乳腺癌中HER-2異常表達的臨床病理學意義

黃文濤

（上海交通大學附屬第六人民醫(yī)院病理科，上海 200233）

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，我國的乳癌每年發(fā)病率大約是20/10萬，在女性惡性腫瘤中位列第三位，且呈逐年上升的趨勢。最新研究表明[1]，人表皮生長因子受體2（HER-2）在25%～30%的原發(fā)性浸潤性乳腺癌中有基因擴增和蛋白的過度表達。HER-2的高表達可提高乳腺癌細胞的轉(zhuǎn)移潛能，被認為是乳腺癌獨立的預后指標之一。近年來隨著醫(yī)療技術(shù)的進步,以HER-2為靶點的靶向治療藥物應(yīng)用于HER-2高表達的乳腺癌患者，顯著減少了腫瘤轉(zhuǎn)移和復發(fā)率, 提高了患者的生存質(zhì)量。因此在臨床病理診斷中，準確檢測HER-2的表達具有重要的治療和預后價值。本文收集了155例浸潤性乳腺癌病例，對其進行HER-2的免疫組織化學（IHC）和熒光原位雜交（FISH）檢測，分析乳腺癌中HER-2異常表達的臨床病理學意義。

1 材料與方法

1.1 組織標本

收集本院病理科診斷的2009年至2011年間浸潤性乳腺癌標本155例，均為女性，術(shù)前未接受過放療、化療?；颊吣挲g27～84歲，平均年齡56歲。所有標本均為4%中性甲醛固定石蠟包埋組織。

1.2 IHC檢測方法

采用免疫組織化學EnVision方法。兔抗人多克隆抗體C-erbB-2（HER-2，Dako公司），工作濃度1∶500。采用PBS代替一抗做陰性對照，已知強陽性乳腺癌標本做陽性對照，操作流程按說明書進行。IHC結(jié)果判斷參照乳腺癌HER-2檢測指南[2]：0+（無染色或＜10%細胞膜染色），1+（＞10% 瘤細胞有不完整胞膜染色），2+（＞10% 瘤細胞有輕度至中度完整胞膜染色），3+（＞10% 細胞膜有完整胞膜強染色者）。

1.3 FISH檢測方法

1.3.1 主要試劑和設(shè)備

HER2/CSP17 探針試劑盒購自北京金菩嘉醫(yī)療科技有限公司。實驗步驟:按試劑盒說明書進行。

1.3.2 結(jié)果的判定

計數(shù)30個細胞核內(nèi)橘紅色的HER-2 熒光信號和17號染色體著絲粒的綠色熒光信號, 計算30個細胞核中紅色信號與綠色信號總數(shù)之比值。比值＜1.8為陰性，提示無基因擴增，比值＞2.2時為HER-2基因擴增，若比值介于1.8～2.2之間，則需要再計數(shù)30個細胞核中的信號重新計數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學處理

選用SPSS11.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，用kappa檢驗進行統(tǒng)計學分析，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 IHC檢測結(jié)果

IHC陽性信號定位于腫瘤細胞胞膜，部分病例伴有胞質(zhì)內(nèi)著色。155例浸潤性乳腺癌標本中，HER-2蛋白表達0+有8例，59例為1+，75例為2+，13例為3+，其表達率分別為5.2%、38%、48.4%及8.4%。

圖1 HER-2基因擴增（FISH法 ×1000）

2.2 IHC和FISH檢測HER-2表達的比較

155例乳腺癌標本中，F(xiàn)ISH法檢測HER-2有擴增（陽性）42例（圖1），無擴增（陰性）113例（圖2）。8例IHC（0+）中有8例FISH陰性，59例IHC（1+）者中有53例FISH陰性，75例IHC（1+）者中有52例FISH陰性，13例IHC（3+）者中12例為FISH陽性。4組中IHC和FISH符合率分別為100%、89.8%、69.3%和92.3%。一致性檢驗證明兩者結(jié)果符合率為80.6%，存在一致性（Kappa=0.363，P=0.000）。其相互關(guān)系詳見表1。

