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    四孢蘑菇馴化栽培技術(shù)的研究

    2012-09-18 09:48:18高云虹張淑華
    中國林副特產(chǎn) 2012年3期
    關(guān)鍵詞:氮源瓊脂碳源

    高云虹,張淑華

    (1.伊春林業(yè)科學(xué)院,黑龍江 伊春153000;2.伊春林業(yè)學(xué)校)

    四孢蘑菇,俗稱雷窩子,學(xué)名蘑菇(Agaricus campestris L.:Fr.)是優(yōu)良食用菌,試驗對小白鼠肉瘤及艾氏腹水癌的抑制率均為80%。子實體中等至稍大。小興安嶺林區(qū),冬長寒冷,夏季溫暖,降水豐富,菇類產(chǎn)量以7、8月為最盛。伊春林區(qū)占據(jù)了小興安嶺大部,浩瀚的林海,濕潤的氣候,孕育了多種多樣野生食用菌的生長,使林區(qū)擁有豐富的野生食用菌資源。有代表性的種類466種,其中食用菌226種,藥用菌33種,食藥兼用55種,有毒菌52種。其它菌100種。然而如此豐富的食用菌資源卻沒有得到充分開發(fā)利用,在可食性食用菌中,僅有黑木耳等極少數(shù)被馴化栽培,而大多數(shù)未被開發(fā)利用。目前伊春正處在經(jīng)濟轉(zhuǎn)型、第三次創(chuàng)業(yè)的關(guān)鍵時期,食用菌是最好的替代產(chǎn)業(yè),在木屑資源已近枯竭的形勢下,草腐菌的栽培具有極其廣闊的發(fā)展空間和重要的現(xiàn)實意義。四孢蘑菇既是伊春的野生食用菌,又是草腐菌,因此,開展了其馴化栽培技術(shù)的研究。

    1 材料和方法

    1.1 生物學(xué)特性測定

    1.1.1 供試菌種

    四孢蘑菇(Agaricus campestris L.:Fr.),傘菌目、蘑菇科。采自伊春市區(qū)北山。

    將四孢蘑菇進行組織分離。把分離并純化的菌種接種到PDA斜面培養(yǎng)基上,在22℃溫度下連續(xù)培養(yǎng)20d,由此進行生物學(xué)特性測定。

    1.1.2 溫度對菌絲生長的影響

    制作PDA培養(yǎng)基,分裝于試管,每支試管裝12mL,經(jīng)126℃滅菌30min,制成斜面,將供試菌種分別接種,每管接入直徑5mm的圓形菌落一塊。每4支一組分別置于5、15、18、20、22、25、28、30℃的恒溫培養(yǎng)箱中,連續(xù)培養(yǎng)20d,測菌落直徑,并比較菌落直徑和菌絲生長速度、菌絲長度。

    1.1.3 酸堿度對菌絲生長的影響

    用1N的NaOH和1N的HCl將PDA培養(yǎng)基的pH 值 調(diào) 節(jié)為:2.58、3.10、3.75、4.44、5.59、6.00、6.33、7.09、8.15、9.02,制成試管斜面培養(yǎng)基。每管接入直徑5mm的圓形菌落一塊,將菌種接到斜面中央。每個pH值重復(fù)4次,置于22℃恒溫箱中連續(xù)培養(yǎng)20d,測定菌落直徑,觀察記錄菌絲生長速度。

    1.1.4 四孢蘑菇對碳源和氮源的利用

    供試碳源:可溶性淀粉、甘露醇、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖;

    供試氮源:硝酸銨、酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀、蛋白胨、尿素;

    測量碳源的基本培養(yǎng)基:KH2PO40.46g、K2HPO41g、MgSO40.5g、瓊脂15g、蛋白胨2g、水1000mL,裝入500mL燒杯中,每杯裝入100mL,分別加入20g碳素不同的碳源。分裝于試管中,每管12mL經(jīng)126℃滅菌30min,制成斜面,每管接入直徑5mm的菌落一塊。每一碳源重復(fù)四次,置于22℃恒溫箱中連續(xù)培養(yǎng)20d,測量菌落直徑。

