HPLC測(cè)定骨傷洗劑中烏頭堿的含量

陳麗娟

（廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州 510120）

HPLC測(cè)定骨傷洗劑中烏頭堿的含量

陳麗娟*

（廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州 510120）

目的：建立骨傷洗劑中烏頭堿的HPLC含量測(cè)定方法。方法：Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5.0μm）色譜柱和Agilent C18（20 mm×4.6 mm，5.0μm）預(yù)柱；流動(dòng)相為0.2%冰醋酸（用三乙胺調(diào)至pH 6.25） －乙腈（70∶30），檢測(cè)波長(zhǎng)：235 nm；流速1.0 mL·min－1。結(jié)果烏頭堿在0.094～2.350μg（r＝0.998 5）線性關(guān)系良好，加樣回收率為98.25%，RSD＝2.09%。結(jié)論：方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于骨傷洗劑的質(zhì)量控制。

骨傷洗劑；烏頭堿；高效液相色譜法；含量測(cè)定

骨傷洗劑具有舒筋活絡(luò)，驅(qū)風(fēng)散瘀，消腫止痛的功效，對(duì)骨傷的康復(fù)治療有較好療效，是我院骨科的臨床常用藥。處方主要由生川烏、生草烏、桂枝等5味藥組成。其中川烏、草烏具有祛風(fēng)除濕，溫經(jīng)止痛作用。用于風(fēng)寒濕痹，關(guān)節(jié)疼痛，心腹冷痛，寒疝作痛，麻醉止痛［1］。二者為方中的毒性藥。而烏頭堿是川烏草烏中主要有效成分，口服0.2 mg就令人中毒，3～4 mg就會(huì)將人毒死［2］。為有效控制該產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，建立了高效液相色譜法測(cè)定樣品中烏頭堿的含量。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀（2695 Separation Module，2998 Photodiode Array Detector）；Sartorius BP121S電子天平；骨傷洗劑（廣東省中醫(yī)院制劑室生產(chǎn)，140 g／包，批號(hào)：050901，060301，070901）；烏頭堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110720-200410，純度99%）；甲醇為色譜純，高純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent C18（250mm×4.6mm，5.0μm）色譜柱和Agilent C18（20 mm×4.6 mm，5.0μm）預(yù)柱；流動(dòng)相為0.2%冰醋酸（用三乙胺調(diào)至pH 6.25）－乙腈（70∶30），流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：235nm；柱溫為室溫。

2.2 溶液的制備

2.2.1 烏頭堿對(duì)照品溶液制備 取五氧化二磷減壓干燥至恒重的烏頭堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成含烏頭堿0.047 0 mg·mL－1的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 用四分法取本品約5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醚－氨水（7∶1）80 mL，密塞，浸泡過(guò)夜，濾過(guò)，藥渣用乙醚－氨水（7∶1）洗滌2次，每次20 mL，濾過(guò)，濾液揮干，用甲醇定容于10 mL容量瓶，再取1 mL于5 mL容量瓶用甲醇定容，即得供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

將0.047 0 mg·mL－1烏頭堿對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣2，5，10，20，50μL測(cè)定，以烏頭堿進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明烏頭堿在0.094～2.350μg呈良好線性關(guān)系，回歸方程：Y＝1.54×106X－4.53×104，r＝0.998 5，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品（批號(hào)060301）溶液分別在0，2，4，6，8，10 h進(jìn)行測(cè)定，RSD＝1.84%，表明樣品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 精密度試驗(yàn)

取0.047 mg·mL－1對(duì)照品溶液連續(xù)6次進(jìn)樣，每次20μL，依法測(cè)定，結(jié)果烏頭堿峰面積（n＝6）的RSD＝1.03%。

圖1 骨傷洗劑樣品和烏頭堿對(duì)照品溶液HPLC圖

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批供試品（批號(hào)060301）6份，分別按供試品溶液制備方法制成供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果測(cè)得烏頭堿平均含量為0.918 6mg·g－1，RSD＝1.16%。

2.7 回收率試驗(yàn)

取已知含量的供試品6份（批號(hào)050901）約2.5 g，分別加入烏頭堿對(duì)照品（1.01mg·mL－1）2mL，按供試品溶液制備方法操作，依法測(cè)定。結(jié)果烏頭堿的平均回收率為98.25%，RSD＝2.09%，見(jiàn)表1。

表1 烏頭堿加樣回收率試驗(yàn)

2.8 樣品測(cè)定

取3批供試品，按供試品溶液制備方法制備，每次進(jìn)樣量為10μL測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2，色譜圖見(jiàn)圖1。

表2 骨傷洗劑中烏頭堿含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）／mg·g－1

3 討論

實(shí)驗(yàn)中用四分法取5 g樣品制備供試品溶液是由于骨傷洗劑飲片的粉碎粒度較大，取樣較少時(shí)樣品欠均勻，這種方法取樣保證樣品含量的準(zhǔn)確性。最后采取稀釋供試品溶液再進(jìn)樣的方式。

我們?cè)鴩L試用薄層鑒定法作為骨傷洗劑中烏頭堿的限量檢查，雖然顯色穩(wěn)定性好，但精密度不高，不能準(zhǔn)確測(cè)定出藥品中烏頭堿含量，用高效液相檢測(cè)烏頭堿的含量能準(zhǔn)確反映出藥品的毒性水平，較好地指導(dǎo)生產(chǎn)和各工藝指標(biāo)的調(diào)整。

烏頭堿生理活性強(qiáng)，既是有效成分，也是毒性成分，對(duì)其含量的測(cè)定，有利于臨床用藥安全。在流動(dòng)相比例的選擇上，曾采用甲醇 －水（65∶35）、（70∶30），但分離效果都不理想，最后以0.2%冰醋酸（用三乙胺調(diào)至pH 6.25） －乙腈（70∶30）為流動(dòng)相，分離效果好。本法烏頭堿的平均回收率較高，是一種簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的測(cè)定方法，為制定骨傷洗劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠的依據(jù)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：220.

［2］許廷生，梁秀蘭.川烏的炮制及中毒救治［J］.中國(guó)藥物與臨床，2002，2（6）：414.

Determ ination on the Content of Aconitine in Gushang-Xiji by HPLC

Chen Li-juan
（Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou510120，China）

Objective：To establish a methed for the determination the contents of aconitine in Gushang-Xiji.M ethods：An Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5.0μm）Column was used with mobile phase being 0.2%Acetic adjuested with Triethylamine to pH 6.25-Acetonitrile（70∶30），detecting wavelength of 235 nm.Results：Linearitieswas good at 0.094～2.350μg（r＝0.9 985）.The average recover rate was 98.25%（RSD＝2.09%）.Conclusion：Themethod is accurate and reliable，can be used to determinate aconitine in Gushang-Xiji.

Gushang-Xiji；Aconitine；HPLC；Determination

*［通訊作者］陳麗娟，E-mail：olay22＠163.com

2012-04-18）