復(fù)合中草藥對羅非魚生長性能、免疫指標和體組成的影響

廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所 廣州飛禧特水產(chǎn)科技有限公司 黃文慶 黃燕華 李國立 王國霞 林佳南

研究表明，在飼料中添加中草藥可提高凡納濱對蝦增重率、特定生長率和免疫力，促進其生長（董曉慧等，2009；李明和董曉慧，2008）。湯菊芬等（2009）認為，復(fù)合中草藥對羅非魚有降低死亡率，促進生長和提高免疫力的作用。本試驗探討了飼料中添加復(fù)合中草藥制劑對羅非魚生長性能、免疫指標及其體組成的影響，旨在為中草藥制劑在羅非魚配合飼料中的應(yīng)用研究提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗日糧 本試驗所用復(fù)合中草藥制劑主要成分由黃芪、金銀花、苦參、紫花地丁、蒲公英等20多種天然植物經(jīng)低溫提取制成。

以豆粕和魚粉為主要蛋白源，以豆油和磷脂油為主要脂肪源的基礎(chǔ)飼料配方見表1。以基礎(chǔ)日糧為對照組，基礎(chǔ)日糧中分別添加0.1%、0.2%、0.4%中草藥制劑為試驗組，經(jīng)V型混合機混勻后，用擠壓機制成粒徑為1.5 mm的顆粒料，50℃烘干，冷卻后用密封袋包裝，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 飼養(yǎng)管理 羅非魚苗種由廣州市番禺羅非魚苗種廠提供。選用240尾個體均一、活力健康的羅非魚苗隨機分為4個處理組，每個處理組3個重復(fù)，每個重復(fù)挑取20尾，在室內(nèi)流水循環(huán)系統(tǒng)水族箱中飼養(yǎng)，為期8周。試驗期間，水深約0.6 m，循環(huán)系統(tǒng)持續(xù)循環(huán)，每天投喂2次（8∶00和15∶00），日投喂量為羅非魚體重的4%～6%，據(jù)實際攝食情況調(diào)整投餌量，養(yǎng)殖后期2 d換水1次。飼養(yǎng)期間定期對水環(huán)境的理化因素進行檢測 （水溫、pH、氨氮、溶氧、亞硝酸鹽）。水溫為 25.7～31.5℃、pH保持在7.5左右、溶氧＞5 mg/L、氨氮≤0.02 mg/L，亞硝酸鹽≤0.2 mg/L。全天充氣，光照時間為自然光照時間。

表1 羅非魚飼料基礎(chǔ)組成及營養(yǎng)水平

1.3 樣品采集 試驗進行到第4周末時停喂24 h，空腹稱取每個缸的魚總重和記錄尾數(shù)，統(tǒng)計試驗中期的生長性能和成活率。試驗第8周末飼養(yǎng)結(jié)束停喂24 h，稱取每個缸的魚總重和記錄尾數(shù)。每個重復(fù)隨機挑取5條魚保存于-20℃冰箱待做全魚分析。挑選體重與均重偏差不大的魚進行尾靜脈采血，待凝血后離心分離（8000 r/min，4℃，離心10 min）血清，血清樣分裝保存于-20℃冰箱待測。同時解剖取出肝胰臟，按其重量分別加入9倍體積（m/V）預(yù)冷去離子水（4 ℃，pH7.0），用玻璃勻漿器在冰浴中勻漿，取混勻勻漿液離心 （5000 r/min，4℃，10 min），然后取上清液置于-20℃?zhèn)溆茫糜诿富顧z測。生長性能指標及計算公式如下：

增重率=（末均重-初均重）/初均重×100；

特定生長率=（ln末均重-ln初均重）/飼養(yǎng)天數(shù)×100；

成活率=存活尾數(shù)/試驗尾數(shù)×100；

餌料系數(shù)=攝食量/（終末總體重＋死亡總體重－初始總體重）。

1.4 樣品分析 酶液、血清蛋白濃度的測定；蛋白量測定用考馬斯亮藍G－250法測定。谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和總抗氧化能力（TAOC）均用南京建成生物的試劑盒檢測；血清酚氧化酶（PO）活力的測定參考 Ashida（1971）的方法；溶菌酶采用溶壁微球菌懸浮液比濁法。全魚體組成分析 ：水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、灰分、鈣和磷成分檢測分別采用烘干失重法、凱氏定氮法、索氏抽提法、高溫灼燒法、EDTA滴定法、鉬黃分光光度法測定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用平均值±標準差表示，采用SPSS11.5軟件進行數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計，先對數(shù)據(jù)作單因素方差分析（ANOVA），若處理間差異顯著，再用Duncan’s進行多重比較，顯著性水平為0.05。

