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    導(dǎo)尿管相關(guān)尿路感染生物被膜菌及藥敏結(jié)果分析

    2012-11-14 05:46:00潘志雄劉曉峰郎梅春
    關(guān)鍵詞:尿路感染導(dǎo)尿管革蘭

    潘志雄,劉曉峰,郎梅春,劉 丹,陳 越

    (1、江西省九江市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西 九江 332000;2、江西省九江市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,江西 九江 332000)

    尿路感染是常見的醫(yī)院感染,在20世紀(jì)90年代僅次于呼吸道感染的感染性疾病,占醫(yī)院感染的第二位[1]。在尿路感染的病例中有75%~80%是留置導(dǎo)尿管所引起,稱導(dǎo)尿管相關(guān)性尿路感染(CAUTI)。極易造成醫(yī)院獲得性感染,而CAUTI難治又易于復(fù)發(fā)與生物被膜形成有關(guān)。隨著形成生物被膜菌引發(fā)醫(yī)院感染率的增加,對(duì)其的關(guān)注程度也在加大,本研究收集2009年8月至2011年8月住院導(dǎo)尿管插管患者感染病例,對(duì)病原菌的種類、生物被膜的形成和藥敏結(jié)果進(jìn)行回顧性分析,旨在為臨床醫(yī)生了解本地區(qū)導(dǎo)尿管相關(guān)性尿路感染菌的生物被膜形成情況及其耐藥特性,以便合理選擇抗生素進(jìn)行抗感染治療。

    1 資料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌種來源 2009年8月至2011年8月,我院住院CAUTI患者145例 (男性90例,女性55例),最小26歲,最大77歲。用無菌操作將導(dǎo)尿管取出,用滅菌生理鹽水10ml沖洗5次,以洗掉未黏附細(xì)菌,然后置于50ml滅菌生理鹽水容器中,旋渦儀上洗脫30s,將其分別接種于血平板,經(jīng)35℃孵箱孵育18~24h后鑒定。

    1.1.2 導(dǎo)尿管材料 產(chǎn)品由天然膠制成 (江西省3L醫(yī)用制品集團(tuán)有限公司提供)。

    1.1.3 儀器及試劑 BD Phoenix-100 System全自動(dòng)微生物鑒定/藥敏系統(tǒng)及配套鑒定、藥敏板為美國(guó)BD公司的產(chǎn)品??股鼐鶠锽D公司藥敏系統(tǒng)檢測(cè)項(xiàng)目。質(zhì)控菌株購(gòu)自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。渦旋振蕩器(GL88B型,江蘇海門基材醫(yī)用儀器廠)。

    1.2 方法

    1.2.1 菌株鑒定及藥敏試驗(yàn) 標(biāo)本采集、分離、培養(yǎng)按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第3版進(jìn)行,采用BD Phoenix-100 System全自動(dòng)細(xì)菌分析儀進(jìn)行菌株鑒定。藥敏采用儀器法:應(yīng)用微量肉湯對(duì)倍稀釋的方法檢測(cè)細(xì)菌的藥物敏感試驗(yàn),同時(shí)應(yīng)用BD公司專利的AST指示劑(氧化還原顯色指示劑)檢測(cè)出細(xì)菌的MIC濃度,由儀器在專家系統(tǒng)支持下自動(dòng)判讀報(bào)告耐藥(R)、中介(I)、敏感(S)藥敏結(jié)果。操作和結(jié)果判定按照CLSI2006版標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行,同時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行質(zhì)量控制。