    測量氮源的基本培養(yǎng)基:葡萄糖20g、KH2PO40.46g、K2HPO41g,MgSO40.5g,瓊脂15g、水1000 mL。

    其它方法同碳源。只是每配方中加入的氮源量為2g。

    1.1.5 碳氮比對菌絲生長的影響

    以麥芽糖為碳源、硝酸銨為氮源,以瓊脂20g、水1000mL,作基礎(chǔ)培養(yǎng)基,配制成C/N分別為10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1、70∶1、80∶1共8種配方,分別裝入試管,126℃滅菌30min,擺成斜面,無菌接入5mm的菌塊,置于斜面中央。同一碳氮比設(shè)4個重復(fù),置于22℃恒溫箱中,連續(xù)培養(yǎng)20d,測量菌落直徑。

    1.1.6 氧氣對菌絲生長的影響

    用PDA培養(yǎng)基分裝于試管中,每管12mL。126℃滅菌30min。擺成斜面,無菌接入5mm的菌塊,置于斜面中央。將試管口的棉塞及與試管口接觸的邊緣用塑料薄膜包嚴(yán),防止氧氣進入。設(shè)4個重復(fù),并設(shè)1組對照。然后放入22℃恒溫箱中,連續(xù)培養(yǎng)20d,測量菌落直徑,觀察菌絲生長勢。

    1.2 馴化栽培試驗

    1.2.1 母種培養(yǎng)基篩選

    PDA:馬 鈴 薯 200g,葡 萄 糖 20g,瓊 脂 20g,水1000mL;

    PDA1:馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂20g,玉米粉20g,水1000mL;

    4號:玉米粉30g,葡萄糖20g,磷酸氫二鉀1g,硫酸鎂0.5g,蛋白胨1g,瓊脂22g,水1000mL;

    5號:燕麥片30g,瓊脂20g,水1000mL;

    6號:玉米粉40g,瓊脂20g,水1000mL;

    11號:葡萄糖10g,麥芽糖10g,酵母膏4g,瓊脂18g,水1000mL;

    16號:葡萄糖20g,磷酸氫二鉀0.1g,蛋白胨2g,硫酸鎂0.5g,酵母浸膏1g,瓊脂20g,磷酸二氫鉀0.4g,水1000mL。

    分別制作以上培養(yǎng)基,分裝每管12mL。126℃滅菌30min。擺成斜面,無菌接入5mm的菌塊,置于斜面中央。每個培養(yǎng)基接種4支,然后放入22℃恒溫箱中,連續(xù)培養(yǎng)20d。測量菌落直徑。

    1.2.2 原種培養(yǎng)基供試配方

    1號:干麥粒99%,石膏1%;

    2號:玉米粒49%,闊葉木屑50%,石膏1%;

    3號:馬糞50%,棉籽殼48%,蔗糖1%,石膏1%;

    7號:木屑56.5%,玉米芯30%,麥麩12%,石膏1%,石灰0.5%;

    8號:玉米粒50%,木屑39%,麥麩10%,石膏1%;

    9號:棉籽殼99%,石膏1%;

    10號:玉米粒100%。

    將以上7種配方分別拌料,濕度調(diào)到60%,用裝袋機裝袋(除含糧食的配方用手工裝袋外),129℃滅菌1~1.5h,分別接入母種,每支接種4~6袋。放入22℃恒溫箱中,連續(xù)培養(yǎng)20d,測量菌絲長度。

    1.2.3 栽培種培養(yǎng)基配方的篩選

    12號:干馬糞60%,稻草38.5%,石膏1%,石灰0.5%;

    13號:干牛糞32%,棉殼65%,石膏1%,石灰2%;

    14號:稻草86%,豆餅5%,玉米粉5%,石膏1%,尿素0.5%,過磷酸鈣1%,石灰1.5%;

