高效液相色譜法測(cè)定調(diào)經(jīng)種玉丸中川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量

錢(qián) 芳，張 芹

(江蘇省中醫(yī)院藥劑科，江蘇 南京 210029)

調(diào)經(jīng)種玉丸由當(dāng)歸、川芎、續(xù)斷、白芍、熟地、杜仲等中藥組成，具有養(yǎng)血、調(diào)經(jīng)種子的功能，用于月經(jīng)不調(diào)、不孕不育等癥。為更好地控制調(diào)經(jīng)種玉丸的質(zhì)量，本試驗(yàn)中采用高效液相色譜法測(cè)定調(diào)經(jīng)種玉丸中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，2998型二極管陣列檢測(cè)器，EmpowerⅡ色譜工作站(美國(guó) Waters);1/10萬(wàn)電子分析天平(BP-211D型，德國(guó)Sartorius);KQ-1000E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);101-1A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(南通滬通制藥機(jī)械設(shè)備廠);HH-4數(shù)顯型恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)。川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為111685-200401);調(diào)經(jīng)種玉丸(江蘇省中醫(yī)院制劑部，批號(hào)分別為100222，100223，100224);所用中藥材均購(gòu)自江蘇省藥材公司，并由本室專家鑒定;高效液相色譜所用試劑為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Hedera C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈-水(28∶72);檢測(cè)波長(zhǎng)[1]:212nm;柱溫:30℃;流速:1.0mL/min。分別吸取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀中，按上述條件測(cè)定，供試品溶液與對(duì)照品溶液在相同位置有較大吸收，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1 mL含川續(xù)斷皂苷Ⅵ78μg的對(duì)照品溶液。稱取調(diào)經(jīng)種玉丸粗粉2 g，加70%甲醇50 mL回流30 min，蒸干，加水30 mL溶解，乙醚振搖提取3次(每次25 mL)，棄去乙醚液，用水飽和的正丁醇振搖提取3次(30，30，20 mL)，合并正丁醇液，用氨試液洗滌3次(每次20 mL)，正丁醇液蒸干。加流動(dòng)相乙腈-水(30∶70)定容至10 mL，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。除續(xù)斷外，按處方比例稱取其他各藥材，按工藝制成不含續(xù)斷制劑，照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

分別精密吸取質(zhì)量濃度為78μg/mL的對(duì)照品溶液2，5，10，20，40，60 μL，注入高效液相色譜儀中測(cè)定。經(jīng)線性回歸，得回歸方程 Y=188 685X-2 642，r=1.000 0(n=6)，川續(xù)斷皂苷Ⅵ進(jìn)樣量在0.156～4.68μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，精密吸取20μL，注入高效液相色譜儀，重復(fù)測(cè)定6次。結(jié)果峰面積的 RSD為1.90%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):精密稱取同一個(gè)批號(hào)的樣品(100224)6份，依法制備供試品溶液并測(cè)定。結(jié)果川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量的 RSD為0.86%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，按上述色譜條件，于0，2，4，6，8，12 h時(shí)分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果色譜峰面積的 RSD為1.23%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):稱取已知含量的調(diào)經(jīng)種玉丸樣品(100224)約1 g，精密稱定，共9份，分別加入對(duì)照品，依法制備供試品溶液，精密吸取20μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 川續(xù)斷皂苷Ⅵ加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3個(gè)批號(hào)的樣品，每批2份，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果批號(hào)分別為100222，100223，100224的樣品中川續(xù)斷皂苷Ⅵ平均含量為0.735，0.744，0.741 mg/g。

3 討論

2010年版《中國(guó)藥典(一部)》續(xù)斷中的川續(xù)斷皂昔Ⅵ測(cè)定所采用的流動(dòng)相為乙腈-水(30∶70)，由于調(diào)經(jīng)種玉丸處方中有十多味藥材，雜峰多，不能很好地分離，故將流動(dòng)相比例調(diào)整為乙腈-水(28∶72)，主峰能完全分開(kāi)。

供試品處理時(shí)，考察了不同濃度的甲醇作為提取溶劑及不同提取方法(回流提取、超聲提取)的提取效果，以70%甲醇回流提取較佳。同時(shí)還考察了此方法的不同提取時(shí)間和不同溶劑倍量。

進(jìn)行樣品中川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量測(cè)定時(shí)，樣品預(yù)處理用皂苷類測(cè)定常用的水飽和正丁醇液萃取，然后用氨試液洗滌，結(jié)果用高效液相色譜法測(cè)定時(shí)，樣品雜質(zhì)峰過(guò)多而干擾測(cè)定，后參考文獻(xiàn)[2]方法，待測(cè)組分與其他組分能很好地分離。

本試驗(yàn)對(duì)調(diào)經(jīng)種玉丸中的川續(xù)斷皂苷Ⅵ建立了含量測(cè)定方法，具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)的特點(diǎn)，可作為調(diào)經(jīng)種玉丸的質(zhì)量控制方法。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:309.

[2]瞿發(fā)林，過(guò) 偉.舒筋活絡(luò)酒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2009，25(4):318-320.