上皮鈣黏蛋白及C－erbB－2在非小細胞肺癌中的表達及意義

王鳳玲，隋小芳，楊永清，陳尚君＊

（1.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院 老年病科，黑龍江 佳木斯154002；2.惠東縣人民醫(yī)院 呼吸內科，廣東 惠州516300）

大量研究表明，上皮鈣黏蛋白E－cadherin（E－cad）、β－catenin（β－cat）等黏附分子以及癌基因cerbB－2在肺癌的浸潤轉移過程中起著重要作用［1，2］。E－cad與β－cat等蛋白形成 E－cad／cat復合體，共同維持組織細胞的黏附平衡，而腫瘤病人細胞中E－cad與β－cat表達出現異常減少，而癌基因cerbB－2在腫瘤細胞中過表達，從而破壞 E－cad／cat復合體，造成腫瘤細胞的浸潤轉移。本實驗采用SP法檢測41例手術切除的非小細胞肺癌（NSCLC）標本中E－cad、β－cat及 C－erbB－2的表達情況，來探討上述三者與NSCLC臨床分期、病理分級及淋巴結轉移的相關性。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 收集2009年1月～2010年12月佳木斯大學附屬第一醫(yī)院病理科保存的NSCLC標本41例，均經福爾馬林固定、石蠟包埋處理。其中男30例，女11例。按組織類型分鱗狀細胞癌25例，腺癌16例；病理分級中Ⅰ＋Ⅱ級26例，Ⅲ級15例。有淋巴結轉移22例，無轉移19例；PTNM的臨床分期中Ⅰ＋Ⅱ期22例，Ⅲ＋Ⅳ期19例。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑及檢測方法 鼠抗人E－Cadherin單克隆抗體、鼠抗人β－catenin單克隆抗體、鼠抗人C－erbB－2單克隆抗體、S－P免疫組化廣譜試劑盒（通用）、DAB顯色劑等，均來自福州邁新生物技術有限公司。應用SP方法分別檢測E－cad、β－cat及C－erbB－2在NSCLC中的表達情況。試驗步驟嚴格按照S－P試劑盒說明書進行，用已知的E－cad、β－cat及C－erbB－2的陽性切片（福州邁新生物技術有限公司提供）作為陽性對照，用PBS作為一抗做陰性對照。

圖2 β－cat在肺鱗癌中的表達（×200）

圖1 E－cad在肺鱗癌中的表達（×200）

1.2.2 結果判斷 E－cad及β－cat染色結果根據熊家安［3］等人的評判標準，正常細胞中的E－cad及β－cat主要定位于細胞膜，免疫組化染色示連續(xù)性分布的棕黃色顆粒狀為陽性細胞，細胞膜不著色或單純胞漿著色為陰性，切片中染色癌細胞≤25%為（＋），26%～75%為（＋＋），≥76%為（＋＋＋）。其中（＋＋～＋＋＋）為高表達，（－～＋）為低表達或異常表達。

C－erbB－2染色結果根據劉萍［4］等人的評判標準，C－erbB－2染色在細胞漿和（或）胞膜中呈棕黃色顆粒為陽性細胞，顯微鏡下，切片中陽性細胞數＜5%為（－），5%～24%為（＋），25%～49%為（＋＋），≥50%為（＋＋＋），每張切片計數200個細胞。其中（－～＋）為低表達，而（＋＋～＋＋＋）為高表達。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。采用χ2檢驗對計數資料作比較分析，相關分析采用Spearman相關分析。

2 結果

2.1 E－cad、β－cat及 C－erbB－2的表達與 NSCLC 的臨床病理特征

在 正 常 對 照 組 E－cad、β－cat 均 為 高 表 達（100%）。在41例NSCLC免疫組化染色結果中E－cad及β－cat低表達率分別占60.98%（高表達39.02%）及53.66%（高表達46.34%）；兩指標分別在兩組間對比χ2＝6.83和χ2＝7.92，P均＜0.05。

在正常對照組中C－erbB－2均無表達，在41例NSCLC中C－erbB－2有23例出現高表達，高表達率為56.10%，兩組差異顯著χ2＝7.84，P＜0.05。

