苯并噻二唑?qū)ζ∮鐭煵莅追鄄〉恼T導(dǎo)抗性及其對(duì)煙苗安全性研究

汪漢成， 楊雙劍， 許冬青， 陳興江， 胡向丹， 商勝華， 石俊雄＊

（1.貴州省煙草科學(xué)研究所，貴陽(yáng) 550081；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，北京 100193；3.貴州省煙草公司，貴陽(yáng) 550001；4.黔西南州煙草公司技術(shù)中心，興義 562400）

由煙草白粉病菌（Erysiphe cichoracearum DC.）引起的煙草白粉?。╰obacco white powder）是煙草生產(chǎn)上危害性很強(qiáng)的氣傳真菌性病害［1］，其寄主范圍廣，危害性強(qiáng)。它主要發(fā)生在南非、歐洲東部、中東地區(qū)和亞洲等煙草種植區(qū)，在中國(guó)以華南、西南和華中煙區(qū)最為普遍，發(fā)病株率可達(dá)100%，發(fā)病葉率一般在10%～20%，嚴(yán)重的可達(dá)80%以上［2］。隨著我國(guó)煙草集約化育苗的發(fā)展，煙草白粉病在我國(guó)西南局部煙區(qū)的危害越發(fā)嚴(yán)重，造成煙苗素質(zhì)下降并嚴(yán)重影響了煙苗的適時(shí)移栽，給煙農(nóng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

煙草白粉病的防治主要是利用抗病品種和化學(xué)藥劑；然而，兼具優(yōu)良品質(zhì)和煙草白粉病抗性的品種并不多見，而化學(xué)藥劑防治不但嚴(yán)重影響煙草的安全性，而且還會(huì)帶來(lái)抗藥性、環(huán)境污染等方面的問(wèn)題。利用植物的誘導(dǎo)抗性來(lái)防治植物病害是近年來(lái)非常熱門的研究領(lǐng)域。苯并噻二唑（benzothiadiazole）是先正達(dá)公司開發(fā)的一種植物抗病誘導(dǎo)劑，已有報(bào)道其對(duì)馬鈴薯、番茄、大豆、煙草等作物的多種病害都有較好的誘抗效果［3－5］，但能否誘導(dǎo)煙草幼苗對(duì)煙草白粉病產(chǎn)生抗性則鮮有報(bào)道。為了評(píng)價(jià)其防治煙草白粉病的可行性，筆者就苯并噻二唑?qū)ζ∮鐭煵莅追鄄〉恼T導(dǎo)抗性及其對(duì)煙苗的安全性進(jìn)行了初步研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

從煙草漂浮育苗溫室大棚內(nèi)采集煙草白粉病標(biāo)本，用毛刷將單個(gè)病斑的分生孢子刷入4℃冷水中，轉(zhuǎn)接于離體無(wú)病煙草葉片正面。在培養(yǎng)皿中墊濕潤(rùn)濾紙，于25℃，12h光照（10 000lx），12h黑暗交替條件下培養(yǎng)，每隔9d在新鮮離體煙草葉片正面轉(zhuǎn)代培養(yǎng)1次。為了得到大量新鮮分生孢子供活體接種使用，采用手動(dòng)噴霧器將分生孢子懸浮液均勻地噴霧在隔離培養(yǎng)的煙草葉片正面，培養(yǎng)9d后，待葉片正面產(chǎn)生密集、菌齡基本一致的煙草白粉病菌分生孢子，備用。本試驗(yàn)采用同一株煙草白粉病菌。

1.2 供試藥劑

98%苯并噻二唑原藥，安徽合肥麗巴奧物理化學(xué)科技有限公司生產(chǎn)。將其用甲醇（分析純）配成1×103μg／mL的母液，4℃低溫保存，待用。活體試驗(yàn)時(shí)用含0.01%吐溫80的蒸餾水稀釋母液。50%苯并噻二唑水分散粒劑，先正達(dá)（中國(guó)）投資有限公司生產(chǎn)；10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑，先正達(dá)（中國(guó)）投資有限公司生產(chǎn)。

