245例宮腔內(nèi)人工授精夫婦染色體核型分析

陳志恒 孫 玲 全吳敏廣州市婦女兒童醫(yī)療中心生殖醫(yī)學(xué)中心，廣東廣州 510623

245例宮腔內(nèi)人工授精夫婦染色體核型分析

陳志恒 孫 玲 全吳敏廣州市婦女兒童醫(yī)療中心生殖醫(yī)學(xué)中心，廣東廣州 510623

目的 探討染色體核型多態(tài)性對(duì)夫精人工授精 （AIH）妊娠結(jié)局的影響。 方法 對(duì)245對(duì)接受夫精人工授精（AIH）治療的夫婦行外周血染色體核型分析，分析核型多態(tài)性與夫精人工授精治療結(jié)局的關(guān)系。 結(jié)果 檢出染色體異常核型和染色體多態(tài)性49例 （發(fā)生率為10.0%），包括平衡易位2例 （0.41%），4號(hào)、9號(hào)染色體臂間倒位15例（3.06%），Y染色體多態(tài)性2例（0.41%），其他染色體多態(tài)性30例（6.12%）。染色體核型正常組與染色體臂間倒位組比較，AIH周期臨床妊娠率無差異（P＞0.05），染色體核型正常組與常染色體多態(tài)性組比較，周期臨床妊娠率有差異（P＜0.05）。 結(jié)論染色體臂間倒位對(duì)人工授精臨床妊娠率無明顯影響，常染色體多態(tài)性對(duì)AIH妊娠率并無負(fù)面影響。

染色體；染色體多態(tài)性;人工授精

不孕不育是婦科常見病，可由多種因素引起，其中染色體異常是重要原因之一，因此為了子代的安全，在實(shí)施輔助生育技術(shù)治療前會(huì)對(duì)患者夫婦進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)檢查。其中發(fā)現(xiàn)部分為染色體核型異常和染色體多態(tài)性患者，這些染色體異常和多態(tài)性對(duì)采用輔助生育技術(shù)后的妊娠率和妊娠結(jié)局有何影響越來越受到醫(yī)學(xué)界的重視。染色體多態(tài)性是指生物物種之內(nèi)個(gè)體之間的正常變異，表現(xiàn)在結(jié)構(gòu)及帶型強(qiáng)度的變異，傳統(tǒng)理論認(rèn)為此區(qū)無遺傳信息傳遞，發(fā)生變異后一般不會(huì)引起臨床表型異常，多年來各國(guó)學(xué)者均認(rèn)為染色體多態(tài)性與生殖異常無明確關(guān)系。然而，許多臨床醫(yī)生發(fā)現(xiàn)不少染色體呈多態(tài)性的個(gè)體存在生殖異常[1]。由此，為了探討染色體核型異常和多態(tài)性對(duì)夫精人工授精（AIH）妊娠率和妊娠結(jié)局的影響，本文對(duì)本生殖中心245對(duì)行夫精人工授精治療的夫婦的細(xì)胞遺傳學(xué)檢查結(jié)果以及實(shí)施人工受精后的妊娠率和妊娠結(jié)局進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，現(xiàn)匯報(bào)如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2004年1月～2009年11月在我院生殖中心就診的245對(duì)不孕患者夫婦，其中，原發(fā)不孕147例，占60.0%，繼發(fā)不孕98例，占40.0%，女方平均年齡（32.2±4.0）歲，男方平均年齡（34.7±4.5）歲，平均不孕年限（4.5±3.1）年。治療前男女雙方均按衛(wèi)生部相關(guān)要求進(jìn)行排查，符合人工授精適應(yīng)癥，均無人工授精禁忌證，245對(duì)夫婦共行人工授精422個(gè)周期。

1.2 方法

1.2.1 中期染色體G顯帶分析 患者夫婦雙方術(shù)前檢查時(shí)常規(guī)行染色體檢查，取外周血抗凝，接種于1640培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)72 h，常規(guī)制片、G顯帶觀察，必要時(shí)行C顯帶、R顯帶。每例計(jì)數(shù)30個(gè)中期核型，分析3個(gè)核型。如疑嵌合體，計(jì)數(shù)100個(gè)中期分裂相。

