• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    菊糖抗氧化活性及其機(jī)理

    2015-11-11 02:38:04劉德萍吳平
    關(guān)鍵詞:菊糖存活率自由基

    劉德萍,吳平

    (江南大學(xué)直屬附屬醫(yī)院(無(wú)錫市第四人民醫(yī)院),江蘇無(wú)錫214062)

    菊糖抗氧化活性及其機(jī)理

    劉德萍,吳平*

    (江南大學(xué)直屬附屬醫(yī)院(無(wú)錫市第四人民醫(yī)院),江蘇無(wú)錫214062)

    通過(guò)測(cè)定菊糖的還原能力、Fe2+螯合能力,以及DPPH自由基清除能力等方法,評(píng)價(jià)菊糖的抗氧化能力,并采用Caco-2細(xì)胞模型探討其抗氧化機(jī)理。3種抗氧化活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,菊糖具有良好的抗氧化活性。與陽(yáng)性對(duì)照組比較,菊糖對(duì)H2O2誘導(dǎo)的Caco-2細(xì)胞氧化損傷具有顯著的保護(hù)作用。當(dāng)菊糖質(zhì)量濃度為0.8 mg/mL時(shí),Caco-2細(xì)胞中過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽還原酶,以及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活力,分別提高了35.8%,47.6%和61.2%。菊糖主要通過(guò)提高細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的活力發(fā)揮其抗氧化作用。

    菊糖;抗氧化活性;Caco-2細(xì)胞模型;機(jī)制

    菊糖,又名菊粉、菊苣多糖,是D-果糖經(jīng)β(2→1)鍵連接的鏈狀果聚糖,末端常含有一個(gè)葡萄糖基,一般從菊苣或菊芋中提取獲得[1]。菊糖作為一種水溶性很好的膳食纖維,具有很多促進(jìn)人體健康的生理功能。例如,具有低熱量、非胰島素依賴性、非齲齒性等特點(diǎn),適于糖尿病患者食用;菊糖還可降低血液中膽固醇和甘油三酯的含量,可用來(lái)減肥、預(yù)防心血管疾病和高膽固醇血癥;也可作為雙歧桿菌增殖因子,調(diào)節(jié)腸道功能,預(yù)防結(jié)腸癌等。此外,菊糖持水性高,可預(yù)防便秘,可廣泛應(yīng)用于開(kāi)發(fā)臨床營(yíng)養(yǎng)治療產(chǎn)品、功能性食品和保健品等[2]。

    目前,大量研究結(jié)果顯示,部分植物多糖如黃芪多糖[3]、大蒜多糖[4-5]等具有清除自由基、抑制脂質(zhì)氧化及提高抗氧化酶活性的功能。目前,已有部分文獻(xiàn)報(bào)道菊糖具有抗氧化活性[6-7],但對(duì)其抗氧化機(jī)理探討還鮮見(jiàn)報(bào)道。國(guó)內(nèi)外營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究表明,活性多糖的抗氧化作用主要是清除體內(nèi)自由基、提高抗氧化酶活性及抑制脂質(zhì)過(guò)氧化等,多數(shù)活性多糖的抗氧化機(jī)理可能是調(diào)控Nrf2-Keap1-ARE信號(hào)通路[8]。作者利用3種體外方法和Caco-2細(xì)胞模型對(duì)菊糖抗氧化功能進(jìn)行分析,并探討菊糖抗氧化活性作用機(jī)理,為今后菊糖在醫(yī)藥及保健品開(kāi)發(fā)方面的應(yīng)用提供依據(jù)。

    1 實(shí)驗(yàn)器材

    1.1材料與試劑

    菊糖ORFTITMHP型,江南大學(xué)食品學(xué)院提供;磷酸緩沖液、無(wú)水乙醇、三氯乙酸、氯化高鐵(FeCl3· H2O)、七水合硫酸亞鐵、H2O2(體積分?jǐn)?shù)30%)、NaOH,購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;鐵氰化鉀,上海試劑一廠產(chǎn)品;DPPH(1,1-二苯基苦基苯肼)、Ferrizine試劑,Sigma公司產(chǎn)品;DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、鏈霉素、青霉素、非必需氨基酸,美國(guó)Gibco公司產(chǎn)品;質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.25%胰酶(含EDTA)、Triton X-100過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px)、谷胱甘肽還原酶(GSH-Rx),碧云天生物技術(shù)研究所研制;其他各種分析純?cè)噭?,?guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。

    1.2儀器與設(shè)備

    722型可見(jiàn)分光光度計(jì),上海精密儀器有限公司制造;UV-2100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),尤尼柯儀器有限公司制造;AKTATM蛋白質(zhì)分析純化系統(tǒng),瑞士Amersham Bioscences公司制造;J-26XPI型高效冷凍離心機(jī),美國(guó)BECKMAN公司制造;細(xì)胞培養(yǎng)瓶及培養(yǎng)板,美國(guó)Corning公司制品;CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱、Nano drop 2000型分光光度儀,美國(guó)ThermoForma公司制造;細(xì)胞刮刀,上海耐思生物公司制品;BIOsafe12型生物安全柜,中國(guó)HealForce公司制造;恒溫水浴鍋,上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司制造;MS3digital漩渦震蕩器、搖床,德國(guó)IKA公司制造;U410型超低溫冷凍冰箱,美國(guó)New Brunswick Scientific公司制造;4000 mini型Image Quant LAS,美國(guó)GE公司制造;倒置顯微鏡,日本OLY MPUS公司制造;臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、PCR儀,德國(guó)Eppedorf公司制造。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1還原能力的測(cè)定