1.3 苯并噻二唑?qū)煵莅追鄄〉恼T導(dǎo)抗性

采用小苗法測(cè)定。將煙草（品種：‘K326’）種植于裝有草炭和蛭石（質(zhì)量比為4∶1）的烤煙育苗專用苗盤（160孔／盤）中，每穴種植1株，待煙苗長(zhǎng)至40d苗齡時(shí)備用。將苯并噻二唑母液稀釋成如下系列濃度：0、0.98、1.95、3.90、7.80、15.60、31.25μg／mL。利用小型手動(dòng)噴霧器，將藥液均勻噴霧處理煙草葉片的正面，直至有藥液開始流失為止，每個(gè)濃度處理30株煙草苗。24h后噴霧接種煙草白粉病菌分生孢子懸浮液（分生孢子濃度2×105個(gè)／mL），自然風(fēng)干后將漂盤置于溫室內(nèi)苗床上，于15～28℃、自然光照和濕度條件下培養(yǎng)。9d后調(diào)查病情［6］，計(jì)算各處理的病情指數(shù)和藥劑的相對(duì)防效。根據(jù)系列藥劑濃度的對(duì)數(shù)值和防效幾率值之間的線性回歸關(guān)系，求出苯并噻二唑?qū)煵莅追鄄【腅C50、EC90和相關(guān)系數(shù)R。

1.4 苯并噻二唑在烤煙漂浮育苗上的持效期測(cè)定

試驗(yàn)設(shè)50% 苯并噻二唑水分散粒劑用量為11.50、23、46g／hm2，對(duì)照藥劑10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑45g／hm2和清水對(duì)照共5個(gè)處理，每處理處理1漂盤煙苗（30株），在煙苗（品種：‘K326’）4葉期第1次用藥，一周后第2次用藥，使用小型手動(dòng)噴霧器按藥液量750kg／hm2常規(guī)噴霧。噴藥后的煙苗放置于有白粉病煙苗的溫室內(nèi)，自然條件下培養(yǎng)（15～28℃，40%～70%RH，自然光照），按照漂浮育苗規(guī)程進(jìn)行剪葉和養(yǎng)分管理。分別于第2次用藥后10、20、30d，每苗盤五點(diǎn)取樣隨機(jī)調(diào)查10株煙苗，參照煙草白粉病藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則［6］的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查，計(jì)算病情指數(shù)和防效。同時(shí)，注意觀察新長(zhǎng)出煙葉的發(fā)病情況和發(fā)病時(shí)間，分析藥劑的持效期。

1.5 苯并噻二唑?qū)ζ∮缈緹煱踩詼y(cè)定

試驗(yàn)設(shè)50% 苯并噻二唑水分散粒劑用量為11.90、23.80、47.50、95、190、380g／hm2，和清水對(duì)照共7個(gè)處理，每處理處理30株漂盤煙苗（品種：‘K326’）。煙苗4葉期時(shí)，采用小型手動(dòng)噴霧器按藥液量750kg／hm2常規(guī)噴霧，直至流失。藥后煙苗按照常規(guī)育苗方式管理，各處理分別于藥后5、10、20、30d五點(diǎn)取樣隨機(jī)調(diào)查10株煙苗，觀察藥劑對(duì)煙苗的危害情況；并于藥后30d五點(diǎn)取樣，稱量和記錄10株煙苗的鮮重、莖圍和根長(zhǎng)值。

2 結(jié)果與分析

2.1 苯并噻二唑?qū)煵莅追鄄【恼T導(dǎo)抗性

煙草小苗法測(cè)定結(jié)果（表1）表明，苯并噻二唑?qū)煵莅追鄄【哂泻軓?qiáng)的誘導(dǎo)抗性，其毒力回歸方程為y＝2.551 5x＋3.677 1，EC50、EC90值分別為3.30μg／mL 和 10.49μg／mL，相 關(guān) 系 數(shù) R 為0.989 5。隨著藥劑濃度的增加，煙苗獲得的抗性逐漸加強(qiáng)，31.25μg／mL苯并噻二唑處理的煙苗能夠完全抵御煙草白粉病菌的侵染。

2.2 苯并噻二唑在漂浮育苗烤煙上的持效期

持效期試驗(yàn)結(jié)果如表2所示，漂浮育苗在溫室自然發(fā)病情況下，藥后10d，空白對(duì)照已經(jīng)發(fā)病，苯并噻二唑所有處理均未發(fā)?。?0d后，50% 苯并噻二唑水分散粒劑11.50g／hm2處理的煙苗才開始發(fā)病；30d后，50% 苯并噻二唑水分散粒劑23g／hm2和46g／hm2處理的防效仍然達(dá)到100%，顯著優(yōu)于45g／hm2苯醚甲環(huán)唑的處理（93.99%）。這表明苯并噻二唑在漂浮育苗煙苗上有30d以上的持效期。此外，50% 苯并噻二唑水分散粒劑11.50、23g／hm2和46g／hm2噴霧處理4葉期的煙苗，均會(huì)誘導(dǎo)煙苗新生葉片對(duì)煙草白粉病菌的抗性。

