高效液相色譜法測定轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中轉(zhuǎn)化糖含量

咸瑞卿，陳德俊，徐玉文

(山東省食品藥品檢驗(yàn)所，山東 濟(jì)南 250101)

轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液是由葡萄糖與果糖等分子混合制成的同時含有電解質(zhì)的復(fù)方制劑，適用于臨床需要非口服途徑補(bǔ)充水分或能源及電解質(zhì)患者的補(bǔ)液治療，尤其適用于作為糖尿病患者的能量及電解質(zhì)補(bǔ)充劑，燒、創(chuàng)傷，術(shù)后及感染等胰島素抵抗患者的能量及電解質(zhì)補(bǔ)充劑[1-2]。目前YBH05732005，YBH21112005、第34版《美國藥典》[3]測定轉(zhuǎn)化糖含量的方法是利用果糖和葡萄糖的還原性，定量地將堿性酒石酸銅還原成氧化亞銅，從而通過測定生成的氧化亞銅質(zhì)量計算出轉(zhuǎn)化糖的含量。但該方法不能分別測定兩種單糖的含量，而且操作煩瑣，重現(xiàn)性差。筆者采用高效液相色譜-紫外光檢測器(HPLC-UV)法同時測定葡萄糖和果糖的含量，簡便快速，分離效果、重現(xiàn)性、精密度良好，在常規(guī)質(zhì)量分析中能更好地控制該制劑的質(zhì)量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀;CP225D型電子天平。D-無水葡萄糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為110833-200904，含量100.0%);果糖對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為100231-200904，含量100.0%);磷酸為色譜純，水為純化水;轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液(規(guī)格為250 mL:果糖6.25 g葡萄糖6.25 g，青島華仁藥業(yè)有限公司，批號分別為B1104001，B1104002，B1104003)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Sugar SH1011柱(8.0 mmID×300 mL);流動相:0.04 mol/L的磷酸溶液;流速:0.5 mL/min;檢測波長:195 nm;進(jìn)樣量:20μL;柱溫:50℃。在此條件下，色譜圖見圖1?？瞻讓φ掌啡芤荷V圖在對照品溶液峰位置無干擾峰，葡萄糖與果糖分離度良好(大于1.9)，保留時間葡萄糖約為13.54 min、果糖約為14.47 min，理論板數(shù)均達(dá)15 000，表明該系統(tǒng)適用性良好。

2.2 溶液制備

分別精密稱取 D-無水葡萄糖、果糖對照品49.98 mg和50.05 mg，置10 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取樣品適量(約相當(dāng)于轉(zhuǎn)化糖100 mg)，置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取輔料適量，按處方比例配制，按供試品溶液制備方法制備空白對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對照品溶液 5，10，15，20，30，40，50μL進(jìn)樣。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)作圖，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，葡萄糖進(jìn)樣量在24.99～249.90μg范圍內(nèi)，果糖在25.25～252.50μg范圍內(nèi)分別與相應(yīng)峰面積呈良好線性關(guān)系。葡萄糖和果糖的回歸方程分別為Y1=8.665X1+6.366(r1=1.000 0)和Y2=43.963X2+17.547(r2=1.000 0)。

加樣回收試驗(yàn):精密量取已知準(zhǔn)確含量的同一樣品適量(約相當(dāng)于轉(zhuǎn)化糖50 mg)，共取9份，分成3組，分別置10 mL量瓶中;另分別精密稱取 D-無水葡萄糖和果糖對照品0.501 0，0.504 8 g，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取3，5，7 mL，各3份，置樣品的量瓶中加流動相稀釋至刻度，搖勻。進(jìn)樣20μL，按外標(biāo)法測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別在 0，1，2，5，10 h時進(jìn)樣，依法測定。結(jié)果葡萄糖與果糖峰面積的 RSD分別為0.52%和0.68%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 加樣回收試驗(yàn)測定結(jié)果(n=9)

精密度試驗(yàn):取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果葡萄糖與果糖峰面積的 RSD分別為0.72%和0.57%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品適量(約相當(dāng)于轉(zhuǎn)化糖100 mg，批號為B1104001)共6份，分別置10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，依法測定。結(jié)果葡萄糖與果糖峰面積的 RSD分別為0.44%和0.42%，表明分析方法重復(fù)性良好。

2.4 樣品含量測定

取樣品3批，分別按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密量取對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，依法測定。結(jié)果見表2。

3 討論

國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)YBH05732005和YBH21112005參照第34版《美國藥典》[3]采用重量法測定轉(zhuǎn)化糖的含量，不能分別測定果糖與葡萄糖的含量，且過濾需用的G4垂熔坩堝(國內(nèi)市售)不耐堿，導(dǎo)致回收率、重現(xiàn)性差。另采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法[4]、高效液相色譜-示差折光檢測法[5]等方法雖能分別測定葡萄糖和果糖的含量，但存在儀器昂貴、適用性不強(qiáng)等問題。

采用高效液相色譜-紫外光檢測器(HPLC-UV)法分別測定轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中葡萄糖和果糖的含量，方法學(xué)考察結(jié)果表明，方法的重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準(zhǔn)確，為該制劑的質(zhì)量控制與檢測提供了一種更加準(zhǔn)確、方便、科學(xué)的方法。

表2 樣品含量測定結(jié)果(%)

[1]王歐明.含果糖制劑的臨床合理應(yīng)用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29(4):330-331.

[3]Multiple Electrolytes and Invert Sugar Injection.《美國藥典》[M].第34版.2011:2 674-2 677.

[4]楊 俊，劉江生，蔡繼寶，等.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定煙草中的水溶性糖[J].分析化學(xué)研究簡報，2005，33(11):1 596-1 598.

[5]孫守兵.高效液相色譜法測定轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液中果糖和葡萄糖的含量[J].中國新藥與臨床雜志，2010，29(12):916-918.