紅花配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

周 維，胡昌江，楊 麗，戴德蓉

（四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 彭州 611930）

紅花配方顆粒是由紅花單味中藥經(jīng)過(guò)提取、濃縮、干燥、制粒而成。其性味、歸經(jīng)、功效與原飲片基本一致。紅花藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)目前收載于2010年版中國(guó)藥典一部［1］中，而紅花配方顆粒卻缺乏有效的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在全國(guó)范圍內(nèi)各生產(chǎn)企業(yè)皆用其內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行質(zhì)量控制。為有效地控制紅花配方顆粒的質(zhì)量，保證用藥安全、有效、可控，筆者按照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的《中藥配方顆粒管理暫行規(guī)定》通知要求，參考有關(guān)的文獻(xiàn)［2］，采用薄層色譜法對(duì)紅花配方顆粒進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法對(duì)紅花配方顆粒中的羥基紅花黃色素A進(jìn)行含量測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥

CAMAG Lionmat-5半自動(dòng)薄層點(diǎn)樣儀，CAMAG TLC Visualizer薄層成像系統(tǒng)；Waters 2695-2996高效液相色譜儀；empower色譜工作站；BP211D（Sautoris，德國(guó)）電子天平；KQ3200B型超聲波清洗器；硅膠G板（青島海浪硅膠干燥劑制造廠）。

羥基紅花黃色素A（批號(hào)：111637-200905，供含量測(cè)定用，以91.8%計(jì)算，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所）；紅花（批號(hào)：120907-201010，TLC法鑒定，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所）；紅花配方顆粒（批號(hào)：0806047，0807095，0812028，0901091，四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司）。

甲醇（迪馬公司，色譜純）、乙腈（迪馬公司，色譜純）、水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

1.2 定性鑒別實(shí)驗(yàn)

1.2.1 供試品溶液的制備

取本品（批號(hào)為0806047）約0.5g，加80%丙酮溶液5mL，密塞，振搖15min，靜置，吸取上清液，即為供試品溶液。

1.2.2 對(duì)照藥材的制備

取紅花對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。

1.2.3 薄層層析

吸取上述兩種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-甲醇（3∶7∶1∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見圖1。

圖1 紅花配方顆粒TLC（365nm）

1.3 含量測(cè)定

1.3.1 色譜條件

色譜柱：迪馬 Diamonsil C18（5μm，250mm×4.6mm）；流動(dòng)相：乙腈-甲醇-0.2%磷酸（2∶26∶72）；檢測(cè)波長(zhǎng)：403nm；流速：1mL·min-1；柱溫：35℃。此色譜條件下，供試品中羥基紅花黃色素A色譜峰與相鄰的色譜峰達(dá)到了基線分離，見圖2。

1.3.2 供試品溶液的制備

取本品適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理40min，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

1.3.3 對(duì)照品溶液的制備

取羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，精密稱定，加25%甲醇制成每1mL含0.15mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。

圖2 羥基紅花黃色素A（A）和紅花配方顆粒（B）的HPLC

1.3.4 線性關(guān)系

精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品4.55mg，置25mL量瓶中，加25%甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣0.5 μL、6μL、10μL、15μL、20μL，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得回歸方程為Y ＝2×106X+201471（r＝0.9998），表明羥基紅花黃色素A進(jìn)樣量在0.091～3.64μg／mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.3.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取“1.3.3”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測(cè)得羥基紅花黃色素A峰面積的RSD為0.37%，表明儀器精密度良好。

1.3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)為0806047）適量，按“1.3.2”項(xiàng)下方法分別制備6份供試品溶液，分別測(cè)定羥基紅花黃色素A峰面積積分值，結(jié)果RSD為0.23% ，表明方法重復(fù)性良好。

1.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取紅花配方顆粒（批號(hào)為0806047）適量，按“1.3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫下保存，分別于0h、2h、4h、6h、8h各進(jìn)樣10μL，測(cè)定羥基紅花黃色素A的峰面積，結(jié)果RSD為0.23% ，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

1.3.8 回收率試驗(yàn)

取已知含量的紅花配方顆粒（批號(hào)為0806047）6份各約0.5g，精密稱定，分別精密加入羥基紅花黃色素A對(duì)照品適量，按“1.3.2”項(xiàng)下方法制備，測(cè)定羥基紅花黃色素A的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 紅花配方顆粒的回收率試驗(yàn)結(jié)果

1.3.9 樣品的測(cè)定

取紅花配方顆粒（批號(hào)為0807095，0812028，0901091）適量，各3份，精密稱定，按“1.3.2”項(xiàng)下方法制備，分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算羥基紅花黃色素A含量，結(jié)果見表2。

表2 紅花配方顆粒的含量測(cè)定結(jié)果 （n＝3）

2 討論

依據(jù)中國(guó)藥典2010年版一部中紅花的鑒別方法，并參考有關(guān)文獻(xiàn)，藥典方法不能檢出紅花配方顆粒中的主斑點(diǎn)。因此，在藥典方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，其改進(jìn)方法色譜斑點(diǎn)清晰、分離度佳，重現(xiàn)性亦良好。紅花配方顆粒與紅花對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，說(shuō)明紅花配方顆粒與紅花飲片基本一致。

按現(xiàn)行藥典含量測(cè)定方法主峰拖尾。因此在藥典方法的基礎(chǔ)上對(duì)方法進(jìn)行了改進(jìn)，所得色譜峰分離度高、峰形好。其回收率、重復(fù)性、穩(wěn)定性、精密度均較好，可用于紅花配方顆粒的質(zhì)量控制。

筆者對(duì)紅花配方顆粒中的山奈素的含量測(cè)定進(jìn)行了考察，山奈素的含量為0.02%，含量很低，故未做具體研究。

［1］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［M］.一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］趙明波，鄧秀蘭，王亞玲，等.高效液相色帶法測(cè)定紅花中的羥基紅花黃色素 A［J］.色譜，2003，21（6）：593-595.