化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清抗結(jié)核抗體的比較研究

陽(yáng)幼榮 吳雪瓊 張俊仙 梁 艷 王 蘭

解放軍第309醫(yī)院全軍結(jié)核病研究所 軍隊(duì)結(jié)核病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100091

據(jù)全國(guó)第五次結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查結(jié)果顯示，目前我國(guó)結(jié)核病疫情仍非常嚴(yán)重，每年新發(fā)病例約為130萬(wàn)，占全球發(fā)病總數(shù)的14.3%[1]。結(jié)核分枝桿菌在感染并增殖的過(guò)程中會(huì)激活人體的免疫系統(tǒng)，使機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，因此，檢測(cè)血清中特異性抗體水平可反應(yīng)受檢者感染情況[2]。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是應(yīng)用最為廣泛的一種血清學(xué)檢測(cè)手段[3-5]，但由于普通ELISA法普遍采用TMB進(jìn)行顯色，其檢測(cè)靈敏度一般在“ng”水平，對(duì)于特異性抗體水平低的血清標(biāo)本檢測(cè)效果不佳。理論上說(shuō)，采用更為靈敏的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法會(huì)提高檢測(cè)的靈敏度。為比較化學(xué)發(fā)光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）與ELISA法對(duì)結(jié)核病輔助診斷效果，本文以360例不同來(lái)源的血清作為檢測(cè)對(duì)象對(duì)兩種不同的試劑盒進(jìn)行對(duì)比評(píng)價(jià)，比較二者在結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中的檢測(cè)效果情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

健康人血清標(biāo)本來(lái)自于本院2011年8～9月經(jīng)體檢無(wú)疾病的健康人群，共100例；活動(dòng)性肺結(jié)核患者血清標(biāo)本來(lái)源為本院結(jié)核科2011年5～9月經(jīng)過(guò)臨床確診并住院患者的首次采血血清標(biāo)本，共260例。

1.2 檢測(cè)儀器

恒溫孵育箱、DM-3全自動(dòng)洗板機(jī)、KPS-KM型微孔板發(fā)光分析儀。

1.3 檢測(cè)試劑及方法

化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)試劑盒和酶聯(lián)免疫法檢測(cè)試劑盒分別由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司和北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司提供。檢測(cè)操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩種試劑盒對(duì)血清標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，活動(dòng)性肺結(jié)核組中，化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒的陽(yáng)性符合率為 71.2%（185/260），ELISA檢測(cè)試劑盒的陽(yáng)性符合率為58.5%（152/260），兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.18，P ＜ 0.05）；健康人群組檢測(cè)中，兩者的陰性符合率分別為89.0%（89/100）和 93.0%（93/100），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.98， P ＞ 0.05）。

3 討論

結(jié)核分枝桿菌感染人體后，機(jī)體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生針對(duì)結(jié)核分枝桿菌的抗體，利用血清學(xué)方法檢測(cè)體內(nèi)抗結(jié)核抗體是發(fā)現(xiàn)結(jié)核病的有效手段。膠金體法雖具有操作簡(jiǎn)便、快速、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，但其靈敏度較低，只適用于定性檢測(cè)。經(jīng)典酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）應(yīng)用范圍較為廣泛，還可用于半定量檢測(cè)，但對(duì)于低抗體水平標(biāo)本表現(xiàn)欠佳。化學(xué)發(fā)光法對(duì)于標(biāo)本的檢測(cè)限達(dá)到了0.06 ng/mL[6]靈敏度，遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)ELISA法1 ng/mL的靈敏度，該方法在其他疾病檢測(cè)領(lǐng)域己見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，且具有較高的靈敏度[7-8]，但國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)其用于結(jié)核抗體檢測(cè)方面的報(bào)道。由于發(fā)學(xué)發(fā)光法檢測(cè)靈敏度高，本試驗(yàn)中應(yīng)用CLIA法檢測(cè)試劑盒檢測(cè)活動(dòng)性肺結(jié)核患者血清中抗結(jié)核抗體的陽(yáng)性標(biāo)本檢出率顯著高于普通ELISA法，對(duì)于普通ELISA法檢測(cè)中的“灰區(qū)”部分可進(jìn)行有效區(qū)分，達(dá)到提高靈敏度的目的，且CLIA法在明顯提升陽(yáng)性標(biāo)本檢出率的同時(shí)，假陽(yáng)性率升高不明顯。在本實(shí)驗(yàn)中CLIA法檢測(cè)試劑盒較普通ELISA法檢測(cè)試劑盒在陽(yáng)性檢出率提高了12.69%的同時(shí)，假陽(yáng)性發(fā)生率只提高了4.0%，提示其適合用于結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

表1 兩種試劑盒檢測(cè)血清標(biāo)本中抗結(jié)核抗體情況

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