左旋泮托拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法研究

陶亞成，朱思思，韓繼永

(江蘇奧賽康藥業(yè)股份有限公司，江蘇南京211112)

泮托拉唑鈉為H+－K+－ATP酶泵抑制劑，直接作用于胃壁內(nèi)質(zhì)子泵，用于治療胃及十二指腸潰瘍和反流性食管炎等。左旋泮托拉唑鈉為泮托拉唑鈉的左旋體，具有比泮托拉唑鈉消旋體更強(qiáng)的藥理作用。本文主要根據(jù)不同藥典標(biāo)準(zhǔn)中泮托拉唑鈉的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法對(duì)左旋泮托拉唑鈉進(jìn)行研究，并對(duì)方法和結(jié)果進(jìn)行比較和分析。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC－20AT高效液相色譜儀、LC－Solution色譜工作站(日本島津制作所);BP211D電子天平(塞多利斯公司);雷磁PHS－3C精密pH計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 試藥 乙腈，HPLC 級(jí)，Tedia Company，Inc.;磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀，分析純，南京化學(xué)試劑有限公司;磷酸，分析純，北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司;超純水，自制。左 旋 泮 托 拉 唑 鈉 (批 號(hào):S20081001、S20081101、S20081102，江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 泮托拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)檢查法及限度比較，結(jié)果見表1(見下頁)。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液制備 取左旋泮托拉唑鈉、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C適量，照各標(biāo)準(zhǔn)下方法用適宜溶劑稀釋制成適宜濃度，量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見表2。

表2 各版藥典有關(guān)物質(zhì)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)比較

結(jié)果表明，采用上述條件左旋泮托拉唑鈉與雜質(zhì)B、C分離度均符合要求，CP2005版的雜質(zhì)B出峰較遲，但基線穩(wěn)定;BP2009版和USP32版的條件相同，由于梯度變化較快，基線不穩(wěn)定，且主峰拖尾，可見有雜質(zhì)峰分離度不理想。CP2010版的梯度程序變化較BP2009版和USP32版緩和，主峰理論板數(shù)較高，各雜質(zhì)間的分離度良好，基線在45 min內(nèi)較為穩(wěn)定。

表1 泮托拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)檢查法及限度比較

2.3 樣品測(cè)定 取本品適量，照各標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果見表3。

表3 左旋泮托拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果對(duì)比(單位:%)

采用以上四版藥典收載的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果基本一致。綜合考慮各條件的優(yōu)劣，我們分別采用CP2005版條件和CP2010版條件，并適當(dāng)調(diào)整后，進(jìn)行方法學(xué)對(duì)比研究。

2.4 已知雜質(zhì)定位及分離度考察 取左旋泮托拉唑鈉適量，用溶劑制成每1 mL約含0.4 mg的溶液;另取雜質(zhì)A、B、C、D+F、E適量分別用溶劑溶解并稀釋成每1 mL約含40 μg的溶液，濾過。

量取上述溶液各1 mL置10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，作為混合溶液，精密量取上述溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。

結(jié)果表明，在上述兩種有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法中，左旋泮托拉唑鈉峰與各雜質(zhì)峰及各雜質(zhì)峰之間均分離良好。

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)溶液制備 精密稱取左旋泮托拉唑鈉適量，分別按《中國藥典》2005年版和2010年版泮托拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下方法試驗(yàn)，分別于0、2、4、6、8 h取樣測(cè)定，考察左旋泮托拉唑鈉在溶液中的穩(wěn)定性。在《中國藥典》2005年版條件下，樣品溶液0 h雜質(zhì)1個(gè)(相對(duì)保留時(shí)間為0.59)，8 h 雜質(zhì)5 個(gè)(相對(duì)保留時(shí)間分別為 0.21、0.22、0.30、0.59、0.77)，且各雜質(zhì)的峰面積逐漸增大。而《中國藥典》2010年版條件下，樣品溶液0～8 h內(nèi)，雜質(zhì)僅1個(gè)，且峰面積無明顯變化(雜質(zhì)平均含量0.014%，RSD為9.18%)。

結(jié)果表明，在《中國藥典》2005年版條件下，左旋泮托拉唑鈉在流動(dòng)相中穩(wěn)定性較差，配制6 h，雜質(zhì)個(gè)數(shù)和雜質(zhì)量明顯增加，溶液配制后應(yīng)在4 h內(nèi)使用。在《中國藥典》2010年版條件下，樣品在溶液中8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 破壞性試驗(yàn) 分別取左旋泮托拉唑鈉適量(約10 mg，CP2005版置50 mL量瓶中;CP2010版置25mL量瓶中)，進(jìn)行如下試驗(yàn):①酸破壞:加 0.1 mol·L－1鹽酸溶液 5 mL，搖勻，置室溫下放置 5 min，用 0.1 mol·L－1氫氧化鈉溶液中和;②堿破壞:加1 mol·L－1氫氧化鈉溶液5 mL，搖勻，置室溫下放置2.5 h;用1 mol·L－1鹽酸溶液中和;③氧化破壞:加0.9%過氧化氫5 mL，搖勻，置室溫放置5 h;④高溫破壞:加流動(dòng)相或溶劑使溶解，置80℃水浴上，加熱1 h后，放冷;⑤日光破壞:加流動(dòng)相或溶劑使溶解，置日光條件下放置4 h，見圖 2。

