不同產(chǎn)地野山茶三維熒光特性研究

張舉成，嚴(yán)和平，陳 瑞，張國偉，熊 誠，何維紅，劉 衛(wèi)

（1.云南省高校天然藥物與化學(xué)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南蒙自661100；2.紅河學(xué)院理學(xué)院，云南蒙自661100）

不同產(chǎn)地野山茶三維熒光特性研究

張舉成1，2，嚴(yán)和平1，2，陳 瑞2，張國偉2，熊 誠2，何維紅2，劉 衛(wèi)1，2

（1.云南省高校天然藥物與化學(xué)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南蒙自661100；2.紅河學(xué)院理學(xué)院，云南蒙自661100）

測定了紅河州不同地區(qū)野山茶的吸收光譜和三維熒光光譜。吸收光譜表明，五個(gè)產(chǎn)地的野山茶茶湯均在400nm以下有強(qiáng)吸收，蒙自野山茶的吸收光譜峰主要為235、282、324nm，而其余四地野山茶吸收峰在242、290、350nm附近。熒光光譜表明，各地茶湯均在400～500nm之間出現(xiàn)3個(gè)熒光主峰，其1號(hào)熒光峰為365～400nm/440～485nm，為黃酮類化合物的熒光峰，且老回龍地區(qū)的最強(qiáng)。2號(hào)和3號(hào)熒光峰也具有明顯差異。通過對(duì)紅河州等地野山茶的研究，利用三維熒光建立了相應(yīng)的熒光指紋圖譜。

野山茶，三維熒光光譜，吸收光譜

野山茶（Elsholtzia bodineri Vaniot）系唇形科香薷屬（Elsholtzia Willd）多年生草本植物東紫蘇（Elsholtzia bodineri Vaniot）的別名。其它別名還有鳳尾茶、鐵線夏枯草（昆明）、山茶和山茶葉（云南）等；主要分布于云南、貴州等地方[1]。全草入藥，可治療頭痛身痛、咽喉痛、虛火牙痛、消化不良等癥。嫩尖亦可當(dāng)茶飲用，有清熱解毒之效[2]。在紅河州地區(qū)當(dāng)?shù)鼐用褚砸吧讲铻椴栾嫞渚哂星鍩犰罨?、和胃消食等功效。胡浩斌等人通過ICP-AES法測定了甘肅的東紫蘇中的無機(jī)元素，并對(duì)其化學(xué)成分以及其中黃酮類化合物的提取工藝進(jìn)行了研究[3-5]。本課題組研究了建水縣野山茶的提取物的抗氧化活性，紅河州多地區(qū)的野山茶中的微量元素、茶多酚和VC等[6-10]。三維熒光光譜（Three Dimensional Fluorescence Spectrum）是將熒光強(qiáng)度以等高線方式投影在以激發(fā)波長和發(fā)射波長為橫縱坐標(biāo)的平面上獲得的譜圖，圖像直觀，包含信息豐富[11]。對(duì)于中藥的指紋圖譜多見于氣相色譜、高效液相色譜等方法中，本文利用三維熒光方法對(duì)紅河州多地區(qū)所產(chǎn)野山茶進(jìn)行了研究，建立了檢測地區(qū)野山茶的三維熒光指紋圖譜。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

野山茶 分別購于紅河州蒙自、建水、彌勒、石屏和文山老回龍；水 為超純水。

F－7000熒光分光光度計(jì) 日本日立，光源為氙燈；4802s UV/Vis分光光度計(jì) 上海尤尼科；摩爾超純水器。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 熒光測定方法 激發(fā)波長為：200～600nm，發(fā)射波長300～700nm，每隔10nm激發(fā)一次，發(fā)射狹縫寬度5.0nm，響應(yīng)時(shí)間0.001s，PMT電壓700V，掃描速度1200nm·min－1。

1.2.2 樣品的制備 將紅河州蒙自（MZ）、建水（JS）、彌勒（ML）、石屏（SP）、文山州老回龍（LHL）的野山茶洗凈去根、曬干后切成長約1cm左右，混勻。分別稱取干的野山茶2.000g，用80℃的水沖泡成200mL溶液，10min后，將野山茶植株和茶湯分離，冷卻，待測。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)地野山茶的吸收光譜

將不同產(chǎn)地的野山茶茶湯進(jìn)行200～800nm的掃描，結(jié)果見圖1。

圖1 不同產(chǎn)地野山茶樣品的吸收光譜Fig.1 The absorption spectrums of the Elsholtzia bodineri Vaniot from different areas