表2 50%苯并噻二唑水分散粒劑防治煙草白粉病的持效期1）

2.3 苯并噻二唑?qū)ζ∮缈緹煹陌踩?/h3>

安全性試驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，50%苯并噻二唑水分散粒劑95、190、380g／hm2噴霧處理4葉期煙苗會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的藥害，癥狀主要表現(xiàn)為：葉片變黃，葉緣枯死，煙苗矮化、發(fā)育遲緩。隨著藥劑濃度的增加，藥害程度逐漸加重。藥后30d煙苗的農(nóng)藝性狀如圖2、3所示，50%苯并噻二唑水分散粒劑0、95、190g／hm2和380g／hm2處理煙苗的平均鮮重分別為15.98、8.49、5.36g／株和4.56g／株，莖圍分別為1.83、1.57、1.44cm 和1.07cm，隨著苯并噻二唑藥劑濃度的增加，煙苗的鮮重和莖圍均逐漸降低，各處理間存在顯著差異；在漂浮育苗情況下，苯并噻二唑不同濃度噴霧處理在煙苗根長(zhǎng)上不存在差異。

圖3 50%苯并噻二唑水分散粒劑不同濃度處理對(duì)煙苗農(nóng)藝性狀的影響

3 討論與結(jié)論

已有的研究表明，苯并噻二唑25μg／mL處理離體煙草能夠誘導(dǎo)煙草抵抗青枯病，150μg／mL的處理會(huì)對(duì)煙苗造成藥害［7］；同時(shí)發(fā)現(xiàn)該藥劑150μg／mL噴霧處理十字期煙苗，可以推遲盆栽煙草普通花葉病的顯癥發(fā)生，并減輕病害程度［8］；Cole研究表明苯并噻二唑有效劑量0.05～0.1g／m2噴霧處理煙苗可以減輕煙草火疫?。≒seudomonas syringae Van hall）的危害，也可以誘導(dǎo)煙草對(duì)葉斑?。跿hanatephorus cucumeris（Frank）Donk］和蛙眼?。–ercospora nicotianae Ell.et Ev.）產(chǎn)生抗性，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)輕微藥害現(xiàn)象［9］；Nischwitz和 Mandal等研究發(fā)現(xiàn)苯并噻二唑可以誘導(dǎo)烤煙對(duì)番茄斑萎病毒的抗性［10－11］。本研究進(jìn)一步證實(shí)了苯并噻二唑能夠誘導(dǎo)煙苗產(chǎn)生抗性，并補(bǔ)充了其防治煙草白粉病的生物活性，研究結(jié)論同以上報(bào)道類似。然而，其能否在大田自然條件下誘發(fā)煙草產(chǎn)生系統(tǒng)抗性以及這種系統(tǒng)抗性在田間預(yù)防白粉病的效果還有待進(jìn)一步研究。除煙草之外，苯并噻二唑還可誘發(fā)擬南芥、黃瓜、番茄、棉花、玉米、大麥、水稻等多種雙子葉和單子葉植物產(chǎn)生對(duì)真菌、細(xì)菌和病毒病害的系統(tǒng)抗性，且對(duì)植物本身毒性較低，因而已經(jīng)作為一種農(nóng)藥產(chǎn)品（商品名為Bion）投放市場(chǎng)已有多年［12－15］。

本研究采用煙草漂浮育苗的試驗(yàn)表明，苯并噻二唑噴霧處理4葉期煙苗可以誘導(dǎo)煙苗對(duì)煙草白粉病菌產(chǎn)生抗性，且具有30d以上的持效期，它具有同10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑45g／hm2處理同樣優(yōu)秀的防治效果；苯并噻二唑可以很好地被煙草葉片吸收，輸送到煙草生長(zhǎng)點(diǎn)和新生煙草葉片內(nèi)，這進(jìn)一步證實(shí)了該藥劑對(duì)植物的系統(tǒng)誘導(dǎo)活性［16－17］；在本試驗(yàn)劑量范圍內(nèi)，50%苯并噻二唑水分散粒劑在＞95g／hm2使用劑量下會(huì)對(duì)煙苗產(chǎn)生藥害，影響煙苗發(fā)育，因此，苯并噻二唑在烤煙漂浮育苗上的安全使用劑量為47g／hm2，它可以預(yù)防苗期煙草白粉病的危害。

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