    將菊糖樣品配制成質(zhì)量濃度分別為1、5、10、25、50 mg/mL的溶液,各取出2 mL作為樣品待測(cè)溶液,分別加入0.2 mol/L pH 6.6的磷酸鹽緩沖液2 mL,質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的鐵氰化鉀(K3Fe(CN)6)溶液2 mL混勻,50℃水浴中保溫20 min,接著加入體積分?jǐn)?shù)10%的三氯乙酸(TCA)溶液2 mL,振蕩混勻后離心(1 000 r/min)。再各取去沉淀后的上清液2 mL加入2 mL去離子水和0.4 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%的FeCl3溶液,振蕩混勻后在50℃水浴下保溫10 min,溶液慢慢由黃色變?yōu)樯钏{(lán)色,在波長(zhǎng)700 nm下進(jìn)行比色。樣品空白對(duì)照為去離子水。測(cè)定值取3次平行測(cè)定的平均值。

    2.2螯合金屬離子能力的測(cè)定

    Fe2+螯合能力測(cè)定[10]方法:配制質(zhì)量濃度分別為1、5、10、25、50 mg/mL的菊糖溶液,從中分別取出0.5 mL樣品液,以等體積去離子水代替樣品液作空白對(duì)照,吸光值為A,所有測(cè)定值為3次平均值。配制FeCl2溶液濃度為0.25、0.20、0.15 mmol/L,加入至各質(zhì)量濃度樣品測(cè)量吸光值。螯合率按公式(1)計(jì)算:

    式(1)中,Ac為去離子水吸光值,Ay為加入FeCl2溶液的菊糖樣品液吸光值。

    2.3DPPH自由基捕獲能力的測(cè)定

    DPPH自由基捕獲能力的測(cè)定[11]方法:配置0.1 mmol/L DPPH溶液(溶于體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇),樣品組菊糖質(zhì)量濃度分別為1、5、10、25、50 mg/ mL,稱取不同質(zhì)量濃度的樣品溶于2 mL去離子水中,加入2 mL DPPH溶液,避光反應(yīng)25 min;陽(yáng)性對(duì)照組為2 mL DPPH溶液加入2 mL去離子水(代替樣品),空白組為等體積去離子水和體積分?jǐn)?shù)95%乙醇混合液。在波長(zhǎng)517 nm處分別測(cè)定吸光值A(chǔ)i、Aj、A0。清除率按公式(2)計(jì)算:

    式(2)中,Ai為樣品組吸光值,Aj為空白組吸光值,A0為對(duì)照組吸光值。

    2.4Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)

    將Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)于含體積分?jǐn)?shù)20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中,培養(yǎng)溫度37℃,CO2體積分?jǐn)?shù)5%,隔天換一次培養(yǎng)液。本實(shí)驗(yàn)中所采用的細(xì)胞傳代數(shù)均為15~55代。Caco-2細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶底約85%面積時(shí),吸去培養(yǎng)基,加入PBS清洗兩次,加入消化液1 mL,消化2~3 min后,吹打至細(xì)胞呈單個(gè)懸浮狀,以1×106個(gè)/孔的密度接種到培養(yǎng)板中,隔天換液。當(dāng)Caco-2細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)板底約85%面積時(shí)進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定。

    2.5Caco-2細(xì)胞體外氧化損傷模型的建立

    按照2.4中Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)方法,待細(xì)胞長(zhǎng)至培養(yǎng)板底面積85%左右時(shí),吸去培養(yǎng)基,PBS清洗兩次,再加入不含血清的培養(yǎng)基。每孔加入濃度不同的H2O2,使終濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/ L,作用4 h后檢測(cè)細(xì)胞存活率。每組實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)平行,以無(wú)任何處理的Caco-2細(xì)胞的存活率作為100%。

    2.6細(xì)胞存活率檢測(cè)

    采用WST-1法檢測(cè)細(xì)胞存活率,當(dāng)48孔中Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后,每孔加入100 μL培養(yǎng)液,再加入10 μL WST-1試劑,培養(yǎng)30 min后于450 nm處測(cè)定每孔吸光值。以無(wú)任何處理的Caco-2細(xì)胞組為對(duì)照組,按公式(3)計(jì)算細(xì)胞存活率

    式(3)中,A450為實(shí)驗(yàn)組的吸光值,A'450為對(duì)照組的吸光值。

    2.7菊糖對(duì)Caco-2細(xì)胞的抗氧化保護(hù)作用

    待Caco-2細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)板底85%左右面積時(shí),吸去培養(yǎng)基,用PBS清洗兩次,加入不含血清的培養(yǎng)基,接著分為4組進(jìn)行處理比較。

    1)陰性Caco-2細(xì)胞對(duì)照組(NEG):只加入不含胎牛血清的培養(yǎng)基;

    2)陽(yáng)性Caco-2細(xì)胞對(duì)照組(POS):在培養(yǎng)基中加入H2O2,終濃度為1 mmol/L;