1.2.2 夫精人工授精 卵泡監(jiān)測(cè)和人工授精時(shí)機(jī)：①自然周期：于月經(jīng)第10～12天開始經(jīng)陰道B超監(jiān)測(cè)卵泡發(fā)育，當(dāng)優(yōu)勢(shì)卵泡徑線達(dá)到14 mm以上時(shí)，結(jié)合尿LH監(jiān)測(cè)，出現(xiàn)尿LH峰后12～36 h行人工授精。②克羅米芬促排卵周期：于月經(jīng)第五天給予克羅米芬50～100 mg/d，連續(xù)5 d，停藥2 d后開始監(jiān)測(cè)卵泡，視卵泡發(fā)育情況可加用人絕經(jīng)期促性腺激素（HMG，珠海麗珠醫(yī)藥有限公司）75～150 IU/d，卵泡直徑達(dá)20 mm時(shí)給予HCG 5 000～10 000 IU肌注，24～36 h后行人工授精I(xiàn)UI。③hMG組：在月經(jīng)周期的第3～5天開始注射hMG，150 IU/d，連續(xù)5 d，然后根據(jù)卵泡發(fā)育調(diào)整劑量直到成熟后停藥。當(dāng)LH峰出現(xiàn)或卵泡直徑平均達(dá)18 mm時(shí)，注射hCG 5 000～10 000 IU，24～36 h 后行人工授精。

1.3 妊娠的判斷標(biāo)準(zhǔn)

人工授精術(shù)后14 d通過血β-HCG檢測(cè)確定是否妊娠。妊娠者術(shù)后5周B超檢查了解胚胎情況，可見妊娠囊、卵黃囊、胚芽及胎心搏動(dòng)者為臨床妊娠。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，臨床妊娠率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 染色體異常和多態(tài)性的發(fā)生率

245 對(duì)不孕癥夫婦雙方共檢查出染色體異常核型和染色體多態(tài)性49例 （10.0%），包括平衡易位2例 （0.41%），4號(hào)、9號(hào)染色體臂間倒位15例 （3.06%），Y染色體多態(tài)2例（0.41%），其他染色體多態(tài)性30例（6.12%），其詳細(xì)分類妊娠情況見表1。

2.2 染色體核型對(duì)夫精人工授精結(jié)局的影響

199 對(duì)染色體核型正常夫婦共經(jīng)過352個(gè)AIH治療周期，臨床妊娠52例，臨床妊娠率為14.77%。46對(duì)夫婦檢出核型異常、染色體臂間倒位和多態(tài)性共49例。其中2對(duì)夫婦檢出2例染色體平衡易位（配偶單方為平衡易位，另一方核型正常），共行2個(gè)周期AIH均未孕。另有13對(duì)夫婦檢出4號(hào)和9號(hào)染色體臂間倒位15例，其中有2對(duì)夫婦同時(shí)為9號(hào)染色體臂間倒位，1對(duì)夫婦男方為Y染色體多態(tài)攜帶者，女方為9號(hào)染色體臂間倒位攜帶者（這對(duì)夫婦AIH周期統(tǒng)計(jì)歸入染色體臂間倒位組），這13對(duì)夫婦共行AIH 21周期，臨床妊娠2例，臨床妊娠率為9.52%，與核型正常組比較臨床妊娠率無差異（P＞0.05）。還有1對(duì)夫婦男方為Y染色體多態(tài)攜帶者行2個(gè)周期AIH均未孕。30例其他常染色體多態(tài)夫婦共行45個(gè)AIH周期，臨床妊娠13例，臨床妊娠率為28.89%，與正常染色體組相比臨床妊娠率有差異（P＜0.05）。

3 討論

3.1 平衡易位對(duì)AIH妊娠率的影響

平衡易位攜帶者由于沒有造成染色體片段的增加和減少，一般個(gè)體表型正常，但由于其配子多為不平衡，在形成配子的減數(shù)分裂前期Ⅰ的粗線期可形成四價(jià)體，從而產(chǎn)生18種類型的配子，其中只有1種正常，1種為表型正常的平衡易位攜帶者，其他均為單體或部分單體，三體或部分三體，這種不平衡配子是導(dǎo)致畸形、死胎及反復(fù)流產(chǎn)的主要原因[2]。但張?jiān)缕嫉萚3]曾報(bào)道，在其研究的194例平衡易位攜帶者中有20.1%的夫婦得到了正常（或）平衡易位后代，提示平衡易位攜帶者也有成功受孕并生育正常后代的可能性。本研究2例平衡易位行2個(gè)周期AIH均未受孕，由于例數(shù)過少，仍需在以后工作中進(jìn)一步總結(jié)研究。

