VEGF和CD44v6過表達(dá)與乳腺癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

瞿峰

腫瘤細(xì)胞的浸潤與轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的過程，其中腫瘤的血管生成及癌細(xì)胞與間質(zhì)的黏附作用是重要的影響因素。近年的研究表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 (vascular endothelial cell growth factor，VEGF)參與了腫瘤的脈管生成和浸潤轉(zhuǎn)移等過程［1］。CD44v6作為黏附分子CD44的主要成員之一，參與細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與間質(zhì)之間的黏接，與多種惡性腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)［2］。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測乳腺癌組織中VEGF和CD44v6在乳腺癌中的表達(dá)，探討VEGF和CD44v6在乳腺癌轉(zhuǎn)移中的可能作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2008—2010年我院病理科確診的原發(fā)乳腺導(dǎo)管浸潤癌手術(shù)切除的存檔石蠟標(biāo)本92例，其中有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例分別為55例、37例。患者均為女性，術(shù)前未行放、化療，中位年齡47.8歲。按照李樹玲主編的《乳腺腫瘤學(xué)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，復(fù)查全部切片。另取45例同期乳腺癌手術(shù)切除癌旁組織作為對照。

1.2 方法 鼠抗人VEGF單克隆抗體、鼠抗人CD44v6單克隆抗體及相應(yīng)二抗試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用免疫組織化學(xué)SP法對全部病例進(jìn)行染色，嚴(yán)格按照試劑說明書操作，兩種一抗稀釋度均為1:100。同時取已知陽性組織作對照，以PBS替代一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定 VEGF蛋白陽性表達(dá)均主要定位于細(xì)胞質(zhì);CD44v6蛋白陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜，少數(shù)見于胞質(zhì)。根據(jù)染色強度和陽性細(xì)胞百分比進(jìn)行半定量的綜合計分。即隨機選取5個高倍鏡視野計數(shù)陽性細(xì)胞百分比的平均數(shù)，無陽性細(xì)胞計0分，≤25%計1分，26% ～50%計2分，51% ～75%計3分，＞75%計4分;著色強度以多數(shù)陽性細(xì)胞呈現(xiàn)的染色計分，無著色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分;將陽性細(xì)胞百分比和著色強度兩者的計分相加，0～2分為陰性 (－)，≥3分為陽性 (+)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件，采用χ2檢驗及Fisher確切概率法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，以P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VEGF的表達(dá) VEGF蛋白陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒。VEGF蛋白在正常乳腺組織和乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率分別為6.7%(3/45)和90.2%(83/92)(P＜0.05，見表1)，而且VEGF在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率 (53/55)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 (P=0.016，見表2)。

2.2 CD44v6的表達(dá) CD44v6蛋白陽性反應(yīng)定位于細(xì)胞膜，呈棕黃色顆粒。CD44v6蛋白在正常乳腺組織和乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率分別為8.9%(4/45)和85.9%(79/92)(P＜0.05，見表1)，而且CD44v6在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率(51/55)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 (P=0.021，見表2)。

2.3 VEGF和CD44v6表達(dá)的關(guān)系 VEGF和CD44v6的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系 (r=0.497，P＜0.05，見表3)。

表1 VEGF和CD44v6在正常乳腺組織和乳腺癌中的表達(dá)〔n(%)〕Table 1 VEGF and CD44v6 in normal breast tissue and breast carcinoma

表2 乳腺癌組織中VEGF和CD44v6的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系Table 2 VEGF and CD44v6 expression and lymph node metastasis in breast cancer tissue

表3 乳腺癌組織中VEGF和CD44v6表達(dá)的關(guān)系Table 3 Relationship between the expression of VEGF and CD44v6 in breast cancer tissue

3 討論

乳腺癌的浸潤與轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致臨床治療失敗的主要原因，其中，新血管的生成是重要的影響因素。VEGF是一種重要的促脈管生成因子，具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖及血管生成的能力［4］。本實驗中VEGF在乳腺癌組織中高表達(dá)，而且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組乳腺癌VEGF的表達(dá)水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，與國內(nèi)研究結(jié)果一致［5］。提示癌細(xì)胞通過產(chǎn)生VEGF促進(jìn)淋巴管形成，新生的淋巴管壁具有高通透性，使腫瘤細(xì)胞容易進(jìn)入淋巴管隨著淋巴回流至淋巴結(jié)，而使其容易完成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。同時，VEGF促進(jìn)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，導(dǎo)致腫瘤血管數(shù)量增加，不僅為腫瘤的生長提供營養(yǎng)，而且為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供通道。因此，腫瘤血管生成對淋巴轉(zhuǎn)移具有間接促進(jìn)作用。這說明VEGF隨著乳腺癌進(jìn)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其陽性表達(dá)升高，可作為臨床參數(shù)進(jìn)行預(yù)后評估。

CD44v6作為黏附分子CD44的主要成員，與多種惡性腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)。目前認(rèn)為CD44v6主要參與瘤細(xì)胞與宿主基質(zhì)的黏附，黏附在癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起促進(jìn)作用。研究顯示，CD44v6的過度表達(dá)與乳腺癌等的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)［6－7］。本研究發(fā)現(xiàn)CD44v6在乳腺癌組織中高表達(dá)，且與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系。這提示CD44v6作為黏附分子，參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展和浸潤轉(zhuǎn)移過程，其使癌細(xì)胞與間質(zhì)間有更強的黏附能力，同時使癌細(xì)胞逃避機體的免疫監(jiān)測的能力，從而使癌細(xì)胞更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。因此，CD44v6的過度表達(dá)是乳腺癌變及浸潤轉(zhuǎn)移的一個重要因素，檢測淋巴結(jié)中CD44v6的表達(dá)可能成為早期診斷乳腺癌的指標(biāo)之一。

從VEGF與CD44v6蛋白的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，VEGF和CD44v6的表達(dá)在乳腺癌組織中同時出現(xiàn)表達(dá)上調(diào)，存在正相關(guān)關(guān)系，并且均與淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示兩者可能在乳腺癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中起協(xié)同作用。因此VEGF和CD44v6蛋白可以作為判斷乳腺癌轉(zhuǎn)移能力的生物學(xué)指標(biāo)。

1 甲狀腺乳頭狀癌VEGF、MMP－9及COX－2蛋白表達(dá)與淋巴道轉(zhuǎn)移和血管生成的相關(guān)性 ［J］.腫瘤防治研究，2010，37(4):441－444.

2 Heider KH，Kuthan H，Stehle G，et al.CD44v6:a target for antibody － based cancer therapy［J］.Cancer Immunol Immunother，2004，53(7):567－579.

3 李樹玲.乳腺腫瘤學(xué)［M］.北京:科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2000:337－340.

4 Saad RS，Kordunsky L，Liu YL，et al.Lymphatic microvessel density as prognostic marker in colorectal cancer［J］.Mod Pathol，2006，19(10):1317－1323.

5 羅彬，秦蓁，王旭東.肺癌MMP－9和VEGF表達(dá)與微血管密度的關(guān)系及意義［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38(7):1338－1345.

6 田斌，牛虎.乳腺癌組織CD15和CD44V6及PCNA表達(dá)及其臨床意義 ［J］.中華腫瘤防治雜志，2009，16(14):1082－1085.

7 段秀方，鐘容，簡莉人.CD44v6、E－Cadherin在乳腺癌中的表達(dá)及意義［J］.中國婦幼保健，2010，25(23):3332－3334.