肝細(xì)胞肝癌中HBX趨化因子受體CXCR4及配體CCR7與MMP9的相關(guān)性分析

黃 為 (潛江市衛(wèi)生局衛(wèi)生監(jiān)督局，湖北 潛江 433100)

胡曉立 (潛江市中心醫(yī)院外一科，湖北 潛江 433100)

肝細(xì)胞肝癌中HBX趨化因子受體CXCR4及配體CCR7與MMP9的相關(guān)性分析

黃 為 (潛江市衛(wèi)生局衛(wèi)生監(jiān)督局，湖北 潛江 433100)

胡曉立 (潛江市中心醫(yī)院外一科，湖北 潛江 433100)

目的：觀察趨化因子受體CXCR4及配體CCR7與基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase，MMPs)在肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的表達(dá)和臨床病理學(xué)意義。方法：用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HCC組織40例中CXCR、CCR7和MMP9表達(dá)，并將上述檢測(cè)結(jié)果結(jié)合臨床資料進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果：40例癌組織中20例呈CXCR4高表達(dá)，19例呈CCR7高表達(dá)，23例MMP9高表達(dá)，CXCR、CCR7和MMP9在HCC中，均與HCC病理分級(jí)和門靜脈癌栓以及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有明顯正相關(guān)；CXCR、CCR7均與MMP9呈明顯正相關(guān)。結(jié)論：CXCR、CCR7聯(lián)合 MMP9可以作為評(píng)估HCC惡性程度和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的腫瘤標(biāo)志物。

原發(fā)性肝癌；趨化因子受體CXCR4；趨化因子受體配體CCR7；基質(zhì)金屬蛋白酶9；病理分型

肝細(xì)胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是常見(jiàn)的惡性腫瘤,其發(fā)病率在全世界高居第5位，病死率高[1]。通過(guò)有效的腫瘤標(biāo)志物判斷HCC的惡性程度，進(jìn)行針對(duì)性的診治在近年來(lái)越來(lái)越受到重視。研究顯示，趨化因子受體CXCR4與其配體CCR7構(gòu)成的生物學(xué)軸與多種腫瘤的趨向性侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后相關(guān)?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)9可降解腫瘤細(xì)胞基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白成分，瘤細(xì)胞周圍基底膜通透性和運(yùn)動(dòng)能力發(fā)生變化[2]，從而改變腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能。然而，CXCR4及其配體CCR7與MMP9的相關(guān)性卻尚不明確。我們將探究人HCC標(biāo)本中CXCR4/CCR7和MMP9的表達(dá)及臨床意義，并進(jìn)一步分析其相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1材料

選取2005年9月至2010年10月潛江市中心醫(yī)院HCC患者腫瘤手術(shù)切除標(biāo)本40例，患者年齡30～72歲，平均年齡52歲，術(shù)前均未行任何治療，病理學(xué)診斷均為肝細(xì)胞肝癌。

兔抗人CXCLl2、CXCR4、MMP2和MMP9多克隆抗體、羊抗兔二抗均購(gòu)自武漢三鷹公司， SP試劑盒、DAB顯色劑均購(gòu)自武漢博士德公司。

1.2方法

標(biāo)本石蠟包埋，0.4μm連續(xù)切片。切片常規(guī)脫蠟，抗原微波修復(fù)，羊血清封閉，CXCLl2(1∶200)、CXCR4(1∶200)、MMP2(1∶100)和MMP9(1∶100)孵育；生物素化標(biāo)記二抗IgG孵育；鏈親和素過(guò)氧化物酶標(biāo)記三抗孵育；DAB顯色；蘇木精復(fù)染。PBs代替一抗作為陰性對(duì)照。

由2名病理科醫(yī)生以隨機(jī)、雙盲原則評(píng)定染色結(jié)果。以胞膜和胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)淡黃至棕褐色顆粒為陽(yáng)性，光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野(× 400)，以平均50%以上細(xì)胞定位明確、染色明顯的組織切片視為高表達(dá)組，低于50%為低表達(dá)組。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)用SPSSI3.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，χ2檢驗(yàn)和Spearman rho相關(guān)性分析。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1病理組織學(xué)觀察結(jié)果

所有患者血清HBVAg均為陽(yáng)性?；颊吲R床病理特點(diǎn)見(jiàn)表1，癌旁組織標(biāo)本作為對(duì)照。

表1 CXCR4/CCR7和MMP9的表達(dá)及臨床意義

2.2CXCR4/CCR7和MMP9在HCC中的表達(dá)情況

CXCR4、CCR7和MMP9均表達(dá)于癌細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，呈淡黃色至棕黃色，胞核為藍(lán)色。在癌周基質(zhì)內(nèi)有時(shí)也可見(jiàn)弱染色。在40例HCC標(biāo)本中，有20例CXCR4染色陽(yáng)性(50.0%)；臨床高病理分級(jí)HCC中CXCR4表達(dá)明顯增加(Plt;0.01)、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和門靜脈癌栓發(fā)生的病例中，CXCR4表達(dá)明顯增多(Plt;0.01)。CCR7染色陽(yáng)性19例(47.5%)，MMP9染色陽(yáng)性23例(57.5%)，CCR7和MMP9的表達(dá)與HCC臨床病理聯(lián)系與CXCR4有相同的趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.01)。癌旁組織標(biāo)本均未見(jiàn)CXCR4、CCR7和MMP9的明顯表達(dá)(見(jiàn)圖1～圖3、表1)。