表1 染色體核型異常和多態(tài)性分類

3.2 臂間倒位對(duì)AIH妊娠率的影響

臂間倒位幾乎涉及每條染色體，其中以9號(hào)染色體的發(fā)生率最高，在一般人群中可達(dá)0.82%[5]，有關(guān)9號(hào)染色體臂間倒位的生物學(xué)效應(yīng)，有學(xué)者認(rèn)為由于倒位并不導(dǎo)致遺傳物質(zhì)的丟失，不具有病理學(xué)意義[6]，但也有報(bào)道認(rèn)為臂間倒位染色體攜帶者當(dāng)形成生殖細(xì)胞減數(shù)分裂時(shí)，按同源染色體節(jié)段相互配對(duì)，形成特有的倒位環(huán)，在環(huán)內(nèi)進(jìn)行交換可產(chǎn)生四種不同類型配子，一種完全正常，一種為倒位攜帶者，另兩種為部分重復(fù)和部分缺失，前兩種與正常細(xì)胞受精后一種發(fā)育成正常個(gè)體，另一種為倒位攜帶者，后兩種為不平衡配子，胚胎很難存活，將導(dǎo)致流產(chǎn)和死胎[7]。本研究中245對(duì)夫婦490例染色體檢查中9號(hào)染色體臂間體倒位14例，發(fā)生率約為2.86%，遠(yuǎn)高于正常人群0.82%。此外本研究中15例臂間倒位患者共進(jìn)行21個(gè)周期AIH，共獲得2例妊娠，妊娠率為9.52%，與染色體正常組相比無差異（P＞0.05），其結(jié)果表明臂間倒位并不影響AIH成功率，這與周友泉等[8]提出的inv（9）的主要臨床效應(yīng)是不良孕產(chǎn)史而非不孕不育的觀點(diǎn)相符。

3.3 Y染色體多態(tài)性對(duì)AIH妊娠率的影響

關(guān)于Y染色體多態(tài)性是否會(huì)引起遺傳效應(yīng)一直以來都存在爭(zhēng)議。有學(xué)者認(rèn)為，大Y是一種正常的染色體多態(tài)性變異，不會(huì)引起臨床效應(yīng)[9]。也有研究發(fā)現(xiàn)，大Y與自然流產(chǎn)、胚胎停育、死胎等不良孕產(chǎn)史有關(guān)[10]，在近期輔助生育技術(shù)研究中，有作者認(rèn)為大Y染色體對(duì)體外受精－胚胎移植的胚胎發(fā)育及近期妊娠結(jié)果均無顯著影響[11]，本研究中Y染色體多態(tài)性2例，發(fā)生率為0.82%，3周期均未獲妊娠。由于例數(shù)過少仍需進(jìn)一步總結(jié)。

3.4 其他常染色體多態(tài)性對(duì)AIH妊娠率的影響

常染色體的多態(tài)性主要以異染色質(zhì)的變異為主，含有高度重復(fù)DNA的異染色質(zhì)尤為明顯，結(jié)構(gòu)異常染色質(zhì)集中分布于著絲粒、端粒、隨體、次縊痕和Y染色體長(zhǎng)臂。異染色質(zhì)在著絲粒功能方面起著至關(guān)重要的作用，是姐妹染色單體結(jié)合和染色體分離所必需的[4]，異染色質(zhì)的異常有可能影響在減數(shù)分裂時(shí)染色體配對(duì)聯(lián)會(huì)和配子的形成，導(dǎo)致生育方面的異常。本研究中染色體多態(tài)性主要表現(xiàn)為隨體的有無和個(gè)數(shù)（D組和G組5對(duì)染色體）、副縊痕的增長(zhǎng)等，共30例，發(fā)生率為6.12%，共行45個(gè)AIH周期，共獲得13例妊娠，妊娠率為28.89%，與正常染色體組相比有差異（P＜0.05），因此染色體多態(tài)性表現(xiàn)中隨體變異和副縊痕的增長(zhǎng)等對(duì)AIH妊娠率并無負(fù)面影響。