從圖1可以看出，蒙自野山茶茶湯的吸收光譜與其余四個(gè)地方的野山茶茶湯的明顯不同。主要表現(xiàn)出的吸收峰在235、282、324nm。其余四個(gè)樣品的吸收峰除350nm附近的峰有所偏移外，其更強(qiáng)的吸收峰在242、290nm處幾乎重疊。從茶湯的顏色來分析，蒙自的茶湯顏色為淺黃色，其余均較蒙自的茶湯顏色深。

2.2 不同產(chǎn)地野山茶的熒光光譜

本文先通過200～700nm激發(fā)光激發(fā)樣品，發(fā)現(xiàn)在300nm以下和700nm以上都未見明顯的熒光峰，因此在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中采用200～600nm激發(fā)光激發(fā)，檢測300～700nm的熒光峰，獲得了不同地區(qū)野山茶茶湯的三維熒光光譜，未進(jìn)行校正。結(jié)果見圖2和表1。

對(duì)比圖2中的A、B、C、D、E圖，發(fā)現(xiàn)5組樣品的熒光主峰主要集中在400～500nm之間，但表現(xiàn)出熒光強(qiáng)度的差異性。測試樣品均出現(xiàn)了3組較強(qiáng)熒光峰，將三個(gè)熒光峰區(qū)分別標(biāo)記為1、2、3，對(duì)比結(jié)果發(fā)現(xiàn)測試的5組樣品中除蒙自樣品外，熒光峰強(qiáng)的強(qiáng)度順序均為：1號(hào)＞2號(hào)＞3號(hào)；蒙自樣品的熒光強(qiáng)度為：2號(hào)＞1號(hào)＞3號(hào)，且3組峰都較石屏、建水、彌勒的強(qiáng)，但是其1號(hào)峰卻弱于老回龍地區(qū)的樣品。

圖2 三維熒光等高線圖Fig.2 The three dimensional fluorescence contour spectrums

表1 樣品熒光峰對(duì)應(yīng)的激發(fā)和發(fā)射波長Table 1 The excitation and emission wavelength of absorb peaks

3 討論

3.1 從吸收光譜中發(fā)現(xiàn)，蒙自野山茶的茶湯中的成分與其余四地野山茶的茶湯有較大的區(qū)別，蒙自茶湯的顏色也較其余四組樣品淺，蒙自野山茶茶湯吸收峰為235、282nm。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)彌勒、石屏、建水、老回龍四個(gè)地區(qū)的茶湯在242nm的吸收峰幾乎完全重疊，其另一峰依次從345nm增大到354nm，同時(shí)吸光度值也在增強(qiáng)。李蓉濤[12]研究，在東紫蘇中含有木犀草素－7－葡萄糖苷（UVλmax（MeOH）：348.4，254.2，206.0）、洋芹素－7－葡萄糖苷（UVλmax（MeOH）：336，268，205.8）、芒苷（UVλmax（MeOH：283.8，205.0）、木犀草素（UVλmax（MeOH）：348.8，253，207.6）、5，3′，4′－三羥基二氫黃酮－7－O－（6quot;－阿魏?；拢璂－吡喃葡萄糖苷和5，3′，4′－三羥基二氫黃酮－7－O－（6quot;－異阿魏?；拢璂－吡喃葡萄糖苷（UV（MeOH）λmax（logε）：203（4.82），285（4.43），327）等，這些化合物的吸收光譜對(duì)東紫蘇的吸收光譜做出了貢獻(xiàn)。

3.2 熒光檢測結(jié)果顯示，檢測的五組樣品中，產(chǎn)生的熒光主峰在400～500nm之間，其它地方熒光較弱，主要的子峰1為365～405nm/440～485nm，子峰2為299～314nm/422～451nm，子峰3為212～260nm/396～487nm。樣品中3個(gè)熒光主峰出現(xiàn)以下順序：1號(hào)峰：LHL＞MZ＞ML＞SP＞JS；2號(hào)峰：MZ＞ML＞SP≈JS＞LHL；3號(hào)峰：MZ＞ML＞SP＞JS＞LHL。

3.3 根據(jù)文獻(xiàn)[13]得知，野山茶的茶湯中其1號(hào)子峰對(duì)應(yīng)的是黃酮醇，本課題組對(duì)野山茶的VC和多酚都進(jìn)行過測量，文獻(xiàn)報(bào)道茶多酚的對(duì)應(yīng)熒光激發(fā)/發(fā)射波長在490nm/510～520nm，但是在熒光指紋圖譜中未見明顯的峰，可能是由于其含量較低，雖產(chǎn)生熒光但是被掩蓋。