2 試驗結(jié)果

2.1 中草藥對羅非魚生長性能的影響 從表2可知，添加中草藥對羅非魚前期和后期生長性能未產(chǎn)生顯著影響（P>0.05）。前期：0.1%組較對照組增重率提高1.83%，餌料系數(shù)降低3.35%，0.4%組較對照組增重率提高5.21%，特定生長率提高2.35%，餌料系數(shù)降低4.47%；后期：0.1%組較對照組增重率提高6.11%，特定生長率提高4.52%，餌料系數(shù)降低6.33%；0.4%組增重率提高4.07%，特定生長率提高2.71%，餌料系數(shù)降低3.62%。

從飼養(yǎng)全期看：試驗組末均質(zhì)量、成活率、增重率、特定生長率較對照組均無顯著差異 （P>0.05），餌料系數(shù)0.1%和0.4%組顯著低于對照組（P<0.05）。其中0.1%組增重率提高3.61%，特定生長率提高3.65%，餌料系數(shù)降低4.5%；0.4%組增重率提高4.09%，特定生長率提高3.65%，餌料系數(shù)降低4.5%。

表2 中草藥對羅非魚生長性能的影響

2.2 中草藥對羅非魚免疫指標的影響 從表3可知，中草藥對羅非魚血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、蛋白質(zhì)、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、溶菌酶（LSZ）、總抗氧化能力（T-AOC）、酚氧化酶（PO）均無顯著影響（P>0.05）。谷丙轉(zhuǎn)氨酶隨中草藥添加量增加呈先下降后升高，0.1%組最低；谷草轉(zhuǎn)氨酶隨中草藥濃度呈先升高后下降趨勢，0.4%組最低；溶菌酶試驗組較對照組有所提高；酚氧化酶隨中草藥添加量增加先下降后上升；試驗組T-AOC均低于對照組。

表3 中草藥對羅非魚血清免疫指標的影響

從表4可知，中草藥對羅非魚肝臟蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、溶菌酶、總抗氧化能力均無顯著影響。肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶活隨中草藥添加量增逐漸降低，0.4%組顯著低于其他處理組；蛋白隨中草藥添加量增加先下降后上升；谷草轉(zhuǎn)氨酶活先提高后降低，0.1%組最高，0.2%和 0.4%組顯著低于0.1%組；T-AOC隨中草藥添加量增加先上升后下降，0.1%組高于其他處理組。

表4 中草藥對羅非魚肝臟免疫指標的影響

2.3 中草藥對羅非魚體組成的影響 從表5可知，試驗組的羅非魚體組成中水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、灰分、鈣、磷較對照組均無顯著差異（P>0.05）。0.1%組粗蛋白質(zhì)顯著高于0.4%組 （P<0.05）；0.2%組粗脂肪顯著低于 0.4%組 （P<0.05）；0.1%組灰分顯著低于 0.2%組和0.4%組（P<0.05）。試驗組水分含量較對照組低了0.07%～0.79%，0.1%組粗蛋白質(zhì)含量較對照組高0.6%，粗蛋白質(zhì)隨中草藥添加量增加先上升后降低。表明，中草藥添加過量會降低魚體粗蛋白質(zhì)含量。

