β3腎上腺素能受體基因Trp64Arg多態(tài)性與蒙古族原發(fā)性高血壓病相關性分析1）

張曉云，魏芳婧，徐 力，陰淑瑩

腎上腺素能受體（β3－AR）、是繼β1－AR和β2－AR之后新近發(fā)現(xiàn)的第3個腎上腺素能受體。它主要介導脂肪分解與熱生成作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)β3－AR基因變異與肥胖、胰島素抵抗（IR）有關，而這兩者又是導致高血壓病發(fā)病的重要危險因素。為了探討蒙古族原發(fā)性高血壓（EH）與β3－AR基因之間的關系，應用PCR－PECP技術，對β3－AR基因色氨酸／精氨酸（Trp／Arg）進行分析研究。

1 資料與方法

1．1 研究對象 EH組為2009年3月—2011年3月于我院診斷為EH的蒙古族患者102例，男66例，女36例，年齡（47．23±11．55）歲。入選標準：符合 WHO／ISH高血壓治療指南標準，收縮壓（SBP）≥140mmHg（1mmHg＝0．133kPa）和（或）舒張壓（DBP）≥90mmHg者。排除繼發(fā)性高血壓，糖尿?。―M），肝、腎病史以及服用降脂藥物患者。對照組為蒙古族健康人群，共收集93例，男61例，女32例，年齡（48．62±9．63）歲。入選標準：收縮壓＜140mmHg，舒張壓＜90mmHg者；排除肝、腎、甲狀腺疾病，糖尿病以及服用降壓藥物史。兩組性別、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、年齡匹配，無親緣關系、無異族通婚。兩組基本資料詳見表1。

表1 EH組與對照組的一般特征（±s）

表1 EH組與對照組的一般特征（±s）

注：兩組各項比較，P＞0．05。

組別 n 年齡（歲） BMI（kg／m2） SBP（mmHg） DBP（mmHg）EH 組 102 47．23±11．55 27．88±5．25 154．70±14．84 96．28±10．18對照組 93 48．62±9．63 25．35±4．78 125．84±8．86 76．58±7．53

1．2 方法

1．2．1 生化指標測定 兩組均于清晨空腹采肘前靜脈血4 mL，采用全自動生化分析儀（7600－010自動分析儀，中國）測量血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）、血糖、胰島素、尿酸等生化指標。

1．2．2 基因多態(tài)性分析 基因組DNA制備：取EDTA抗凝血4mL分離白細胞，酚氯仿法抽提白細胞基因組DNA。采用DNA提取試劑盒提?。–W0542）。引物設計：PCR引物由公司合成，引 Takara物序列如下：上游5′CGC，CCA ATA，CCG，CCA，ACA，C3′；下游5′CCA，CCA，GGA，GTC，CCA，TCA，CC3′。PCR擴增β3－AR基因外顯子，1．8%瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴增產(chǎn)物，擴增產(chǎn)物長度210bp?；蚪MDNA限制性內(nèi)切酶BstNI（NEB公司提供）酶切，3%瓊脂糖凝膠電泳鑒定酶切產(chǎn)物。β3－AR基因64位點Trp突變?yōu)锳rg，使BstNI的一個酶切位點消失，電泳時可見正常純合子TT、雜合子TA、突變純合子AA。

1．3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13．0統(tǒng)計軟件處理。先計算各組該位點基因型分布頻率及等位基因頻率，確認其符合Hardy－Weinberg平衡組間頻率。比較用卡方檢驗，連續(xù)校正卡方檢驗。計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，均數(shù)間比較用t檢驗。對不同基因型臨床指標進行方差分析。

2 結 果

2．1 兩組該位點基因型分布頻率及等位基因頻率 樣本人群的基因型分布符合Hardy－Weinberg定律，在遺傳學上該樣本可代表地區(qū)蒙古族人群。詳見表2。