綜上所述，本研究檢測(cè)的染色體臂間倒位與核型正常者在AIH治療后臨床妊娠率無差異，而常染色體多態(tài)性核型攜帶者與核型正常者在AIH治療后臨床妊娠率有差異，常染色體多態(tài)性對(duì)AIH妊娠率無負(fù)面影響，由此筆者推測(cè)，染色體臂間倒位和多態(tài)性并不是生育的絕對(duì)禁忌證，即使是染色體臂間倒位和多態(tài)性核型攜帶者，其成功妊娠并生育出表型正?；町a(chǎn)兒的可能性并不低于核型正常者。但在本研究AIH人群中，均為不孕癥群體，其染色體異常及多態(tài)性率高達(dá)10%，顯著高于一般人群染色體異常發(fā)生率（0.5%）[12]，因此，對(duì)將要進(jìn)行輔助生殖治療的夫婦進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)檢查是非常必要的，同時(shí)須告知患者，雖然部分的核型異常和多態(tài)性并不影響AIH的妊娠率和結(jié)局，但卻仍然有將異常染色體基因傳給后代的可能性，而且女性攜帶者較男性攜帶者更易出現(xiàn)異常妊娠的情況，讓患者有充分的知情選擇權(quán)。

[1]唐冬生，田允波，李曉杰，等.染色體多態(tài)性與生殖異常的關(guān)系研究[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2002，10（6）：51-52.

[2]夏家輝，李麓蕓.染色體病[M].北京：科學(xué)出版社，1989：88-273.

[3]張?jiān)缕?，徐建忠，殷民，?染色體平衡易位攜帶者妊娠風(fēng)險(xiǎn)及妊娠結(jié)局的研究[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2006，41（9）：592-596.

[4]Zhimulev IF，Beliaeva ES.Heterochromatin，gene position effect and gene silencing[J].Genetica，2003，39（2）： 187-201.

[5]李永全，鄭克勤，周汝斌，等.染色體臂間倒位的遺傳學(xué)效應(yīng)分析[J].廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999，17（2）：94-98.

[6]李麓蕓，夏家輝，戴和平，等.染色體臂間倒位和臂內(nèi)倒位的遺傳咨詢[J].遺傳與疾病，1998，2（1）：35-38.

[7]王新，劉鴻鶴，宋華，等.2700例遺傳咨詢者外周血染色體分析[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，1998，6（4）：33-38.

[8]周友泉，史彩虹，劉芳，等.廈門地區(qū)不孕不育患者的染色體多態(tài)性分析[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2009，17（5）：57-61.

[9]沈婉英.漢族男性Y染色體長(zhǎng)度152例分析[J].遺傳與疾病，1990，7（1）：37-41.

[10]Celep F，Karagüzel A，Ozeren M，et al.The frequency of chromosomal abnormalities in patients with reproductive failure [J].Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2006，127（1）：106-109.

[11]范玲玲，顏軍昊，李媛，等.大Y染色體對(duì)體外受精－胚胎移植結(jié)局的影響[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2010，48（4）：16-22.

[12]周煥庚.人類染色體[M].北京：科學(xué)出版社，1987：189.

Chromosome karyotype analysis among 245 couples with artificial insemination in uterine cavity

CHEN ZhihengSUN LingQUAN Wumin
Reproductive Medical Center,Guangzhou Women and Children Medical Center,Guangdong Province,Guangzhou 510623,China

Objective To explore influence of karyotype polymorphism on pregnant outcome of artificial insemination to husband(AIH).Methods Chromosome karyotypes from peripheral blood of 245 couples accepting AIH were analyzed in order to find the relationship between karyotype polymorphism and pregnant outcome of AIH.Results The number of abnormal chromosome karyotype and karyotype polymorphism cases was 49,accounted for 10%.It contains four aspects:balanced translocation(2 cases),pericentric inversion of chromosome 4 and 9(15 cases),Y chromosome polymorphism(2 cases),and other chromosome polymorphism (30 cases),at the percentages of 0.41%,3.06%,0.41%,and 6.12%respectively.There was no significant difference in clinical pregnancy rate of AIH cycle between normal chromosome karyotype and pericentric inversion group (P＞0.05).However,the clinical pregnancy rate of AIH cycle showed a statistical difference between normal chromosome karyotype and autosomal polymorphism group (P＜0.05).Conclusion The impact from pericentric inversion on AIH′s clinical pregnancy rate is very subtle,and there is no negative effect on AIH′s clinical pregnancy rate by autosomal polymorphism.

Chromosome;Chromosome polymorphism;Artificial insemination

R715.2

A

1673-7210（2012）08（b）-0040-03

2012-05-02 本文編輯：郝明明）