    15號:馬糞50%,棉殼48%,蔗糖0.5%,磷酸二氫鉀0.5%,石膏1%;

    17號:木屑78%,麥麩20%,蔗糖1%,石膏1%。

    先將以上各培養(yǎng)料分別拌料,濕度在55%~60%,用裝袋機裝袋,袋的規(guī)格17cm×33cm,聚乙烯塑料袋,100℃滅菌10h。冷卻接種。置室溫下培養(yǎng)。測量菌絲長度。

    1.3 栽培試驗

    袋栽、室內(nèi)箱栽及室外床栽。

    1.3.1 袋栽試驗

    選用發(fā)滿菌的栽培種,將袋口打開,將塑料袋拉直,其上覆蓋塑料薄膜,在室內(nèi)觀察出菇情況。

    1.3.2 室內(nèi)箱栽

    秋季室內(nèi)栽培。用保溫箱,選發(fā)滿菌的栽培種,將塑料袋脫去,將菌種掰碎,克霉靈、白灰、塑料布和從山上取回腐殖質(zhì)土備用。具體操作:先將塑料布裁成預(yù)定規(guī)格并用克霉靈消毒,鋪于箱底及四周,按照料、菌、料、菌的順序播種,最上層覆蓋3cm厚的拌有白灰的腐殖質(zhì)土,蓋上塑料布。記錄播種日期、出菇日期、溫度及濕度。

    1.3.3 室外床栽

    春季室外床栽。試驗地位于伊春市區(qū)北山,8林班15小班,以紅松林為主,典型暗棕壤,下木毛榛,下草繡線菊,中坡。具體做法:先在林中空地按南北走向挖20cm深、寬100cm的溝,將脫去塑料袋的栽培種(1.0~1.1kg/袋)躺倒放于溝內(nèi),其上覆蓋3cm的拌有白灰的土,蓋上塑料布。用土壓上,防止被風(fēng)刮起。10d后,將塑料布揭起,在床上支拱形棚,以利于出菇。記錄播種日期、出菇日期、出菇產(chǎn)量、溫度及濕度。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 生物學(xué)特性

    2.1.1 溫度對菌絲生長的影響。見圖1。

    圖1 溫度-菌絲生長量曲線圖

    圖1顯示,溫度對菌絲生長的影響極為顯著。菌絲生長的溫度范圍是5~25℃,28℃停止生長,最適溫度是20℃(20~25℃)。

    2.1.2 pH值對菌絲生長的影響

    圖2 pH值-菌絲生長量曲線圖

    從圖2顯示,pH值對菌絲生長影響極為顯著。菌絲生長的pH范圍是3.15~9.02,最適是7,其次是6、6.33。pH<3.15時不生長。

    2.1.3 四孢蘑菇對碳源的利用

    由表1知,碳源對菌絲生長影響極為顯著。菌絲生長的最佳碳源是麥芽糖、葡萄糖,其次是乳糖、淀粉,最差的是甘露醇和蔗糖。

    2.1.4 四孢蘑菇對氮源的利用

    表2 氮源對菌絲生長影響的多重比較結(jié)果 mm

    從表2知,氮源對菌絲生長影響極為顯著。菌絲除在尿素上不生長以外,其余均生長,最好的是酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀,其次是硝酸銨、蛋白胨。2.1.5 碳氮比對四孢蘑菇菌絲生長的影響

