單味中藥抗大腸桿菌內(nèi)毒素的實(shí)驗(yàn)研究

涂可斌，余聲文

(1.咸寧市咸安區(qū)婦幼保健院，湖北咸寧437000;2.湖北省中醫(yī)院)

內(nèi)毒素是細(xì)胞壁外膜結(jié)構(gòu)中的脂多糖，能引起發(fā)熱、休克、器官損傷等多種病理變化和各種并發(fā)癥。中醫(yī)中內(nèi)毒素是“毒”邪的一個(gè)重要組成部分，是引起衛(wèi)氣營血及其傳變的一個(gè)重要病因。因而，如果利用中醫(yī)辨證施治，復(fù)方用藥特長(zhǎng)，對(duì)內(nèi)毒素引起的多方面病理損害進(jìn)行多靶點(diǎn)的防治將具有重要臨床意義。我們采用瓊脂二倍稀釋法進(jìn)行體外抗菌實(shí)驗(yàn)研究，以尋找有效抗大腸桿菌內(nèi)毒素的單味中藥。

1 材料與方法

1.1 藥材提取

所用玻璃儀器洗液浸泡1夜，常水洗凈，蒸餾水沖洗3遍，烤箱烤干，然后250℃干熱滅菌2h備用。生大黃、蒲公英、茵陳、赤芍、金銀花、虎杖、黃連、連翹、黃答、丹參、甘草、桅子、積實(shí)、白頭翁、敗醬草、柴胡(購于藥店)分別用適量甲醇沖洗，然后用適量甲醇浸泡1h，超聲30min，過濾;加入甲醇，再超聲30min，過濾，合并2次濾液，回收甲醇。用肉湯溶解殘?jiān)?，并定容至試?yàn)所需濃度。

1.2 細(xì)菌培養(yǎng)

取凍干大腸桿菌ATCC25922安培1支用2ml無菌肉湯溶解，取1環(huán)接種于固體培訓(xùn)基地中，37℃培養(yǎng)16～18h。然后，取1個(gè)菌落溶于2ml肉湯中，37℃培養(yǎng)6h，取0.1ml溶于100ml肉湯中備用。

1.3 不同中藥抗菌試驗(yàn)

用二倍稀釋法對(duì)各種中藥提取液分別進(jìn)行2倍稀釋，然后在不同濃度藥材提取物試管中加入等體積熱液體瓊脂培養(yǎng)基，混勻并斜放，待凝固后在每支試管中劃線接種大腸桿菌1環(huán)，37℃培養(yǎng)24h，以細(xì)菌生長(zhǎng)的狀況作為判斷指標(biāo)，觀察抗菌作用結(jié)果。接種區(qū)光滑無可見菌落為具抗菌作用;接種區(qū)可見大片細(xì)菌生長(zhǎng)為無抗菌作用。實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。陽性對(duì)照:1ml肉湯加1ml液體瓊脂在試管中混勻，斜放，待凝固后在試管中接種大腸桿菌1環(huán);陰性對(duì)照:1ml肉湯加1ml液體瓊脂在試管中混勻，斜放，不接種大腸桿菌。陽性對(duì)照與陰性對(duì)照和樣品同時(shí)培養(yǎng)。

2 結(jié)果

結(jié)果陽性對(duì)照有菌落生長(zhǎng)，陰性對(duì)照無菌落生長(zhǎng)，樣品抗菌作用結(jié)果見表1。+:表示有白色菌落生長(zhǎng);－:表示無白色菌落生長(zhǎng)。

表1 不同種類中藥抗大腸桿菌試驗(yàn)結(jié)果(g/ml)

3 討論

各種感染性疾病臨床常選用不同種類的抗生素，但一般抗生素沒有抗內(nèi)毒素的作用，單純使用抗生素，僅能抑制或殺滅致病菌，盡管其能有效控制菌血癥，但因其不能破壞內(nèi)毒素，反而使?jié)⑵萍?xì)菌大量釋放內(nèi)毒素，內(nèi)毒素癥狀隨菌體潰解而加重，使發(fā)熱期延長(zhǎng)，并發(fā)癥發(fā)生率增加，如循環(huán)障礙、休克以及彌漫性血管內(nèi)凝血(DIC)等，從而導(dǎo)致病人的死亡率仍然很高。為研究中藥對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的釋放是否有抑制作用，是否會(huì)引起內(nèi)毒素血癥，我們選擇了幾種抗菌作用較強(qiáng)的中藥進(jìn)行了體外抗大腸桿菌內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同種類的中藥對(duì)大腸桿菌抗菌作用不同。黃連、赤芍抗菌作用最強(qiáng)，生大黃、虎杖、連翹、敗醬草次之，其它品種則更弱一些。實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明:①并不是只有清熱解毒類中藥具抗菌作用，其它類中藥也具抗菌作用，如甘草屬補(bǔ)氣類，丹參屬活血類，枳實(shí)屬行氣類等均具有一定的抗菌作用;②并不是清熱解毒類中藥抗菌作用最強(qiáng)，如赤芍屬清熱涼血類，其抗菌作用強(qiáng)度與公認(rèn)的抗菌作用最強(qiáng)中藥黃連一致;③不同功效種類的中藥均具有一定的抗菌作用，有助于說明為什么中醫(yī)臨床能同病異治，異病同治的特點(diǎn)。因?yàn)樵谀骋环矫?，不同功效種類的中藥往往具有相同的功效。從發(fā)展的觀點(diǎn)看，中藥按單一功效分類如一成不變，將不利于中醫(yī)藥臨床與理論的提高。我們尋找具有較強(qiáng)抗菌作用的單味藥，然后以此為基礎(chǔ)，再結(jié)合中醫(yī)組方理論組成新的復(fù)方，將能有效避免抗生素引起的不良后果并治療因細(xì)菌大量釋放內(nèi)毒素引起的內(nèi)毒素血癥。