腹腔注射阿霉素誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)擴(kuò)張型心肌病大鼠模型的建立

秦保鋒，嚴(yán)世蕓

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，上海200021；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海201203）

擴(kuò)張型心肌?。―ilated cardiomyopathy，DCM）是以心肌細(xì)胞壞死、間質(zhì)纖維化、心肌間質(zhì)膠原重構(gòu)為主要病理特征，以心腔［左心室和（或）右心室］擴(kuò)大、心肌收縮功能障礙為主要特征的原因不明性心肌疾病，也是除冠心病和高血壓以外導(dǎo)致心力衰竭的主要病因之一。DCM是國際醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的難題，一直被定義為“原因不明的心肌疾病”，其病因復(fù)雜，可能與特發(fā)性、家族性或遺傳性、病毒性、免疫性、酒精性或中毒有關(guān)［1］。近年來，DCM發(fā)病有上升趨勢，歐美資料顯示［2］：心肌病年發(fā)病率為3／10萬－6／10萬，其中擴(kuò)張型心肌病占40%－60%，在美國每年有上萬人死于DCM，5年生存率不足50%，且男性的發(fā)病率是女性的2.5倍，在我國發(fā)病率為13／10萬－84／10萬不等，病死率較高，且有逐年上升的趨勢［3］。目前，仍需對其發(fā)病機(jī)制及治療進(jìn)行進(jìn)一步研究。因此需要建立穩(wěn)定、成熟的DCM的動(dòng)物模型以供試驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和主要試劑

24只清潔級雄性SD大鼠（上海西普爾－必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司），體重180－200g。鹽酸阿霉素（深圳萬樂藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字：H44024360，批號：1012E2），大鼠血漿腦鈉素（BNP）ELISA 試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）。

1.2 建立DCM動(dòng)物模型

大鼠隨機(jī)分為正常組（n＝12）和DCM組（n＝12）。DCM 組予腹腔注射阿霉素2.5mg／（kg·week），生理鹽水稀釋濃度1mg／ml，正常組腹腔注射等量生理鹽水。每周根據(jù)體重調(diào)整阿霉素劑量，用藥6周。

1.3 記錄大鼠體重的變化及死亡率

每周測量兩組大鼠的體重，觀察大鼠的狀態(tài)及死亡情況。

1.4 超聲心動(dòng)圖檢查

于第6周末對存活大鼠及正常對照組大鼠用苯巴比妥麻醉后行超聲心動(dòng)圖檢查。記錄大鼠左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）、左室短軸縮短率（FS）。

1.5 血漿BNP檢測

造模第6周，將正常組和DCM組大鼠腹主動(dòng)脈取全血，靜置30min后，離心分離血漿，按試劑盒說明檢測BNP。

1.6 心肌病理切片

正常組和DCM組大鼠處死后迅速打開胸腔，獲取心臟，用刀片橫切心臟，用10%多聚甲醛固定后，取左心室前壁心肌進(jìn)行切片，HE染色。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS11.5軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，本文結(jié)果均用（）表示，兩組數(shù)據(jù)間比較用兩樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常組與模型組大鼠體重變化及死亡率

造模前兩組大鼠體重?zé)o差異，給藥后1周，模型組大鼠逐漸出現(xiàn)懶動(dòng)，少食，腹瀉等癥狀，體重逐漸下降，部分大鼠出現(xiàn)腹水。第6周末，DCM大鼠體重（226.67±14.72）g明顯低于正常組（420±25.88）g，P＜0.01。模型組大鼠于給藥第4周開始，出現(xiàn)第一只大鼠死亡（腹瀉），至造模第6周，共死亡2只。死亡率為16.7%，正常對照組大鼠全部存活。

2.2 正常組與模型組大鼠超聲心動(dòng)圖檢查結(jié)果

正常組與模型組超聲心動(dòng)圖檢查結(jié)果：EF（%）、FS（%）正常組分別是86.17±3.82、52.67±3.27，模型組分別是63.83±3.49、34.67±3.5，EF、FS比較有顯著差異（P＜0.01）。

2.3 正常組與模型組大鼠血漿BNP（pg／ml）水平

模型組大鼠血漿BNP水平（644.68±44.79）高于正常對照組（206.07±20.15），兩組具有顯著性差異P＜0.01。

2.4 正常組與模型組大鼠心肌病理切片

正常組心肌HE染色：心肌纖維排列整齊，結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞核明顯，呈圓形或類圓形，無心肌纖維斷裂，胞質(zhì)均勻豐富，心肌間血管豐富，心肌間質(zhì)無異常改變。見圖1。

模型組心肌HE染色：心肌纖維排列紊亂，心肌纖維斷裂，細(xì)胞間隙增寬、水腫，部分空泡變性，心肌組織中小血管擴(kuò)張充血，間質(zhì)出血，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤，心肌細(xì)胞輕度腫脹。見圖2。

圖1 正常組大鼠心?。℉E）（×200倍）

圖2 模型組大鼠心?。℉E）（×200倍）

3 討論

擴(kuò)張型心肌病的發(fā)病與多種因素有關(guān)，發(fā)病原因比較復(fù)雜，建立理想的動(dòng)物模型是研究擴(kuò)張型心肌病發(fā)病機(jī)理的重要手段，目前常用的有尾靜脈注射阿霉素、口服呋喃唑酮、腹腔注射多柔比星、腹腔注射柯薩奇病毒、轉(zhuǎn)基因等誘導(dǎo)的擴(kuò)張型心肌病模型［4－8］。阿霉素（adriamycin，ADR）可引起類似擴(kuò)張型心肌病樣病理、生理改變以及在此基礎(chǔ)上發(fā)生的充血性心力衰竭。因此，阿霉素誘導(dǎo)心肌病模型應(yīng)用廣泛。

阿霉素誘導(dǎo)擴(kuò)張型心肌病模型的方法由于取材方便，方法簡單，結(jié)果滿意，應(yīng)用較廣，但同時(shí)也存在缺點(diǎn)，即動(dòng)物死亡率高，模型周期長。目前尚無統(tǒng)一的給藥標(biāo)準(zhǔn)。文獻(xiàn)報(bào)道［9］阿霉素誘導(dǎo)大鼠擴(kuò)張型心肌病模型成功的累計(jì)藥量為15mg／kg，目前給藥方法主要有經(jīng)尾靜脈注射和腹腔注射兩種途徑。經(jīng)尾靜脈注射由于滲漏可造成嚴(yán)重的靜脈炎以及周圍組織的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致管腔堵塞而影響實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。經(jīng)腹腔注射方法簡單，容易操作，可避免上述缺點(diǎn)。短期大量給藥，動(dòng)物死亡率高，模型成功率低；長期小量給藥，造模周期長，死亡率并無明顯降低，同時(shí)不利于實(shí)驗(yàn)研究，本研究顯示用阿霉素2.5mg／（kg·week），連續(xù)6周腹腔注射給藥，模型死亡率僅16.7%，各項(xiàng)觀察指標(biāo)包括超聲心動(dòng)圖檢查、血漿BNP水平、心肌病理切片等結(jié)果均符合擴(kuò)張型心肌病的改變。模型成功率為83%，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［10］。本研究結(jié)果顯示，該制造擴(kuò)張型心肌病動(dòng)物模型的方法成功率高，造模周期較短，結(jié)果可靠，可以做為擴(kuò)張型心肌病基礎(chǔ)研究的動(dòng)物模型。

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