圖1 CXCR4的表達(dá)情況(×200)

圖2 CCR7表達(dá)情況(×200)

圖3 MMP9表達(dá)情況(×200)

2.3CXCR4/CCR7與MMP9在HCC中相關(guān)性分析

CXCR4蛋白表達(dá)和MMP9蛋白表達(dá)明顯正相關(guān)(r=0.556，P=0.000)，見(jiàn)表2。CCR7蛋白表達(dá)和MMP9蛋白表達(dá)明顯正相關(guān)(r=0.413，P=0.008)，同CXCR4蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.951，P=0.000)。

表2 CXCLl2/CXCR4和MMP2/MMP9 相關(guān)性分析

3 討 論

CXCR4是CXC家族趨化因子的重要受體，CCR7是其配體，兩者具有高度的特異性和親和力。有研究證實(shí)，CXCR4-CCR7構(gòu)成的生物軸通過(guò)調(diào)節(jié)惡性腫瘤如乳腺癌、肝癌、胃癌等的血管生成，直接活化腫瘤細(xì)胞，引導(dǎo)腫瘤細(xì)胞遷移到特定部位，從而在這些腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，HCC組織中CXCLl2和CXCR4蛋白表達(dá)明顯高于肝硬化、正常肝組織，提示CXCR4蛋白在HCC惡性轉(zhuǎn)化中起重要作用，參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)中， CXCR4和CCR7表達(dá)和HCC的病理分級(jí)和門靜脈癌栓以及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移呈明顯正相關(guān)，提示趨化因子受體CXCR4及其配體CCR7共同參與肝癌細(xì)胞的發(fā)展和遷移，同時(shí)，CXCR4和CCR7在HCC中顯著正相關(guān)?？梢?jiàn)，CXCR4和CCR7可同時(shí)作為評(píng)估HCC病理發(fā)展程度和轉(zhuǎn)移預(yù)后的一種腫瘤標(biāo)志物。

基質(zhì)金屬蛋白酶可降解很多種細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)，是一個(gè)蛋白水解酶大家族[3]?；|(zhì)金屬蛋白酶9在腫瘤中，能降解變性膠原、彈性蛋白、肌蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分，改變腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，調(diào)節(jié)趨化、遷移速率[4]。既往研究發(fā)現(xiàn)，MMP9與HCC的病理類型和轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)，MMP9可以作為反映HCC惡性程度的重要指標(biāo)[5]，這一結(jié)果在本研究中也得到證實(shí)。本研究進(jìn)一步證實(shí)，在HCC中， MMP9和門靜脈癌栓明顯相關(guān)。本研究結(jié)果還發(fā)顯示，在CXCR4/CCR7高表達(dá)的HCC中，MMP9高表達(dá)，且呈顯著正相關(guān)。

CXCR4/CCR7和MMP9蛋白表達(dá)在HCC組織中均與病理類型、門靜脈癌栓以及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，這提示CXCR4/CCR7蛋白可能通過(guò)某些通路對(duì)MMP9的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控而導(dǎo)致HCC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。然而，具體CXCLl2/CXCR4和MMP9/MMP2之間在HCC中的確切聯(lián)系及始動(dòng)因素、調(diào)控因素以及與其他細(xì)胞因子與信號(hào)通路的相關(guān)作用等還需要更多的體外實(shí)驗(yàn)和裸鼠模型來(lái)證實(shí)。但是，通過(guò)在HCC標(biāo)本的CXCR4/CCR7和MMP9的表達(dá)和相關(guān)性分析，仍然為HCC的惡性程度評(píng)估提供了有效的標(biāo)志物組合，也為我們進(jìn)一步探討HCC的早期診斷、發(fā)展和預(yù)后提供了一定的線索。

[1]Schrader J,Gordon-Walker T T,et al.Matrix stiffness modulates proliferation,chemotherapeutic response,and dormancy in hepatocellular carcinoma cells[J].Hepatology，2011，53(4)：1192-1205.

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[編輯]一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.03.002

R735.7；R361.3

A

1673-1409(2012)03-R003-03

2012-02-10

黃為(1969-)，男，湖北潛江人，主治醫(yī)師，主要從事肝膽外科臨床工作;通訊作者：胡曉立，E-mail: winterhxl@sina.com。