    3)正常Caco-2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組:加入含有不同質(zhì)量濃度的菊糖培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2 h后,吸去舊培養(yǎng)基,接著用PBS清洗,最后加入含H2O2的培養(yǎng)基;

    4)加入菊糖的Caco-2細(xì)胞對(duì)照組:加入含有不同質(zhì)量濃度菊糖的培養(yǎng)基,細(xì)胞孵育6 h,按照WST-1法檢測(cè)細(xì)胞存活率,陰性對(duì)照組的細(xì)胞存活率為100%。

    2.8細(xì)胞內(nèi)氧化還原酶系指標(biāo)的測(cè)定

    分別按紫外比色法檢測(cè)過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽還原酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活力。

    2.9數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法

    采用GraphPad Prism○R5 package軟件制圖,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用t-test法比較兩組間差異。

    3 結(jié)果與討論

    3.1還原能力

    如圖1所示,不同質(zhì)量濃度菊糖樣品溶液(1、5、10、25、50 mg/mL)的吸光值在可檢測(cè)范圍內(nèi),而且其還原能力隨著菊糖質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)。

    圖1 不同質(zhì)量濃度菊糖還原能力Fig.1 Reduction ability of inulin with various concentrations

    3.2螯合金屬離子能力

    過(guò)渡金屬離子鐵離子是非常強(qiáng)的自由基發(fā)生劑,能夠催化各種自由基的生成,如羥基自由基和超氧陰離子自由基。金屬離子的存在使得捕捉自由基的抗氧劑消耗掉。如圖2所示,選取濃度分別為0.15、0.20、0.25 mmol/L的底物FeCl2溶液,在底物FeCl2溶液濃度為0.15 mmol/L時(shí),F(xiàn)e2+螯合率大約在4.5%~10%;底物FeCl2溶液濃度為0.20 mmol/L時(shí),F(xiàn)e2+螯合率大約在15.8%~17.8%;底物FeCl2溶液濃度為0.25 mmol/L時(shí),F(xiàn)e2+螯合率約在16.8%~21.7%。隨著菊糖濃度增加,二價(jià)鐵離子的螯合能力逐漸增強(qiáng),且隨著底物濃度的增加,同一質(zhì)量濃度菊糖的二價(jià)鐵離子的螯合能力也逐步增強(qiáng)。

    3.3DPPH自由基的捕獲能力

    DPPH·(1,1-二苯基苦基苯肼自由基)是一種合成的穩(wěn)定的有機(jī)自由基,主要用來(lái)測(cè)定酚類物質(zhì)和食品的抗氧化活性,多糖的抗氧化活性測(cè)定也可以采用此方法。此變化與抗氧化劑抗氧化能力及其數(shù)量呈定量關(guān)系。

    圖2 不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)金屬離子的螯合能力Fig.2 Metal ions chelating activityof inulin with various concentrations

    如圖3所示,伴隨著菊糖質(zhì)量濃度逐漸增加,DPPH自由基清除率逐步增加,提示隨著菊糖質(zhì)量濃度增加,菊糖抗氧化能力逐漸增強(qiáng)。當(dāng)菊糖質(zhì)量濃度達(dá)到60 mg/mL時(shí),DPPH自由基清除率最高可達(dá)31.2%;當(dāng)質(zhì)量濃度為5 mg/mL時(shí),清除率為4.9%。

    圖3 不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)DPPH自由基的捕獲能力Fig.3 DPPH free radical scavenging activity of inulin with various concentrations

    3.4H2O2誘導(dǎo)Caco-2細(xì)胞氧化損傷模型

    Caco-2細(xì)胞模型是近20年來(lái)國(guó)內(nèi)外廣泛采用的研究藥物小腸吸收的體外模型。它具有培養(yǎng)相對(duì)簡(jiǎn)單、結(jié)果重復(fù)性好及應(yīng)用范圍較廣的優(yōu)點(diǎn)。Caco-2細(xì)胞來(lái)源于人體的直腸癌,結(jié)構(gòu)與功能與人小腸上皮細(xì)胞相似,含有與小腸刷狀緣上皮相關(guān)的酶類,且與人體正常小腸上皮轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)及酶類相似。由圖4可知,0.2~1.0 mmol/L濃度范圍的H2O2作用4 h后對(duì)Caco-2細(xì)胞具有顯著的毒性作用,導(dǎo)致Caco-2細(xì)胞存活率降低;也可以發(fā)現(xiàn)Caco-2細(xì)胞存活率與H2O2濃度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān),在H2O2濃度為1.0 mmol/L時(shí),Caco-2細(xì)胞存活率為51.5%,損傷程度較大。為突顯菊糖的抗氧化活性保護(hù)作用,選擇濃度為1.0 mmol/L的H2O2作用于Caco-2細(xì)胞的氧化損傷模型。如果用大于濃度1.0 mmol/L的H2O2作用于Caco-2細(xì)胞,導(dǎo)致Caco-2細(xì)胞存活率更低,作為一種抗氧化保護(hù)劑,抗氧化保護(hù)能力是有限的。

    圖4 不同濃度H2O2對(duì)Caco-2細(xì)胞存活率的影響Fig.4 Effect of H2O2with different concentrations on the viability of Caco-2 cells