    表3 碳氮比對菌絲生長影響的多重比較結(jié)果 mm

    由表3得知,碳氮比對菌絲生長的影響不顯著。比較而言,菌絲生長的最佳碳氮比為30∶1、60∶1,其次20∶1、40∶1、10∶1、50∶1,最差的是80∶1。

    2.1.6 氧氣對菌絲生長的影響

    氧氣對菌絲生長的影響不顯著。菌絲在無氧條件下生長1.24mm/d、在有氧條件下0.9mm/d。

    2.3 馴化栽培的結(jié)果

    2.2.1 母種培養(yǎng)基的篩選

    表4 不同培養(yǎng)基對菌絲生長影響的多重比較結(jié)果mm

    從表4知:菌絲在不同培養(yǎng)基上生長差異性極為顯著。在16號、11號培養(yǎng)基上生長最好,其次是PDA、4號、5號、PDA1,最差的是6號。

    2.2.2 原種培養(yǎng)基的篩選

    表5 不同原種培養(yǎng)基對菌絲生長影響的多重比較結(jié)果mm

    由表5結(jié)果:不同原種培養(yǎng)基對菌絲生長的影響極為顯著。在1號、8號培養(yǎng)基上生長最好;其次是3號 、2號 、7號 、9號 、10號 。

    2.2.3 栽培種培養(yǎng)基的篩選

    表6 不同栽培種培養(yǎng)基對菌絲生長影響的多重比較結(jié)果mm

    通過表5知:不同栽培種培養(yǎng)料對菌絲生長的影響不顯著。相對比較菌絲在15號、13號上生長最好;其次是12號、14號;最差的是17號。

    2.2.4 袋栽試驗

    經(jīng)室內(nèi)及室外袋栽出菇試驗,均未出菇。

    2.2.5 四孢蘑菇馴化栽培的生物學(xué)效率

    表7 人工栽培的產(chǎn)量及生物學(xué)效率

    表7結(jié)果表明:四孢蘑菇的人工栽培是完全可以實現(xiàn)的。其生物學(xué)效率為38%。子實體形成生長階段的溫度范圍13~27℃,最適是15~19℃。原基形成時期對空氣濕度要求不高60%以上就可以,子實體分化及發(fā)育濕度范圍是90%~95%。人工栽培必須熟料覆土,否則不能出菇。

    3 結(jié)論

    3.1 四孢蘑菇可人工栽培。

    3.2 四孢蘑菇的生物學(xué)特性。

    菌絲生長的溫度范圍是5~25℃,28℃停止生長,最適溫度是20℃(20~25℃);pH范圍是3.15~9.02,最適是7,其次是6、6.33。pH<3.15時不生長。最好碳源是麥芽糖、葡萄糖,其次是乳糖、淀粉,最差的是甘露醇和蔗糖;最好氮源是酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀,其次是硝酸銨、蛋白胨,最差的是尿素;最佳碳氮比為30∶1,其次20∶1、40∶1、10∶1、50∶1,最差的是80∶1;氧氣對蘑菇菌絲生長的影響不顯著,菌絲在生長初期對氧氣的要求不嚴(yán)格,甚至比有氧條件下生長還要快,后期需求較多。

    3.3 四孢蘑菇最佳培養(yǎng)基

    母種最佳培養(yǎng)基:6號:葡萄糖20g,磷酸氫二鉀0.1g,蛋白胨2g,硫酸鎂0.5g,酵母浸膏1g,瓊脂20g,磷酸二氫鉀0.4g,水1000mL;11號:葡萄糖10g,麥芽糖10g,酵母膏4g,瓊脂18g,水1000mL。

    原種最佳培養(yǎng)基:1號:干麥粒99%,石膏1%;8號:玉米粒50%,木屑39%,麥麩10%,石膏0.5%。

    栽培種最佳培養(yǎng)基:15號:馬糞50%,棉殼48%,蔗糖0.5%,磷酸二氫鉀0.5%,石膏1%;13號:干牛糞32%,棉殼65%,石膏1%,石灰2%。

    3.4 四孢蘑菇子實體形成生長階段的溫度范圍13~27℃,最適是15~19℃。原基形成時期對空氣濕度>60%,子實體分化及發(fā)育濕度范圍是90%~95%。人工栽培的生物學(xué)效率為38%。四孢蘑菇袋栽不能出菇。人工栽培必須熟料覆土,否則不能出菇。

    本次研究的是馴化栽培技術(shù),在提高產(chǎn)量等方面還有待更深入的探究。

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