RANTES基因多態(tài)性與乙型肝炎慢性化的相關性研究*

高寶霞 高 華 張國順 馮福民

正常T細胞表達和分泌活性因子（RANTES）是一類具有趨化作用的細胞因子（CK），對多種細胞有趨化作用，還可以強烈地激活淋巴細胞，參與炎癥反應，調(diào)節(jié)細胞的生長和分化[1～3]。研究發(fā)現(xiàn)AHB患者RANTES水平明顯高于HBV攜帶者及CHB[4]，由此我們推測RANTES基因多態(tài)性可能參與了乙型肝炎慢性化的進程。為此，我們通過檢測CHB及AHB患者血RANTES基因型，探討其與乙型肝炎慢性化的關系。

對象與方法

一、研究對象 選取2008年5月～2009年4月于唐山市傳染病醫(yī)院收治的CHB患者118例，男性86例，女性32例，平均年齡23.78±3.30歲；AHB患者61例，男性46例，女性15例，平均年齡23.27±3.01歲。診斷參照2000年9月西安會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》的標準。

二、流行病學調(diào)查 依據(jù)相關文獻設計統(tǒng)一調(diào)查表，在征得所有患者知情同意后進行問卷調(diào)查。

三、基因多態(tài)性分析 采集空腹靜脈血3ml，乙二胺四乙酸抗凝，采用鹽析法提取人血基因組DNA。所有引物均由北京賽百盛公司合成，-403和-28上游引物為 5'-CCCTCTGCTTCTCAACAAGTCTCTA-3'，下游引物5'-GTAGCAATGA GGA TGACAGCGAG-3'；In1.1上游引物 5'-CCTGGTCTTGACCACCACA-3'，下游引物5'-GCTGACAGGCATGAGTCAGA-3'。采用聚合酶鏈反應－限制性片斷長度多態(tài)性方法檢測。

四、統(tǒng)計學分析 應用Excel建立數(shù)據(jù)庫，應用SPSS11.5統(tǒng)計軟件對計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用想x2檢驗。對基因型頻率和各潛在危險因素與乙型肝炎慢性化的關系采用多因素非條件Logistic回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結果

一、急慢性乙型肝炎患者一般情況及實驗室檢測指標比較 見表1。

表1 兩組患者一般情況及實驗室指標的比較

二、RANTES基因型分布 對擴增產(chǎn)物分別以Rsa I、EcoR I和Mbo II內(nèi)切酶進行酶切，再經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，結果顯示-403G/A、-28C/G和In1.1 T/C三個基因位點均存在三種基因型，分別為-403-GG、GA、AA，-28-CC 、CG、GG和 In1.1-TT、TC、CC（ 圖 1、2和 3）。

三、急慢性乙型肝炎患者RANTES基因位點多態(tài)性的比較 CHB患者TC基因型及C等位基因明顯高于AHB，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），提示TC基因型為乙型肝炎慢性化的易感因素。TC基因型慢性化的風險是TT基因型的2.2倍 (OR＝2.278，95%CI:1.079～4.808)； 而 -403及 -28基因位點多態(tài)性在兩組中的分布差異均無統(tǒng)計學意義；多因素非條件Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)In1.1TC基因型與乙型肝炎慢性化相關，其OR值為2.262，95%可信區(qū)間為 1.070～4.785（ 表2、3）。

表2 兩組患者RANTES-403，-28和In1.1位點基因型分布比較

表 3 兩組患者 RANTES-403，-28和In1.1位點等位基因分布比較

討論

本研究在控制了研究人群的種族、性別及年齡的影響后，驗證了飲酒及高病毒載量是乙型肝炎慢性化的危險因素，發(fā)現(xiàn)CHB患者乙型肝炎家族史、乙型肝炎患者接觸史高于急性組，但差異無統(tǒng)計學意義，與有些研究不同[5]，這可能與研究的病例數(shù)較少有關。

RANTES僅含68個氨基酸殘基，是分子量為8kD的小分子蛋白。其來源廣泛，NK細胞以及T細胞均可表達RANTES。RANTES與其受體結合可引起白細胞的遷移，如粒細胞、巨噬細胞，CD8及TH1淋巴細胞，介導炎癥反應的發(fā)生[6]。通過對血清RANTES水平的研究發(fā)現(xiàn)急性自限性HBV感染者明顯高于HBV攜帶者及慢性HBV感染者[4]；對肝組織進行免疫組織化學染色結果進行定量研究發(fā)現(xiàn)，隨著肝組織炎癥程度的增加，肝組織RANTES表達強度增強[7]。以上結果提示RANTES的趨化作用廣泛參與了機體對HBV免疫應答的各個階段，并在肝組織炎癥損傷中發(fā)揮了重要作用。

RNATES啟動子區(qū)存在3個有意義的基因位點，分別為-403G/A、-28C/G和In1.1T/C。研究發(fā)現(xiàn)Int1.1C可以下調(diào)RANTES的轉(zhuǎn)錄活性，-403G/A對轉(zhuǎn)錄無影響，而-28G能上調(diào)RANTES的轉(zhuǎn)錄活性[7]。本次研究發(fā)現(xiàn)In1.1突變型較野生型更容易發(fā)生慢性化，這可能與In1.1C下調(diào)RANTES的轉(zhuǎn)錄水平有關，從而導致細胞因子介導免疫反應不能將體內(nèi)的CHB徹底清除。最近Chloe[8]等人研究發(fā)現(xiàn)RANTES單元型（403A/28G/In1.1C/524T)在 HBV痊愈者中較常見。但是，-403A和CCR5Δ32復合基因型可能與減少慢性化的發(fā)生有關。Cheong[9]與Ahn[10]等兩項研究發(fā)現(xiàn)-403與-28存在明顯的連鎖不平衡，但未發(fā)現(xiàn)兩個位點多態(tài)性與乙型肝炎慢性化有關。國內(nèi)Duan[11]等人的研究亦未發(fā)現(xiàn)-403G/A、-28C/G和In1.1T/C多態(tài)性與慢性HBV感染有關，分析原因可能與人種及遺傳背景的差異有關。

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