    3.5菊糖對(duì)Caco-2細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)

    為探討菊糖對(duì)H2O2誘導(dǎo)損傷的Caco-2細(xì)胞的保護(hù)作用,實(shí)驗(yàn)中菊糖與Caco-2細(xì)胞共同孵育6 h。由圖5可知,與對(duì)照組相比,經(jīng)過(guò)0.2~0.6 mg/mL菊糖處理的Caco-2細(xì)胞,細(xì)胞存活率均在86%左右,存活率雖有所下降但無(wú)顯著差異(p>0.05);但經(jīng)過(guò)0.8~1.2 mg/mL菊糖處理的Caco-2細(xì)胞存活率出現(xiàn)下降趨勢(shì),隨著質(zhì)量濃度增加,存活率下降,表現(xiàn)出細(xì)胞毒性作用(p<0.05)。菊糖對(duì)Caco-2細(xì)胞抗氧化保護(hù)作用的雙重性:低質(zhì)量濃度時(shí),菊糖有一定的抗氧化活性,對(duì)細(xì)胞具有抗氧化保護(hù)作用,但質(zhì)量濃度超過(guò)一定的程度,可能也會(huì)使細(xì)胞機(jī)能和形態(tài)發(fā)生改變,從而導(dǎo)致Caco-2細(xì)胞死亡。在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)會(huì)隨著質(zhì)量濃度增加抗氧化保護(hù)能力逐漸增強(qiáng),但達(dá)到頂峰時(shí),繼續(xù)增加菊糖的質(zhì)量濃度,那將會(huì)導(dǎo)致對(duì)Caco-2細(xì)胞的致死作用強(qiáng)于抗氧化保護(hù)作用。故在研究菊糖的抗氧化機(jī)理時(shí),選用0.2~0.8 mg/mL質(zhì)量濃度的菊糖對(duì)Caco-2細(xì)胞進(jìn)行抗氧化保護(hù)。

    圖5 不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)Caco-2細(xì)胞存活率的影響Fig.5Effects of inulin with different concentrations onthe viability of Caco-2 cells

    3.6菊糖對(duì)過(guò)氧化氫酶活力的調(diào)節(jié)

    從圖6可知,與陰性對(duì)照組比較,只加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中,過(guò)氧化氫酶活力降低。與陽(yáng)性對(duì)照組比較,加入0.2~0.8 mg/mL的菊糖處理后再加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中,過(guò)氧化氫酶的活力分別提高了7.8%、15.9%、24.7%和35.8%。0.4~0.8 mg/ mL 3組與陽(yáng)性對(duì)照組比較,過(guò)氧化氫酶活力顯著提高(p<0.05);與陰性對(duì)照組相比,無(wú)顯著性差異;只接受0.8 mg/mL菊糖處理組,過(guò)氧化氫酶活力稍降低,無(wú)顯著性差異。

    圖6 不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)過(guò)氧化氫酶活力的影響Fig.6 Effects of inulin with different concentrations oncatalase activity

    3.7菊糖對(duì)谷胱甘肽還原酶活力的調(diào)節(jié)

    從圖7可以得知,與陰性對(duì)照組比較,只加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中GSH-Rx酶活力降低。與陽(yáng)性對(duì)照組比較,加入0.2~0.8 mg/mL的菊糖處理后再加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中,GSH-Rx酶活力分別提高了10.5%、31.6%、33.5%及37.6%。0.4~0.8 mg/ mL 3組與陽(yáng)性對(duì)照組比較,過(guò)氧化氫酶活力顯著提高(2<0.05);與陰性對(duì)照組相比,無(wú)顯著性差異;只接受0.8 mg/mL菊糖處理組,GSH-Rx酶活力稍提高,無(wú)顯著性差異。

    圖7 不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)谷胱甘肽還原酶活力的影響Fig.7Effects of inulin with different concentrations onglutathione reductase(GSH-Rx)activity

    3.8菊糖對(duì)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力的調(diào)節(jié)

    從圖8可以得知,與陰性對(duì)照組比較,只加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中GSH-Px活力降低。與陽(yáng)性對(duì)照組比較,加入0.2~0.8 mg/mL的菊糖處理后再加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中,GSH-Px酶活力分別提高了1.9%、8.4%、29.7%及100.1%。0.6~0.8 mg/mL兩組與陽(yáng)性對(duì)照組比較,過(guò)氧化氫酶活力顯著提高(p<0.05);與陰性對(duì)照組相比,無(wú)顯著性差異;只接受0.8 mg/mL菊糖處理組,無(wú)顯著性差異。

    圖8 不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力的影響Fig.8 Effects of inulin with different concentrations on glutathione peroxidase(GSH-Px)activity

    4 結(jié)語(yǔ)

    通過(guò)測(cè)定菊糖對(duì)鐵離子的還原能力、DPPH自由基清除能力及金屬離子螯合能力,證實(shí)了菊糖具有一定的抗氧化活性,而且隨著菊糖質(zhì)量濃度增大抗氧化活性逐漸增強(qiáng)。以Caco-2細(xì)胞為體外氧化損傷模型,探討菊糖對(duì)H2O2誘導(dǎo)損傷細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶活力的調(diào)節(jié)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,菊糖可通過(guò)提高細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽還原酶及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力,從而實(shí)現(xiàn)抗氧化保護(hù)作用。