3.4 結(jié)合文獻(xiàn)[10]，石屏野山茶比建水野山茶中黃酮類化合物含量高，在本實(shí)驗(yàn)中石屏野山茶的熒光峰1也較建水的高，說明石屏野山茶的黃酮類化合物含量高于建水野山茶與文獻(xiàn)結(jié)果吻合。由此推斷，五組樣品中老回龍的黃酮含量最高，最具有保健作用。

3.5 通過對(duì)紅河州蒙自、建水、石屏、彌勒、文山老回龍野山茶茶湯三維熒光光譜和吸收光譜的測定，建立了蒙自等地野山茶的熒光指紋圖譜。

[1]云南省植物研究所.云南植物志[M].第一卷.北京：科學(xué)出版社，1977：731.

[2]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志卷 [M].北京：科學(xué)出版社，1977，66：337－338.

[3]趙東保，楊霞，張衛(wèi)，等.鳳尾茶化學(xué)成分研究[J].中藥材，2005，28（2）：94－96.

[4]胡浩斌，簡毓峰，曹宏，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選東紫蘇中黃酮類化合物的提取工藝[J].中藥材，2006，26（3）：296－298.

[5]胡浩斌，曹宏，劉建新，等.微波溶樣ICP－AES法測定甘肅東紫蘇中的無機(jī)元素[J].譜與光譜分析，2006，26（11）：2130－2133.

[6]張舉成，劉衛(wèi)，易中周，等.紅河州不同地區(qū)野山茶中微量元素的對(duì)比研究[J].光譜學(xué)與光譜分析，2008，28（11）：2699－2703.

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[8]張舉成，劉衛(wèi)，嚴(yán)和平，等.野山茶抗氧化活性及微量元素測定[J].食品科技，2007（4）：206－207.

[9]張舉成，嚴(yán)和平，劉衛(wèi)，等.不同產(chǎn)地野山茶浸泡液中VC含量的測定[J].食品研究與開發(fā)，2008，29（11）：120－122.

[10]張舉成，劉衛(wèi)，易中周，等.建水和石屏野山茶品質(zhì)比較研究[J].食品科技，2009，34（4）：91－93.

[11]李宏斌，劉文清，張玉鈞，等.三維熒光光譜技術(shù)在水監(jiān)測中的應(yīng)用[J].光學(xué)技術(shù)，2006，32（1）：27－30.

[12]李蓉濤.五種五味子屬藥用植物及東紫蘇化學(xué)成分研究[D].中國科學(xué)院昆明植物研究所，2004（1）：116.

[13]唐心亮，吳希軍，李樹軍.三維熒光光譜和主成分分析法在茶葉品質(zhì)鑒別中的應(yīng)用研究[J].河北科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30（4）：305－309.

Study on three dimensional fluorescence properties of Elsholtzia bodineri Vaniot from different areas

ZHANG Ju-cheng1，2，YAN He-ping1，2，CHEN Rui2，ZHANG Guo-wei2，XIONG Cheng2，HE Wei-hong2，LIU Wei1，2
（1.KeyLaboratoryofNaturalPharmaceuticalamp;ChemicalBiologyofYunnanProvince，HongheUniversity，Mengzi661100，China；2.College of Science，Honghe University，Mengzi 661100，China）

The absorption spectrum and three dimensional fluorescence spectrum of the Elsholtzia bodineri Vaniot from different area were detected.The absorption spectrum shown all the samples had the strong absorb bound under 400nm.But the sample of Mengzi（MZ）was different from the other，its absorb peak was 235，282，324nm.The samples，from Mile（ML），Jianshui（JS），Shiping（SP），Laohuilong（LHL），had almost the same absorption spectrum，the peak at 242nm，290nm and near 350nm.The three dimensional fluorescence spectrum shown，there were 3 main fluorescence peaks，all the peak were between 400～500nm，the other area also had the fluorescence，but the intensity was very low.The fluorescence peak，at（365～405）nm/（440～485）nm，suggested there are many flavonoids compounds in Elsholtzia bodineri Vaniot sample，and the contents of flavonoids compounds in LHL higher than other.The absorption spectrum and three dimensional fluorescence spectrums were all shown the difference from different regions.So this paper established the three-dimensional fluorescence fingerprint of Elsholtzia bodineri Vaniot.

Elsholtzia bodineri Vaniot；three dimensional fluorescence spectrum；absorption spectrum

TS272

A

1002-0306（2012）01-0098-03

2010－12－15

張舉成（1978-），男，碩士，副教授，從事天然產(chǎn)物化學(xué)及開發(fā)利用研究。

云南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2010ZC153）；紅河學(xué)院人才培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目（2010PY0106）。