在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 久久狼人影院| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 9热在线视频观看99| 精品福利永久在线观看| 9191精品国产免费久久| 成在线人永久免费视频| 精品一区二区三区av网在线观看 | 精品国产乱子伦一区二区三区 | 日韩有码中文字幕| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久5区| 女性被躁到高潮视频| 色94色欧美一区二区| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美黄色片欧美黄色片| 各种免费的搞黄视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 最黄视频免费看| 少妇 在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 中文字幕色久视频| 男女午夜视频在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 人妻人人澡人人爽人人| 久久久欧美国产精品| 午夜成年电影在线免费观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久久久久久久久久久大奶| 在线 av 中文字幕| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 久久久久国产一级毛片高清牌| 另类精品久久| 久久九九热精品免费| 美国免费a级毛片| 亚洲第一青青草原| 亚洲国产欧美在线一区| 国产成人系列免费观看| 麻豆国产av国片精品| 欧美日韩av久久| 亚洲黑人精品在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲视频免费观看视频| 制服诱惑二区| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 中文字幕人妻丝袜一区二区| 91大片在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲人成电影免费在线|