3 討論

3.1 復(fù)合中草藥對羅非魚生長性能的影響 中草藥含有多種生物活性物質(zhì)和天然營養(yǎng)物質(zhì)，能促進動物的機體代謝和蛋白質(zhì)以及酶的合成，進而促進動物的生長，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，降低餌料系數(shù)（韓兆紅等，2010；于明超等，2010；謝麗玲等，2009）。湯菊芬等（2009）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加1.5%的復(fù)方中草藥制劑使吉富羅非魚的增重率提高 10.82%，飼料系數(shù)降低4.71%，蛋白質(zhì)效率提高 15.68%。李卓佳等（2007）研究表明，飼料中添加適量的中草藥能夠顯著提高斑節(jié)對蝦成活率和降低飼料系數(shù) （P<0.05）。段銘和馮現(xiàn)偉（1999）研究表明，高劑量復(fù)方中草藥可以使鯽魚增長率提高21.77%。本試驗所用復(fù)合中草藥制劑主要成分由黃芪、金銀花、苦參、紫花地丁、蒲公英等20多種天然植物經(jīng)低溫提取而成，富含酚類、黃銅甙、靛甙等多種生物活性物質(zhì)。飼料中添加0.1%～0.4%復(fù)合中草藥制劑，試驗結(jié)果表明，與對照組相比，0.1%和0.4%添加組增重率分別提高3.61%和4.09%；特定生長率均提高3.36%，飼料系數(shù)均降低 4.5%（P<0.05）；試驗結(jié)果與前人報道相似。

表5 中草藥對羅非魚全魚體組成的影響成

3.2 復(fù)合中草藥對羅非魚免疫指標的影響 研究證實，中草藥的免疫活性有效成分主要有多糖類、甙類、生物堿、有機酸、萜類及醇類等。劉華忠等（2004）研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)方中草藥對彭澤鯽血清中溶菌酶和羅氏沼蝦血清的溶菌酶及酚氧化酶活力均有顯著提高作用。本試驗結(jié)果表明，復(fù)合中草藥制劑對羅非魚溶菌酶無顯著影響，與前人研究結(jié)果有所不同，這可能與復(fù)方中草藥配方和養(yǎng)殖環(huán)境不同有關(guān)，確切原因有待進一步研究。谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶是廣泛存在于動物線粒體中的重要的轉(zhuǎn)氨酶，在機體蛋白質(zhì)代謝中起重要作用，正常情況下，血清中的轉(zhuǎn)氨酶活性較小，當肝組織發(fā)生病變時可引起肝細胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶大量釋放到血漿中，引起血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶濃度升高，因此，其活性變化也是反映肝細胞受損傷的主要敏感指標，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性的增減可以反映機體中毒或病理變化 （陸鑫等，2009）。 孟兆娜等（2010）和陳玉春等（2007）研究發(fā)現(xiàn)，中草藥對魚血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性有一定的降低誘導(dǎo)作用。陸鑫等（2009）在研究中發(fā)現(xiàn)，隨著飼料中復(fù)方中草藥含量的增加，轉(zhuǎn)氨酶呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢，添加量為0.2%和0.4%復(fù)方中草藥對尖吻鱸谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性有一定的降低誘導(dǎo)作用。本研究中草藥對血清、肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的影響與前人研究結(jié)果相似，表明中草藥對羅非魚血清、肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性有一定的降低誘導(dǎo)作用。

3.3 復(fù)合中草藥對羅非魚全魚體組成的影響李卓佳等（2007）研究表明，投喂添加中草藥的飼料對斑節(jié)對蝦肌肉的水分和蛋白質(zhì)含量無顯著影響，但脂肪含量明顯下降，氨基酸組成發(fā)生改變。中草藥對異育銀鯽肌肉中水分、蛋白質(zhì)、各種脂肪酸和游離氨基酸的含量均無顯著影響，但顯著提高了肌肉的脂肪含量（邱小琮等，2003）。周歧存等（2006）研究也表明中草藥對凡納濱對蝦的全蝦營養(yǎng)組成無顯著影響。本試驗結(jié)果表明：日糧中添加復(fù)合中草藥試驗組羅非魚體組成水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、灰分、鈣、磷較對照組均無顯著差異（P>0.05）；但0.1%添加組體組成水分降低（0.4%），粗蛋白質(zhì)提高（0.6%），粗脂肪降低（1.85%），效果優(yōu)于其他試驗組。而過量添加，反而會降低全魚體組成粗蛋白質(zhì)和增加粗脂肪含量。

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