超高壓液相測(cè)定技術(shù)在人參皂苷含量測(cè)定中的應(yīng)用

石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司 李 凈 祁星星 呂 潔 霍際偉

超高壓液相測(cè)定技術(shù)在人參皂苷含量測(cè)定中的應(yīng)用

石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司 李 凈 祁星星 呂 潔 霍際偉

人參為五加科植物，具有很高的藥用價(jià)值，但由于藥典收錄的人參皂苷的測(cè)定方法運(yùn)行時(shí)間較長(zhǎng)。本文，筆者采用超高壓液相的測(cè)定方法對(duì)人參中皂苷的含量進(jìn)行分析，以縮短測(cè)定時(shí)間，提高測(cè)定效率。

一、儀器與試藥

1.儀器。實(shí)驗(yàn)使用的儀器主要有U3000測(cè)定儀，該測(cè)定儀包括LPG–3400RS型四元泵、WPS–3000型進(jìn)樣器、TCC–3x00（RS）型柱溫箱和 VWD–3x00（RS）型檢測(cè)器；采用的色譜柱有 DIONEX C18 5 μm 4.6 mm ×100 mm 、Agilent XDB–C18 5 μm 4.6 mm×150mm。

2.試藥對(duì)照品。包括人參皂苷Rgl（中檢所：110703–201027）、人參皂苷Re （中檢所：110754–200822）、 人參皂苷Rbl（中檢所：110704-201122）等，所用試劑均為色譜純。

二、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

1.色譜條件。

（1）超高壓液相條件。以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，流速為0.6 m L/m in，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm。具體參數(shù)見表1。

表1 流速為0.6 m L/m in時(shí)的梯度洗脫要求

（2）《中國(guó)藥典》2010年版（一部）條件。以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，流速為1.0 m L/min，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm。具體參數(shù)見表2。

表2 流速為1.0 m L/m in時(shí)的梯度洗脫要求

2.溶液的制備。

（1）對(duì)照品溶液的制備。 精密稱取人參皂苷Rgl對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品及人參皂苷Rbl對(duì)照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.2 mg/m L的混合溶液，搖勻，即可得到對(duì)照品溶液。

（2）供試品溶液的制備。取本品粉末（過四號(hào)篩）約1 g，精密稱定，置于索氏提取器中；加三氯甲烷加熱回流3 h，棄去三氯甲烷液并在藥渣揮干溶劑后，連同濾紙筒移入100 m L錐形瓶中，精密加水飽和正丁醇50 mL，密塞，放置過夜，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 m in，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25 m L，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 m L量瓶中；加甲醇稀釋至規(guī)定刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即可得到供試品溶液。

3.線性回歸分析。精密吸取上述人參皂苷對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 μL，按規(guī)定色譜條件測(cè)定峰面積。分別以人參皂苷Rgl、Re 、Rb1對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸，可得不同人參皂苷的回歸方程：

不同儀器所測(cè)得的人參皂苷的含量 見表3。

表3 不同儀器所測(cè)得的人參皂苷含量

4.精密度試驗(yàn)。精密吸取上述人參皂苷對(duì)照品溶液，按上述超高壓液相色譜條件，2 μL進(jìn)樣，重復(fù)進(jìn)樣6次，其RSD分別為人參皂苷Rgl為0.5%、人參皂苷Re為 0.6%、人參皂苷Rbl為0.5%，表明進(jìn)樣精密度較好。

5.重復(fù)性試驗(yàn)。在上述色譜條件下， 取同一批樣品5 份，按“2.2.2供試品溶液的制備” 項(xiàng)下的方法測(cè)定， 測(cè)定結(jié)果表明：人參皂苷Rg1的平均含量為0.332 2%，RSD＝0.4%；人參皂苷Re的平均含量為0.1515%，RSD＝0.3%；人參皂苷Rb1的平均含量為0.4240%，RSD＝0.3%。

6.穩(wěn)定性試驗(yàn)。按含量測(cè)定項(xiàng)下的超高壓色譜條件，在室溫條件下，對(duì)同一樣品溶液每隔0，4，8，12，24 h進(jìn)樣一針，并記錄色譜圖，按峰面積計(jì)算RSD，樣品在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。不同時(shí)段、不同人參皂苷含量的測(cè)量結(jié)果見表4。

表4 不同時(shí)段、不同人參皂苷含量的測(cè)量結(jié)果

三、結(jié)論

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利用超高壓液相測(cè)定人參皂苷含量的檢測(cè)方法準(zhǔn)確、可靠，且大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了工作效率，同時(shí)也節(jié)約了試劑，減少了對(duì)環(huán)境的污染，使人參皂苷測(cè)定方法的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益得到了顯著提高。