結(jié)果表明，在《中國藥典》2005年版和2010年版兩種有關(guān)物質(zhì)測(cè)定條件下，左旋泮托拉唑鈉在酸、高溫、氧化條件下均有不同程度的破壞，在日光條件下不穩(wěn)定，在堿性條件下基本穩(wěn)定。各條件下產(chǎn)生的降解產(chǎn)物峰與主峰分離良好，各雜質(zhì)峰的保留時(shí)間均在主峰保留時(shí)間的4倍以內(nèi)。

對(duì)各破壞性試驗(yàn)下的色譜峰進(jìn)行峰純度分析，結(jié)果表明，在本條件下，主峰的色譜峰純度值均大于999.0，提示主峰為單一色譜峰。

圖1 已知雜質(zhì)定位及分離度考察

圖2 破壞性試驗(yàn)

2.7 定量限及檢測(cè)限 《中國藥典》2005年版:取左旋泮托拉唑鈉適量，用流動(dòng)相溶解并逐步稀釋測(cè)定，進(jìn)樣體積20 μL，S/N 約為10時(shí)，即定量限為1.28 ng，S/N 約為3時(shí)，即檢測(cè)限為0.38 ng。2010年版:取左旋泮托拉唑鈉適量，用溶劑溶解并逐步稀釋測(cè)定，進(jìn)樣體積20 μL，S/N約為10時(shí)，即定量限為4.22 ng，S/N 約為3 時(shí)，即檢測(cè)限為 1.26 ng。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 同一批樣品測(cè)定6份，計(jì)算雜質(zhì)A含量0.013%，RSD=5.72%;其他雜質(zhì)未檢出。

2.9 校正因子試驗(yàn) 按《中國藥典》2010年版取左旋泮托拉唑鈉和雜質(zhì)A、雜質(zhì)B(起始原料)、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D+F、雜質(zhì)E適量，精密稱定，置同一量瓶中，加溶劑溶解并制成每1 mL中各約含0.4 mg的溶液，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。連續(xù)測(cè)定5次，結(jié)果以左旋泮托拉唑鈉為參照，雜質(zhì)A的校正因子為1.03(RSD 為0.27%，相對(duì)保留時(shí)間約0.94)，雜質(zhì) B 的校正因子為0.96(RSD為0.51%，相對(duì)保留時(shí)間約1.32)，雜質(zhì)C的校正因子為0.30(RSD為0.34%，相對(duì)保留時(shí)間約0.72)，雜質(zhì)D+F的校正因子為1.10(RSD為0.57%，相對(duì)保留時(shí)間約1.10)，雜質(zhì)E的校正因子為1.09(RSD為0.32%，相對(duì)保留時(shí)間約1.14)。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 取雜質(zhì)A、雜質(zhì)B(起始原料)、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D+F、雜質(zhì)E適量，精密稱定，置同一量瓶中，用溶劑溶解并稀釋制成每1 mL約含各雜質(zhì)0.4 mg的溶液，搖勻，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備液;另取左旋泮托拉唑鈉約10 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，平行9份，分成3組，分別精密加入對(duì)照品貯備液 2.0、2.5、3.0 mL，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。再精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。按加校正因子的自身對(duì)照法計(jì)算各雜質(zhì)含量，結(jié)果表明，雜質(zhì)A、雜質(zhì)B(起始原料)、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D+F、雜質(zhì)E的回收率結(jié)果均在90% ～110%之間，均符合規(guī)定。

2.11 耐用性試驗(yàn) 左旋泮托拉唑鈉在柱溫、流速、色譜柱型號(hào)、流動(dòng)相pH等色譜條件產(chǎn)生微小變化時(shí)對(duì)有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定基本無影響，理論板數(shù)以左旋泮托拉唑鈉計(jì)均在2 500以上，各雜質(zhì)與左旋泮托拉唑鈉的分離度及各雜質(zhì)之間的分離度均符合要求，表明本方法的耐用性良好。

3 討論

綜上所述，《中國藥典》2010年版、《英國藥典》2009年版及《美國藥典》32版泮托拉唑鈉的有關(guān)物質(zhì)方法中流動(dòng)相組成、溶劑、檢測(cè)波長及柱溫條件一致，在梯度程序方面略有不同，《中國藥典》2010年版的梯度程序相比較為平緩，試驗(yàn)結(jié)果顯示《中國藥典》2010年版中左旋泮托拉唑鈉峰的理論板數(shù)最高。而通過比較《中國藥典》2005年版和2010年版兩種方法，結(jié)果顯示2005年版條件與2010年版條件相比，左旋泮托拉唑鈉溶液的穩(wěn)定性較低，已知雜質(zhì)岀峰時(shí)間較長，且峰形也較差。而有關(guān)物質(zhì)限度要求，《英國藥典》2009版最高，美國藥典32版次之，《中國藥典》2005年版的限度要求最低。采用《中國藥典》2010年版的有關(guān)物質(zhì)條件進(jìn)行的方法學(xué)試驗(yàn)說明本方法適用于左旋泮托拉唑鈉的有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)。

為保證臨床用藥安全，故在左旋泮托拉唑鈉的質(zhì)量控制過程中，有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法采用《中國藥典》2010年版條件下泮托拉唑鈉的有關(guān)物質(zhì)方法進(jìn)行檢測(cè)，而雜質(zhì)限度參照《英國藥典》2009版進(jìn)行嚴(yán)格控制。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2005年版(二部)［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:367－368.

［2］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版(二部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:504－505.

［3］British Pharmacopoeia Commission.British Pharmacopoeia［S］.London:The Statimary Office，2009:4536 －4540.

［4］United States Pharmacopoeia Committee.United States Pharmacopoeia［S］.32th edition.Washington DC:The U-nited States Pharmacopeial Convention Inc，2009:3200.