    1.2.2 細(xì)菌生物被膜半定量檢測(cè) 參考文獻(xiàn)方法[2]對(duì)生物被膜菌進(jìn)行生物被膜培養(yǎng)。將菌株在Luria Bertani(L-B)液體培養(yǎng)基中35℃過夜培養(yǎng),用細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)比濁管調(diào)節(jié)菌液濃度為1×109CFU/ml;用96孔平底組織培養(yǎng)板培養(yǎng)生物被膜,每孔加入10μl菌液和200μl L-B培養(yǎng)基培養(yǎng)液(1:50稀釋),空白對(duì)照孔只加培養(yǎng)液,35℃靜止培養(yǎng)。選取72h生物被膜培養(yǎng)物進(jìn)行定量分析。每個(gè)孔加入150μl 0.25g/L結(jié)晶紫染液,室溫下染色15min;用生理鹽水沖洗后晾干;每孔加入95%乙醇150μL,室溫脫色10min;用紫外可見分光光度計(jì)檢測(cè)每孔脫色液在570nm光波的光密度 (OD570)。每個(gè)菌的實(shí)際OD570等于其檢測(cè)OD570減去空白對(duì)照孔OD570nm的值。再將所測(cè)各菌株生物被膜形成的量分為三個(gè)等級(jí):OD570≤0.3者為生物被膜形成的量少,以“+”表示;0.3<OD57?!?.0 者為生物被膜形成的量中等,以“++”表示;OD570>1.0者為生物被膜形成的較大,以“+++”表示。按上述標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各菌株生物被膜形成的量進(jìn)行比較分析。

    1.2.3 統(tǒng)計(jì)分析 使用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

    2 結(jié)果

    2.1 生物被膜菌分布及檢出率 我院145例CAUTI患者導(dǎo)尿管中分離出118株生物被膜菌(檢出率81.4%),118株生物被膜菌分布情況見表1。

    表1 CAUTI患者感染生物被膜菌分布情況

    2.2 細(xì)菌生物被膜半定量結(jié)果 在分離出118株生物被膜菌中,有14株形成生物被膜的量較少(+),占11.86%;有45株形成生物被膜的量中等(++),占38.14%;有59株形成生物被膜的量較大(+++),占 50%。 見表2。

    表2 臨床感染菌株生物被膜半定量檢測(cè)中 OD570nm值(OD570nm)與分級(jí)

    2.3 藥敏結(jié)果 選取檢出率前六位的生物被膜菌進(jìn)行菌株耐藥率統(tǒng)計(jì),見表3,表4。

    表3 抗菌藥物對(duì)CAUTI患者感染G-菌株耐藥率(%)

    表4 抗菌藥物對(duì)CAUTI患者感染G+菌株耐藥率(%)

    3 討論

    在搶救危重、休克患者,以及某些患泌尿系統(tǒng)疾病的患者手術(shù)過程中及術(shù)后,常要采用留置導(dǎo)尿管引流尿液,以便在觀察病情變化,保證手術(shù)順利進(jìn)行,促進(jìn)傷口愈合,但是留置導(dǎo)尿也是發(fā)生尿路感染的高危因素。留置導(dǎo)尿管表面形成細(xì)菌生物被膜是持續(xù)且反復(fù)多發(fā)尿路感染的主要原因。細(xì)菌分泌胞外多糖形成生物膜附著于導(dǎo)尿管表面。為了預(yù)防生物膜的形成,目前已有許多研究著重探討如何改進(jìn)導(dǎo)尿管的制作材料。

    本院從145例CAUTI患者導(dǎo)尿管中分離出118株生物被膜菌。被膜菌檢出率為81.4%,比周淑群[3]報(bào)道(使用硅化處理的乳膠導(dǎo)尿管被膜檢出率為73.91%)的要高,據(jù)大量研究表明[4],乳膠導(dǎo)尿管價(jià)格便宜,但由于有刺激和過敏反應(yīng)。硅膠導(dǎo)尿管與乳膠導(dǎo)尿管相比,能有效減少CAUTI的發(fā)生,因此,應(yīng)該采用硅膠導(dǎo)尿管代替乳膠導(dǎo)尿管,以最大程度地推遲和預(yù)防CAUTI的發(fā)生。