    菊糖是一種天然碳水化合物,對(duì)人體有特殊的生理功能,目前己被世界上多個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)為食品營(yíng)養(yǎng)增補(bǔ)劑。日本厚生省批準(zhǔn)菊糖為特定保健食品,美國(guó)食品和藥物管理局批準(zhǔn)菊糖為公認(rèn)的安全級(jí)配料,歐洲則把它作為控制人血液膽固醇水平的功能性甜味劑廣泛應(yīng)用。我國(guó)對(duì)菊糖的研究始于20世紀(jì)90年代,在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)停留在實(shí)驗(yàn)室階段。因此,下一階段有必要開(kāi)展其生理活性與臨床應(yīng)用研究,如保護(hù)臟器氧化損傷、降低糞臭素、影響下丘腦神經(jīng)元以及菊糖過(guò)敏癥等,為其在消化、內(nèi)分泌、心血管疾病,以及腫瘤等的臨床防治提供理論依據(jù)。

    [1]烏日娜,朱軼霞,于永奇,等.菊芋的研究性狀及開(kāi)發(fā)潛力[J].草業(yè)科學(xué),2013,30(8):1295-1300.

    WU Rina,ZHU Yixia,YU Yongqi,et al.Study on status and exploiting potential of helianthus tuberosus[J].Pratacultural Science,2013,30(8):1295-1300.(in Chinese)

    [2]Reza K,Mohammad H,Mehran G,et al.Application of inulin in cheese as prebiotic,fat replacer and texturizer:A review[J]. Carbohydrate Polymers,2015,119:85-100.

    [3]蘇蘭利,呂元,程波,等.黃芪多糖浸泡種蛋對(duì)雛雞免疫器官抗氧化性能的影響[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,42(12):133-135.

    SU Lanli,LV Yuan,CHENG Bo,et al.Effects of a stragalus polysaccharides on antioxidant activity of chicken by soaking fertilized eggs[J].Journal of Henan Agriical Science,2013,42(12):133-135.(in Chinese)

    [4]葉雪芳,崔志英.大蒜多糖的作用功效[J].廣東飼料,2012,21(1):27-30.

    YE Xuefang,CUI Zhiying.The effects of polysaccharides from Allium sativum L[J].Guangdong Feed,2012,21(1):27-30.(in Chinese)

    [5]邵金華,李濤,楊佳.微波輔助大蒜多糖的提取及其抗氧化活性的研究[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,25(4):868-872.

    SHAO Jinghua,LI Tao,YANG Jia.Studyon microwave-assisted extraction ofgarlic polysaccharideand its antioxidantactivity[J]. Acta Agricuhurae Zhejiangensis,2013,25(4):868-872.(in Chinese)

    [6]楊振,楊富民.菊粉對(duì)油脂抗氧化研究[J].食品工業(yè)科技,2009,30(6):119-121.

    YANG Zhen,YANG Fumin.Study on the antioxidant ability of inulin[J].Science and Technology of Food industry,2009,30(6):119-121.(in Chinese)

    [7]仝瑛.菊芋菊糖的提取純化、抗氧化活性及菊糖復(fù)合飲料工藝研究[D].西安:西北大學(xué),2010:53-57.

    [8]陳榮,王學(xué)亮,徐環(huán)環(huán),等.抗氧劑抗氧化活性研究進(jìn)展[J].菏澤學(xué)院學(xué)報(bào),2013,35(5):44-49.

    CHEN Rong,WANG Xueliang,XU Huanhuan,et al.A review on antioxidant activity of antioxidants[J].Journal of Heze University,2013,35(5):44-49.(in Chinese)

    [10]Saiga A,Tanabe S,Nishimura T.Antioxidant activity of peptides obtained from porcine myofibrillar proteins by protease treatment[J].Journal of Agriculture and Food Chemistry,2003,51(12):3661-3667.

    [11]Rivero-Perez M D,Perez-Magarino S,Gonzalez-San M L.Role of melanoidins in sweet wines[J].Analytica Chimica Acta,2002,458(1):169-175.

    Studies on the Antioxidant Activity of Inulin and Its Mechanism

    LIU Deping,WU Ping*
    (Affiliated Hospital of Jiangnan University,Wuxi 214000,China)

    The antioxidant activity of inulin was evaluated by the studies of the reduction ability,F(xiàn)e2+-chelating activity and DPPH free radical scavenging activity.The mechanism of its antioxidant activity was investigated using the Caco-2 cell monolayer model.Three different antioxidant activity assays showed that inulin exhibited good antioxidant activity.A significant protective effect of inulin on H2O2induced oxidative stress in Caco-2 cells was observed in comparison with the positive controls.With the treatment of 0.8 mg/mL insulin,the activities of superoxide dismutase,catalase and glutathione peroxidase were increased by 35.8%,47.6%,and 61.2%,respectively.The antioxidant activity of inulin takes effect mainly by activing the intracellular antioxidant enzymes.

