參麥注射液中5－羥甲基糠醛的含量測定

吳 毅，許 妍，趙 雯，吳鐵榮

（江西省食品藥品檢驗所，江西 南昌330029）

參麥注射液收載于《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第十八冊，制劑由紅參和麥冬兩味藥材及輔料吐溫80組成，具有益氣固脫、養(yǎng)陰生津、生脈之功效.臨床用于治療氣陰兩虛型導致的休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒細胞減少癥.

由于在參麥注射液中含有大量的糖類成分，主要有果糖、葡萄糖、蔗糖和麥芽糖等.而葡萄糖等糖類經過滅菌過程容易脫水反應生成5－羥甲基糠醛（5－Hydroxymethyl furfural，簡稱5－HMF）.一方面，藥理研究表明：5－HMF對人體橫紋肌和內臟有損害；另一方面，雖然5－HMF本身無色，但由于5－HMF發(fā)生聚合而由聚合物導致變色，且其產生量與葡萄糖顏色的深淺成正相關性，因此5－HMF的量可顯示產品中葡萄糖的分解程度.在含葡萄糖或其他單糖的制劑中5－HMF常作為一個重要的有關物質加以控制，如《中國藥典》2005版、BP2000版、USP27版和日本藥局方中收載的葡萄糖注射液均采用UV法控制5－HMF的含量，根據(jù)該方法，一般要求5－HMF含量＜2.5μg·mL－1.基于以上原因，我們建立了HPLC法測定參麥注射液中5－HMF的含量，對抽驗的6個生產企業(yè)，190批次樣品進行檢測.

參考《中國藥典》2005年版葡萄糖注射液項下UV法對5－HMF含量測定的要求，按照5－HMF含量＜2.5μg·mL－1作為參麥注射液中HPLC法測定的限度，共檢測190批次樣品，檢出5－HMF含量＞2.5μg·mL－1的批次169批，超出率：88.95%.

1 儀器與試藥

SHIMADZU LC－2010AHT型高效液相色譜儀（島津科技有限公司，日本）.5－羥甲基糠醛（含量＞99%，批號：1415620，Aldrich公司 ）、甲醇 （色譜純，Sigma－aldrich公司）、去離子水（自制），其他試劑均為分析純.

2 色譜條件

色譜柱：Venusil MP C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇－水（93∶7），流速：1.0mL·min－1；柱溫：30 ℃ ；檢測波長：284nm.

3 方法學考察

3.1 專屬性試驗 按照處方的制備工藝，添加相應的輔料，制備缺少紅參和麥冬的樣品，即制備缺少5－HMF的參麥注射液樣品，取樣品原液作為供試品溶液，按照上述色譜條件分析，結果顯示：陰性無干擾，該方法專屬性強.結果見圖1～3.

圖1 5－羥甲基糠醛對照品a.5－羥甲基糠醛

圖2 參麥注射液樣品a.5－羥甲基糠醛

圖3 5－羥甲基糠醛陰性樣品

3.2 線性關系及最低檢出限 精密稱取5－HMF對照品0.514 8g置100mL量瓶中，加甲醇至刻度，作為貯備液，精密量取1.0mL置100mL量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液.精密吸取上述對照品溶液1、2、4、8、10、20、30、50、100μL，注入液相色譜儀，以峰面積積分值為縱坐標，5－HMF質量數(shù)（μg）為橫坐標進行線性回歸，回歸方程為：Y＝5 871.92X－2 874.96，r＝0.999 8.

結果表明：5－HMF在5.148～514.800ng范圍內呈良好的線性關系.信噪比（S／N）為3時，5－HMF的最低檢出限為0.193 0ng；信噪比為10時，5－HMF的最小定量限為0.386 1ng.

3.3 精密度試驗 取5－HMF對照品10μL，依法連續(xù)測定6次，5－HMF的RSD為0.98%，表明其精密度良好.

3.4 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h測定，5－HMF峰面積的RSD為0.35%，表明該供試品溶液在12h內穩(wěn)定.

3.5 重復性試驗 取同一參麥注射液樣品溶液5份，按照確定的色譜條件測定峰面積，外標一點法計算5－HMF含量，求得RSD為0.95%.結果表明本方法重復性好，所得試驗結果準確可靠.

3.6 回收率試驗 精密量取含量為10.367 1μg·mL－1的同一本品5.0mL 6份分別置10mL量瓶中，各加入5－HMF含量為12.972μg·mL－1的對照品溶液4.0mL，加水至刻度，搖勻，按擬定的方法測定峰面積，外標一點法計算5－HMF含量.平均回收率為101.31%，RSD為1.3%.

4 樣品測定

分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，用外標一點法計算，即得.各企業(yè)生產參麥注射液含量測定結果見表1.

表1 參麥注射液中5－HMF的含量

5－HMF的平均含量不同生產企業(yè)間高低二者間相差7倍；同企業(yè)不同批次間最大相差13.4倍.說明：由于缺少對5－HMF含量的控制，工藝的不穩(wěn)定，造成各個企業(yè)之間存在較大的差異，并且同企業(yè)產品間的差異也很大.

5 討論

各國藥典中一般要求含葡萄糖等糖類的注射液中5－HMF含量＜2.5μg·mL－1，經擬定的非標方法檢測，參麥注射液中5－HMF含量遠高于化藥所定標準，超出率超過80%.5－HMF是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產生的一個醛類化合物，該化合物穩(wěn)定性不好，容易分解成乙酰丙酸和甲酸，或發(fā)生聚合反應.影響5－HMF產生量的因素有溶液的pH值、滅菌的溫度及時間等.葡萄糖在酸性溶液中相對穩(wěn)定，堿性增加易脫水分解；含葡萄糖的注射液在高溫加熱滅菌時易產生5－HMF，其量的增加與滅菌穩(wěn)定、時間呈正比.參麥注射液在提取時由于工藝的不同、含醇量的波動，將導致提取液中糖類成分的差異.另一方面，在中藥提取后的放置過程中，皂苷類成分受熱后苷鍵斷裂，導致糖類成分的增加都將使注射液中含有的單糖含量顯著增大，提供了5－HMF產生的“溫床”.另外還有一個重要原因，某些生產企業(yè)利用添加葡萄糖來調節(jié)注射液的滲透壓導致參麥注射液中葡萄糖含量的大大提高，也為5－HMF的產生提供了可能.