圖2 HER-2基因無擴增（FISH法 ×1000）

表1 FISH與IHC檢測結(jié)果比較

3 討 論

HER-2基因是表皮生長因子受體家族成員之一。HER-2基因位于染色體17q21，編碼相對分子量為185000的跨膜蛋白，在結(jié)構(gòu)域上有胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，具有酪氨酸激酶活性。HER2基因擴增將導致轉(zhuǎn)錄上調(diào)，增加蛋白合成并激活癌基因，從而誘發(fā)腫瘤發(fā)生[3]。研究發(fā)現(xiàn)，具有Her-2基因擴增的患者應(yīng)用受內(nèi)分泌（他莫昔芬）治療后的死亡率明顯增高，提示此類患者可能不適合應(yīng)用內(nèi)分泌治療[4]。2002年美國FDA批準了一種全新的分子靶向藥物Herceptin，在臨床治療中應(yīng)用此類靶向藥物，對那些具有HER-2基因擴增的患者具有良好的治療效果，而對于低度擴增或者是不擴增的患者療效不顯著。因此臨床用藥前，準確檢測Her-2基因表達具有重要的臨床病理意義。

臨床病理診斷中，檢測HER-2蛋白與基因的常用方法是免疫組織化學（IHC）和熒光原位雜交法（FISH）。IHC法具有簡便、廉價、快速等特點，能在蛋白水平觀察HER-2的表達，并與形態(tài)相結(jié)合觀察其定位。另一方面，由于IHC 還有自身缺陷，如組織固定使抗原丟失，固定液種類和儲存時間對染色強度的影響，不同批號抗體之間的差異等都將影響IHC檢測的準確性。FISH法具有快速、檢測信號強、雜交特異性高和可以多重染色等特點，可直觀地觀察細胞核內(nèi)特異性染色體或基因異常，并可與形態(tài)學結(jié)合，是腫瘤診斷的一個重要輔助手段。但FISH結(jié)果會受到一些因素的影響，如標本長時間固定、烤片溫度過高、蛋白消化不當?shù)?，都會造成熒光信號減弱或無信號。固定液的使用也非常重要，F(xiàn)ISH的標本應(yīng)選用4%中性甲醛固定，經(jīng)乙醇等其他固定液實驗效果不佳[5]。因此在臨床病理檢測HER-2表達時，宜將IHC和FISH方法結(jié)合，可取長補短，增加檢測的準確率。在本研究中，IHC0+的患者有8例，F(xiàn)ISH 檢測均為陰性，符合率100%。IHC1+的患者有59例，F(xiàn)ISH 檢測陰性率89.8%（53/59）。既往研究發(fā)現(xiàn)[6]IHC0/1+的病理與FISH檢測的符合率可達95%以上，與本研究結(jié)果基本一致，對于少數(shù)IHC1+病例有FISH陽性，分析原因可能與乳腺癌基因的低拷貝數(shù)有關(guān)。IHC3+的患者有13例，F(xiàn)ISH 檢測陽性率92.3%（12/13），前期研究表明[7]IHC3+的病例與FISH檢測的符合率達90%以上，與本研究結(jié)果相吻合。另外有1例IHC3+，F(xiàn)ISH檢測陰性，可能與17號染色體非整體性有關(guān)。乳腺癌患者17號染色體非整體性是乳腺癌的遺傳學特征，即癌細胞中17號染色體數(shù)多于或少于2個。而這種非整體會造成一部分患者的IHC假陽性結(jié)果，這樣的患者在使用Herceptin時效果并不理想。FISH檢測技術(shù)加入了17號染色體著絲粒探針作為對照探針，因此能明確檢測出患者腫瘤細胞的倍體性，避免了Her-2擴增是由于17號染色體非整體性造成的假陽性結(jié)果。本研究兩組間的檢測差異主要在IHC2+組，IHC2+的患者有75例，F(xiàn)ISH 檢測陽性率僅有30.7%（23/75）。前期研究也顯示[8]IHC2+的乳腺癌病例中基因擴增的比率為8%-32%，與本組數(shù)據(jù)一樣存在明顯差異。因此，在臨床病理診斷中，IHC檢測為2+的病例，如需應(yīng)用靶向藥物治療時，建議加做FISH檢測。

綜上所述，Her2在乳癌患者的診療過程中起著關(guān)鍵的作用，它可以用于評估患者預后，并能指導臨床靶向藥物的選擇。因此，準確檢測乳腺癌中HER-2的表達具有重要的臨床病理學意義。

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