    Inulin,antioxidant activity,the Caco-2 cell monolayer model,mechanism

    TS 201.4

    A

    1673—1689(2015)09—1002—06

    2015-03-23

    劉德萍(1962—),女,吉林長(zhǎng)春人,主管護(hù)師,主要從事?tīng)I(yíng)養(yǎng)護(hù)理及臨床實(shí)踐研究。E-mail:23368058@qq.com

    吳平(1981—),女,江蘇南通人,工學(xué)碩士,主治醫(yī)師,主要從事臨床營(yíng)養(yǎng)治療及研究。E-mail:wuping_1981@163.com

    猜你喜歡
    菊糖存活率自由基
    園林綠化施工中如何提高植樹(shù)存活率
    水提法提取雪蓮果中菊糖的工藝探討
    安徽化工(2021年2期)2021-05-15 13:41:22
    自由基損傷與魚類普發(fā)性肝病
    自由基損傷與巴沙魚黃肉癥
    損耗率高達(dá)30%,保命就是保收益!這條70萬(wàn)噸的魚要如何破存活率困局?
    水產(chǎn)小白養(yǎng)蛙2年,10畝塘預(yù)計(jì)年產(chǎn)3.5萬(wàn)斤,畝純利15000元!存活率90%,他是怎樣做到的?
    菊糖在油脂類食品中的應(yīng)用及其抗氧化性的研究進(jìn)展
    菊糖衍生物的制備、表征、功能 及應(yīng)用研究進(jìn)展
    陸克定:掌控污染物壽命的自由基
    微生物法轉(zhuǎn)化菊糖生產(chǎn)果寡糖工藝優(yōu)化
    av网站免费在线观看视频| 成年人午夜在线观看视频| 欧美 日韩 精品 国产| 人妻 亚洲 视频| 熟女电影av网| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 校园人妻丝袜中文字幕| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 成人综合一区亚洲| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲成国产人片在线观看| 久久 成人 亚洲| 亚洲av综合色区一区| 国产精品国产av在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 大码成人一级视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| av在线app专区| 性高湖久久久久久久久免费观看| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美丝袜亚洲另类| 亚洲国产日韩一区二区| 一区在线观看完整版| 9色porny在线观看| 久久久精品区二区三区| 18禁国产床啪视频网站| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 大片电影免费在线观看免费| 色视频在线一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产一区二区三区av在线| 男女边摸边吃奶| 精品久久久久久电影网| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲国产精品国产精品| 天堂中文最新版在线下载| av免费在线看不卡| 热99国产精品久久久久久7| 高清在线视频一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产成人精品婷婷| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产成人午夜福利电影在线观看| 91国产中文字幕| 成人影院久久| 韩国av在线不卡| 久久久欧美国产精品| 日韩一本色道免费dvd| 一级a做视频免费观看| 老司机影院成人| 国产又爽黄色视频| 成人毛片60女人毛片免费| 少妇的丰满在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 在线观看免费视频网站a站| av网站免费在线观看视频| 午夜久久久在线观看| 老司机影院成人| 男人添女人高潮全过程视频| 最新的欧美精品一区二区| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 秋霞伦理黄片| 国产成人精品无人区| 我的女老师完整版在线观看| a 毛片基地| 久热这里只有精品99| 伊人亚洲综合成人网| 色哟哟·www| a 毛片基地| 赤兔流量卡办理| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久99热这里只频精品6学生| 99久国产av精品国产电影| 男人操女人黄网站| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美成人午夜免费资源| 97在线人人人人妻| a级片在线免费高清观看视频| 99国产综合亚洲精品| 只有这里有精品99| 亚洲国产精品专区欧美| 国产视频首页在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 日本91视频免费播放| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 国产极品天堂在线| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲精品456在线播放app| 看免费成人av毛片| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| www日本在线高清视频| 美女中出高潮动态图| 亚洲av欧美aⅴ国产| 一级毛片电影观看| 中文字幕亚洲精品专区| 永久网站在线| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲国产精品国产精品| 国产精品 国内视频| 精品一区在线观看国产| 欧美亚洲日本最大视频资源| 性高湖久久久久久久久免费观看| 成人国语在线视频| 麻豆乱淫一区二区| videosex国产| 午夜久久久在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲,欧美,日韩| 观看av在线不卡| 丝袜美足系列| 久热这里只有精品99| 国产精品偷伦视频观看了| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 日本91视频免费播放| 永久免费av网站大全| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久精品国产亚洲av天美| 国产熟女欧美一区二区| 成人影院久久| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久免费观看电影| 91精品国产国语对白视频| 亚洲伊人色综图| 免费观看av网站的网址| 综合色丁香网| 国产色婷婷99| 日韩中字成人| 咕卡用的链子| 亚洲,欧美精品.| 精品国产乱码久久久久久小说| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲第一av免费看| 国产精品国产三级专区第一集| 看免费av毛片| 亚洲三级黄色毛片| 最黄视频免费看| av电影中文网址| 在线观看免费视频网站a站| 免费人妻精品一区二区三区视频| 精品久久久精品久久久| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产精品无大码| 大片免费播放器 马上看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 中文字幕av电影在线播放| 乱码一卡2卡4卡精品| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 18禁观看日本| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 热re99久久国产66热| 久久精品国产亚洲av天美| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 高清视频免费观看一区二区| 三级国产精品片| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久婷婷青草| 夫妻性生交免费视频一级片| 男女国产视频网站| 男女午夜视频在线观看 | 欧美人与性动交α欧美软件 | av国产精品久久久久影院| av黄色大香蕉| 黄片无遮挡物在线观看| 丰满少妇做爰视频| 日韩成人伦理影院| 日韩中文字幕视频在线看片| 三级国产精品片| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产精品一区二区在线不卡| tube8黄色片| 