E－cad及β－cat在NSCLC的不同病理分級間、不同臨床分期間、有無淋巴結轉移間的高表達率見表1及圖1－3。

2.2 E－cad、β－cat及C－erbB－2三者之間的相互關系

在41例NSCLC中三者之間的相互關系見表2、表3。經Spearman相關分析表明 E－cad、β－cat與C－erbB－2之間呈負相關（P＜0.01和P＜0.05），E－cad與β－cat之間呈正相關（P＜0.05）。

表1 41例NSCLC患者E－cad和β－cat及C－erbB－2表達與臨床病理特征的關系

表2 C－erbB－2與 E－cad、β－cat相關性分析

表3 E－cad與β－cat相關性分析

3 討論

有研究顯示，在肺癌中E－cad及β－cat的表達明顯降低，其低表達與腫瘤的臨床分期及淋巴結轉移情況相關聯(lián)［5，6］。我們的研究發(fā)現，E－cad及β－cat的表達與NSCLC的病理分級，臨床分期及淋巴結轉移有關，而與腫瘤的組織分型不相關，兩者的表達呈正相關關系。在41例的NSCLC中，E－cad及β－cat低表達或異常表達率高達61.0%及53.7%，在低分化及Ⅲ～Ⅳ期肺癌中表達更為明顯下調，在有無淋巴結轉移中兩者的表達水平也存在顯著的差異性，兩者在腫瘤中的異常表達，破壞了E－cad／cat結構的完整性，黏附功能喪失而最終導致腫瘤細胞的浸潤轉移。

C－erbB－2（Her－2，Neu）是 表 皮 生 長 因 子 受 體（EGFR）家族的重要成員之一。在正常組織細胞中C－erbB－2蛋白基本不表達，而在腫瘤細胞中C－erbB－2蛋白成高表達，但是在不同類型的癌癥中C－erbB－2蛋白的高表達與腫瘤的分級及臨床分期相關性研究結果并不一致［7］。在本實驗中，C－erbB－2有23例出現高表達，且其表達水平與腫瘤的淋巴結轉移情況有顯著相關性，與腫瘤的組織分型及臨床病理特征無明顯相關。另外，本實驗還發(fā)現C－erbB－2高表達且與E－cad及β－cat的表達呈負相關。C－erbB－2的高表達參與多種腫瘤細胞信號的傳導，使細胞有絲分裂相關的蛋白或酶的活性持續(xù)增加，細胞增殖周期縮短，細胞過度增殖，惡性表現增強以及抗凋亡能力增強，同時，它還促使E－cad基因的表達下調，改變E－cad的黏附特性。另一方面高表達的C－erbB－2還影響E－cad／cat復合體的穩(wěn)定性而致其解聚，最終造成腫瘤細胞的脫落轉移，浸潤能力進一步增強。

本研究表明，E－cad、β－cat及 C－erbB－2與非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展中是密切相關的，并在此過程中起到重要的調控作用。因此聯(lián)合檢測上述三者的表達，對判斷病情和預后有一定價值。

［1］易明福 魏曉梅.C－erbB－2在非小細胞肺癌中表達的研究［J］.臨床肺癌雜志，2008，13（4）：409.

［2］仇麗紅，趙梅香，黃 潔，等.c－erbB－2基因生物學特性研究進展［J］.現代腫瘤醫(yī)學，2007：15（1）：102.

［3］Frederick LA，Matthews JA，Jamieson L.Matrix metalloproteinase－10is a critical effector of protein kinase Ciota－Par6alpha－mediated lung cancer［J］.Oncogene，2008，27（35）：1038.

［4］劉 萍，田薇薇，梁 冰.非小細胞肺癌組織中C－erbB－2蛋白的表達［J］.鄭州大學學報（醫(yī)學版），2006，41（5）：917.

［5］趙煥芬，何春年.小細胞肺癌與c－kit基因及其研究進展［J］.現代腫瘤醫(yī)學，2008，16（9）：1632.

［6］王 揚，吳一龍.早期非小細胞肺癌預后基因標志研究現狀和思考［J］.腫瘤研究與臨床.2010，（9）：577.

［7］閆 明，王淑玲，陳小兵，等.肺癌中 C－erbB－2及基質金屬蛋白酶－10的表達［J］.廣東醫(yī)學，2010，（31）22：15.