    本次調(diào)查結(jié)果表明,CAUTI生物被膜菌以革蘭陰性菌株為主,占72.88%,其次為革蘭陽性球菌,占27.12%,與朱小燕[5]等報(bào)道基本一致。說明我院留置導(dǎo)尿管相關(guān)的尿路感染中條件致病的革蘭陰性菌易產(chǎn)生生物被膜,從而使感染呈慢性過程和急性發(fā)作,給臨床治療帶來很大困難。細(xì)菌生物被膜半定量結(jié)果表明,大多數(shù)生物被膜菌株有較厚的生物被膜。表明治療這類細(xì)菌相關(guān)感染時(shí),要選擇能破壞及抑制細(xì)菌生物被膜形成的藥物及對(duì)細(xì)菌敏感的抗菌藥物聯(lián)合治療,以便提高療效。據(jù)國(guó)內(nèi)外研究表明,生物被膜相關(guān)感染疾病的治療非常棘手,與細(xì)菌生物被膜導(dǎo)致的相關(guān)感染有以下幾個(gè)特點(diǎn):通常有相互轉(zhuǎn)化的靜止期和發(fā)作期;抗菌藥物治療起初可能有效,但以后治療常常失??;致病菌主要來自皮膚和周圍環(huán)境,其主要有大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、假單胞菌屬、表皮葡萄球菌等[6]。

    本監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示,革蘭陰性菌中大腸埃希菌等對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素有很高的耐藥率,對(duì)阿米卡星的耐藥率較低。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對(duì)亞胺培南敏感率為100%。

    從表4中可以看出,革蘭陽性球菌的耐藥情況也相當(dāng)嚴(yán)重,糞腸球菌、屎腸球菌對(duì)慶大霉素、頭孢西丁耐藥率都為100%,表皮葡萄球菌對(duì)氨芐西林、青霉素的耐藥率為100%,糞腸球菌、表皮葡萄球菌對(duì)呋喃妥因的耐藥率較低,革蘭陽性球菌對(duì)萬古霉素的敏感率最高,對(duì)常用抗菌藥物敏感性較低,因此,要有針對(duì)性的使用抗生素,對(duì)于CAUTI患者,由于生物被膜的屏蔽作用,使得其中的細(xì)菌對(duì)抗菌藥物不敏感,而要尋找滲透性強(qiáng)的,可抑制生物被膜合成的抗菌藥物。在臨床使用的抗菌藥物中,大環(huán)內(nèi)酯類藥物,如14元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯類紅霉素、克拉霉素、羅紅霉素及15元環(huán)內(nèi)酯類阿奇霉素,可抑制生物被膜合成,促進(jìn)抗菌藥物滲透[7]。

    綜上所述,針對(duì)大多數(shù)生物被膜菌株有較厚的生物被膜,要選擇細(xì)菌生物被膜敏感的抗菌藥物,根據(jù)菌株的藥敏試驗(yàn),更合理地制定治療方案,以便控制感染。

    [1]張傳領(lǐng),韓立中,倪語星,等.泌尿系統(tǒng)感染病原菌分布及耐藥性分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2009,19(11):1447-1449.

    [2]劉曉峰,遲秀文,黃 震,等.大腸埃希菌臨床菌株生物被膜形成的分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011,21(9):1732-1734.

    [3]周淑群,周定球,劉 濱,等.導(dǎo)尿管伴隨性尿路感染患者感染生物被膜菌及藥敏分析[J].抗感染藥學(xué),2009,6(1):37-39.

    [4]袁望舒,劉忠良,張海娜,等.導(dǎo)尿管相關(guān)尿路感染的防治現(xiàn)狀及展望[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011,21(9):1936-11938.

    [5]朱小燕,張 敏,敖繼紅,等.泌尿系感染病原菌的分布及耐藥性分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,28(3):305-306.

    [6]王 睿.細(xì)菌生物被膜的產(chǎn)生與臨床意義 [J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2004,84(22):1915-1916.

    [7]孔晉亮,陳一強(qiáng).細(xì)菌生物被膜相關(guān)感染的防治[J].內(nèi)科,2007,2(1):102-104.

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