婷婷色麻豆天堂久久| 黄色毛片三级朝国网站| 人妻 亚洲 视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 免费黄色在线免费观看| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 黑人高潮一二区| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产高清国产精品国产三级| 丝袜喷水一区| av福利片在线| 99热全是精品| 国产av码专区亚洲av| av一本久久久久| 成年av动漫网址| 亚洲精品aⅴ在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 午夜影院在线不卡| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产精品一区二区在线观看99| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 晚上一个人看的免费电影| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产在线一区二区三区精| 久久久亚洲精品成人影院| 美女福利国产在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲成国产人片在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 99视频精品全部免费 在线| 欧美日韩视频精品一区| 午夜福利视频在线观看免费| 久热这里只有精品99| 日本免费在线观看一区| 高清av免费在线| 飞空精品影院首页| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 99久国产av精品国产电影| 亚洲在久久综合| 亚洲精品乱久久久久久| 免费黄网站久久成人精品| av网站免费在线观看视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产日韩欧美在线精品| 人人妻人人澡人人看| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲av电影在线进入| 中文字幕最新亚洲高清| 精品视频人人做人人爽| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 超碰97精品在线观看| 永久网站在线| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产成人一区二区在线| 久久久精品94久久精品| 亚洲国产看品久久| 亚洲av.av天堂| 青春草国产在线视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产成人免费观看mmmm| 超碰97精品在线观看| 男女下面插进去视频免费观看 | 人成视频在线观看免费观看| 午夜91福利影院| 亚洲国产精品999| 精品久久蜜臀av无| 涩涩av久久男人的天堂| 精品国产一区二区久久| 国产成人欧美| 亚洲av中文av极速乱| 一本大道久久a久久精品| 亚洲久久久国产精品| 亚洲av福利一区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 一区二区三区精品91| 一本大道久久a久久精品| 国产欧美亚洲国产| 国产精品一区二区在线不卡| av视频免费观看在线观看| 七月丁香在线播放| 内地一区二区视频在线| 国产 一区精品| 亚洲欧美一区二区三区国产| 边亲边吃奶的免费视频| av不卡在线播放| 久久久久久久久久久免费av| av国产精品久久久久影院| 久久久欧美国产精品| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲少妇的诱惑av| 久久久久精品久久久久真实原创| 黄色 视频免费看| 一级片免费观看大全| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲国产看品久久| 免费观看a级毛片全部| 久久午夜福利片| 日韩电影二区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 一级爰片在线观看| 国产麻豆69| 国产亚洲一区二区精品| 美女大奶头黄色视频| 亚洲综合精品二区| 最近中文字幕2019免费版| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 午夜免费男女啪啪视频观看| 夫妻午夜视频| 中文字幕亚洲精品专区| 久久99一区二区三区| 色5月婷婷丁香| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲综合色惰| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 18禁国产床啪视频网站| 桃花免费在线播放| 国产 精品1| 国产毛片在线视频| 日本wwww免费看| 五月天丁香电影| 国产探花极品一区二区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 少妇 在线观看| 尾随美女入室| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产精品一区www在线观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 成人手机av| 黄色毛片三级朝国网站| 国产色爽女视频免费观看| 午夜日本视频在线| 黄片播放在线免费| 亚洲国产成人一精品久久久| 九九在线视频观看精品| 一区二区av电影网| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲精品一二三| 少妇人妻久久综合中文| 99热这里只有是精品在线观看| 国产欧美亚洲国产| 国产精品人妻久久久影院| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美人与善性xxx| 国产成人精品婷婷| 国产精品久久久久久久久免| 国产av码专区亚洲av| 国产视频首页在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 日韩成人av中文字幕在线观看| 内地一区二区视频在线| 中文天堂在线官网| 亚洲精品av麻豆狂野| 男人添女人高潮全过程视频| av免费观看日本| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产高清不卡午夜福利| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 久久精品久久精品一区二区三区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产精品.久久久| 有码 亚洲区| 高清黄色对白视频在线免费看| 黄色怎么调成土黄色| 国产精品久久久av美女十八| 日韩av在线免费看完整版不卡| 毛片一级片免费看久久久久| 久久这里有精品视频免费| 看非洲黑人一级黄片| www日本在线高清视频| 女人久久www免费人成看片| 一边亲一边摸免费视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 男女下面插进去视频免费观看 | 日韩欧美一区视频在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 秋霞在线观看毛片| 久久女婷五月综合色啪小说| 欧美另类一区| 伊人久久国产一区二区| 午夜日本视频在线| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品三级大全| 韩国精品一区二区三区 | a 毛片基地| 伦理电影大哥的女人| 在线观看国产h片| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 丝袜脚勾引网站| 久久女婷五月综合色啪小说| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲国产毛片av蜜桃av| av免费观看日本| 午夜激情av网站| 国产成人精品在线电影| 国产片内射在线| 丝袜在线中文字幕| 中文天堂在线官网| 日日爽夜夜爽网站| 蜜桃在线观看..