高效液相色譜法測定鹽酸可樂定脈沖釋藥微丸膠囊的含量＊

楊宗發(fā)，江尚飛，張榮發(fā)，胡娟娟

(重慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，重慶 400030)

鹽酸可樂定具有降壓、鎮(zhèn)痛、止瀉等藥理作用。鹽酸可樂定脈沖釋藥微丸膠囊可按預(yù)定的模式迅速而短暫地釋放定量的藥物，并且能迅速停止釋放。高血壓等病因發(fā)作具有節(jié)律性，不需長時間維持體內(nèi)恒定藥物濃度，采用脈沖給藥不僅療效很好，而且降低了藥品的不良反應(yīng)。鹽酸可樂定的含量測定常采用高效液相色譜法[1]、毛細管電泳法[2]、離子對萃?。止夤舛确╗3]、氣相色譜法[4]等方法。筆者采用C8色譜柱檢測鹽酸可樂定脈沖釋藥微丸膠囊中可樂定的含量，為建立其質(zhì)量標準提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Shimadzu LC－10AT型高效液相色譜儀，SPD－10A型紫外檢測器;HS3120型超聲波提取儀(天津市恒奧科技發(fā)展有限公司);AUX220型雙量程分析天平(日本島津)。鹽酸可樂定脈沖微丸膠囊 (自制，100 μg/粒，批號分別為 20100312，20100316，20100322);鹽酸可樂定對照品(批號為10071－199905，中國藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純，水為純化水，磷酸、辛烷磺酸鈉、氫氧化鈉為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Diamonsil C8柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.22%辛烷磺酸鈉－甲醇－磷酸(500∶500∶1，用1 mol/L氫氧化鈉溶液或磷酸調(diào)pH至3.0);流速:1.0 mL/min;檢測波長:220 nm;進樣量:20 μL。在此條件下，鹽酸可樂定保留時間為13.257 min，峰理論板數(shù)為 16 902.695，拖尾因子為 1.095，分離度為22.937，滿足2010年版《中國藥典(二部)》規(guī)定要求。

2.2 溶液制備

取樣品20粒，去膠囊殼，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于鹽酸可樂定10 μg)，置100 mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理(功率280 W，頻率60 kHz)10 min使鹽酸可樂定溶解，加流動相稀釋至刻度，用0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密稱定鹽酸可樂定對照品10.24 mg，加流動相溶解并稀釋至100 mL，搖勻，從中再吸取1 mL，置100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。取鹽酸可樂定對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每1 mL中約含80 ng的溶液，即得對照品溶液。按脈沖微丸膠囊處方制備不含鹽酸可樂定的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗:精密量取鹽酸可樂定對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各20 μL，分別注入色譜儀。色譜圖見圖1。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜主峰相應(yīng)位置上有相同的色譜峰，而陰性對照品溶液在此保留時間處無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取對照品貯備液(1.024 μg/mL)1，2，4，8，12 mL，置100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件，分別精密吸取上述溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積(A)對鹽酸可樂定質(zhì)量濃度(C)繪制標準曲線，得回歸方程 A=28.995 7 C －0.573 1，r=0.999 2(n=5)。結(jié)果表明，鹽酸可樂定質(zhì)量濃度在10.24～122.88 μg/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

重復(fù)性試驗:取樣品(批號為20100312)適量，依法制備供試品溶液，分別制備6份，按擬訂的色譜條件進行測定。結(jié)果鹽酸可樂定的平均標示百分含量為99.44%，RSD為0.78%。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，于室溫(20～25℃)下放置，在 0，1，3，5，7，9，11 h 時分別進樣測定。結(jié)果鹽酸可樂定峰面積的 RSD為0.46%(n=7)，表明供試品溶液在11 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗:精密稱取空白輔料9份，分別精密加入鹽酸可樂定對照品貯備液 (1.024 μg/mL)2.0，8.0，10.0 mL，每種質(zhì)量濃度平行3份;按擬訂的方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸可樂定加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品各20粒，依法制備供試品溶液，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖;另取鹽酸可樂定對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL約含80 ng的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算。結(jié)果批號為20100312，20100316，20100322的樣品每片中鹽酸可樂定的平均百分標示含量分別為 100.4%(RSD=0.71%)，99.5%(RSD=0.62%)和99.6%(RSD=10.32%)。

3 討論

在190～400 nm波長范圍內(nèi)紫外掃描，發(fā)現(xiàn)鹽酸可樂定最大吸收波長為220 nm，而空白輔料最大吸收波長為198 nm，兩者之間紫外吸收光譜有重疊干擾現(xiàn)象，顯然無法選擇紫外分光光度法測定供試品含量，只能選擇高效液相色譜法測定供試品的含量。

考察流動相不同比例時鹽酸可樂定的出峰情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)文中流動相的保留時間較理想，柱效高，出峰峰形好，故選擇了此流動相。

采用C8色譜柱、高效液相色譜法測定鹽酸可樂定脈沖釋藥微丸膠囊中鹽酸可樂定的含量，樣品預(yù)處理簡單，測定結(jié)果準確，重復(fù)性好，因此可作為本制劑含量的控制方法。

[1]楊繼斌，湯曉樞.HPLC測定珍菊降壓片中鹽酸可樂定的含量[J].藥物分析雜志，2006，26(12):1 854 －1 856.

[2]高蘇亞，李 華，曹曉芹.區(qū)帶毛細管電泳法測定珍菊降壓片有效成分的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19(11):2 656 －2 657.

[3]魏世超，徐麗君，賀國芳，等.可樂保林片中鹽酸可樂定含量測定[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2002，21(9):583 －584.

[4]楊雪梅，陳顯瑤.血漿中鹽酸可樂定的氣相色譜測定法[J].藥物分析雜志，1994，14(2):24－26.