| 亚洲综合色网址| 亚洲av在线观看美女高潮| 中文欧美无线码| 免费日韩欧美在线观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 精品一区在线观看国产| av黄色大香蕉| 精品福利永久在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 一区二区日韩欧美中文字幕 | 久久国产亚洲av麻豆专区| 日韩一区二区视频免费看| 最新中文字幕久久久久| 亚洲欧美一区二区三区国产| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国精品久久久久久国模美| 欧美+日韩+精品| 亚洲色图综合在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 在现免费观看毛片| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 下体分泌物呈黄色| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产成人免费观看mmmm| 成年女人在线观看亚洲视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 黄色配什么色好看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲av免费高清在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产乱来视频区| 波多野结衣一区麻豆| 免费黄网站久久成人精品| 七月丁香在线播放| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久ye,这里只有精品| 日韩成人伦理影院| 91精品国产国语对白视频| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲av免费高清在线观看| 一级片免费观看大全| 国产乱来视频区| 观看av在线不卡| 内地一区二区视频在线| av又黄又爽大尺度在线免费看| 日韩电影二区| 黄片播放在线免费| 国产精品一区二区在线观看99| 婷婷色综合www| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲成人一二三区av| 国产极品粉嫩免费观看在线| 一级爰片在线观看| av天堂久久9| 99re6热这里在线精品视频| 免费观看无遮挡的男女| 精品熟女少妇av免费看| 在线免费观看不下载黄p国产| 午夜av观看不卡| 免费黄网站久久成人精品| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产成人a∨麻豆精品| 久久女婷五月综合色啪小说| 成年人午夜在线观看视频| freevideosex欧美| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 日韩一区二区视频免费看| 国产精品女同一区二区软件| 免费高清在线观看日韩| 精品一区二区三区视频在线| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 午夜激情久久久久久久| 亚洲,欧美,日韩| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 精品一区二区三区视频在线| 久久99精品国语久久久| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产一区二区在线观看av| 欧美精品高潮呻吟av久久| 午夜久久久在线观看| 熟女av电影| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲第一区二区三区不卡| 熟女人妻精品中文字幕| 伊人亚洲综合成人网| 热99国产精品久久久久久7| 国产av码专区亚洲av| 成人国产av品久久久| 午夜影院在线不卡| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产精品蜜桃在线观看| av免费观看日本| 中文字幕制服av| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲美女搞黄在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 伊人亚洲综合成人网| 久久久久网色| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产精品.久久久| 午夜福利视频精品| 久久久久精品人妻al黑| 亚洲精品久久午夜乱码| 尾随美女入室| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 亚洲成色77777| 免费av中文字幕在线| 精品一区二区三卡| 一区二区av电影网| 啦啦啦啦在线视频资源| 精品酒店卫生间| 国产精品三级大全| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 高清黄色对白视频在线免费看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 欧美+日韩+精品| 天美传媒精品一区二区| 91精品三级在线观看| 免费观看性生交大片5| 日韩 亚洲 欧美在线| 成人黄色视频免费在线看| 国产色爽女视频免费观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 老司机影院毛片| 久久精品夜色国产| 日韩制服骚丝袜av| 另类亚洲欧美激情| videossex国产| 一级,二级,三级黄色视频| 国产精品蜜桃在线观看| 少妇的逼好多水| 岛国毛片在线播放| 水蜜桃什么品种好| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 精品人妻在线不人妻| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲av欧美aⅴ国产| 午夜精品国产一区二区电影| 精品久久国产蜜桃| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产在视频线精品| 亚洲第一区二区三区不卡| 成人国产麻豆网| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 少妇高潮的动态图| 国产1区2区3区精品| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产1区2区3区精品| 免费高清在线观看日韩| 最后的刺客免费高清国语| 精品国产露脸久久av麻豆| 大香蕉97超碰在线| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲五月色婷婷综合| 国产精品成人在线| 亚洲精品456在线播放app| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产在线一区二区三区精| 男女边吃奶边做爰视频| 久久国产精品大桥未久av| a级毛色黄片| 色吧在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | av.在线天堂| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日韩av免费高清视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美成人午夜精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 在线精品无人区一区二区三| 欧美国产精品va在线观看不卡| 午夜av观看不卡| 男女无遮挡免费网站观看| 国产1区2区3区精品| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 日本91视频免费播放| 黄色怎么调成土黄色| 欧美精品一区二区大全| av线在线观看网站| 久久热在线av| 久久99一区二区三区| 内地一区二区视频在线| 久久影院123| av.在线天堂| 中文字幕亚洲精品专区| 精品一区在线观看国产| 日本免费在线观看一区| 18禁动态无遮挡网站| 激情五月婷婷亚洲| 久久国产精品大桥未久av| 久久精品久久久久久久性| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久精品久久久久久久性| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲成色77777| 国产69精品久久久久777片| 一级片'在线观看视频| 国产精品一区二区在线观看99| 性色av一级| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 一级,二级,三级黄色视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲av中文av极速乱| 午夜影院在线不卡| 午夜福利视频精品| 在线观看免费日韩欧美大片| 日韩电影二区| 最后的刺客免费高清国语| av免费观看日本| 国产精品国产av在线观看| 日本欧美国产在线视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美激情 高清一区二区三区| 男人爽女人下面视频在线观看| 一区二区av电影网|