表2 β3－AR基因Trp64Arg多態(tài)性基因型頻率

2．2 兩組β3－AR Trp64Arg基因型和等位基因比較 兩組間TT、TA、AA基因型分布頻率和T、A等位基因分布頻率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。詳見表3。

表3 Trp64Arg基因型和等位基因型 例（%）

2．3 不同基因型對心腦血管危險因素的影響 因β3－AR Trp64Arg各基因型在正常血壓組和高血壓組間分布頻率差異無統(tǒng)計學意義，故將兩組合并進行β3－AR不同基因型各生化指標的比較。結果顯示，基因Trp64Arg突變者的體質(zhì)量指數(shù)顯著高于正?；蛐停≒＜0．05），突變者在TG、血糖、胰島素、尿酸方面差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．05）；在收縮壓、舒張壓、膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇方面差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。詳見表4。

表4 β3－AR基因Trp64Arg多態(tài)性與臨床指標的關系（±s）

表4 β3－AR基因Trp64Arg多態(tài)性與臨床指標的關系（±s）

指標 TT（143例） TA（45例） AA（7例） F值P體質(zhì)量指數(shù)（kg／m2） 23．91±2．45 26．73±9．45 24．03±2．9229．532 0．001收縮壓（mmHg） 138．62±15．95 140．09±19．75 155．86±15．72 2．859 0．060舒張壓（mmHg） 84．19±11．95 87．06±13．66 95．09±19．75 2．715 0．056膽固醇（mmol／L） 4．65±1．19 5．06±0．89 5．04±0．88 0．149 0．862三酰甘油（mmol／L） 1．60±0．95 1．79±1．08 1．83±0．42 3．860 0．023低密度脂蛋白膽固醇（mmol／L） 2．67±0．74 2．71±0．70 2．69±0．64 0．057 0．944血糖（mmol／L） 5．27±0．46 5．37±0．68 5．44±0．38 3．759 0．025尿酸（μmol／L） 277．37±70．30 300．30±81．30 310．29±30．19 5．617 0．004胰島素（U／mL） 8．18±3．16 13．68±7．34 15．80±7．8716．685 0．001

3 討 論

EH常伴隨著代謝方面的異常，如肥胖、體重增加、胰島素抵抗、糖尿病等，這些均被證實與β3－AR基因的多態(tài)性有關。影響代謝危險因素的基因變異，可進一步修飾代謝綜合征的表達［1］。

β3－AR是交感神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分，它主要介導脂肪分解與熱生成作用，該受體激動時局部脂肪分解增加。人的棕色脂肪組織（BAT）、白色脂肪組織（WAT）、腹內(nèi)網(wǎng)膜細胞、膽囊及結腸均有β3－AR分布；β3－AR的主要生理作用為介導BAT激活、分解。在腸道網(wǎng)膜細胞、BAT、WAT等交感神經(jīng)分布豐富的組織，通過去甲腎上腺素的釋放來激動β3－AR，進而激活線粒體上的解耦聯(lián)蛋白（UCP），刺激脂肪酸的氧化和磷酸化，消耗體內(nèi)過多的脂肪。如果決定β3－AR性狀的β3－AR基因發(fā)生突變，使細胞膜表面基因表達缺陷，蛋白結構異常，β3－AR功能減低，細胞信號轉導受損，從而影響脂肪組織的產(chǎn)熱和分解，就可導致血壓升高、DM、IR、肥胖等。研究證實，β3－AR基因外顯子第64位有一個Trp／Arg多態(tài)位點，與其作用相關。

β3－AR多態(tài)性與EH相關性的研究很多，但結論存在爭議。在意大利南部白人中，雜合子攜帶預示患EH的傾向性增加。在正常血壓、血脂、非DM患者中，Melism等［2］用低劑量去甲腎上腺素刺激后，雜合子與Trp純合子相比，前者舒張壓明顯增高。此研究說明Trp64Arg多態(tài)性不但與EH有關，而且會增加血壓對去甲腎上腺素的敏感性。在對日本160例非肥胖血壓正常者長達5年的縱向研究卻發(fā)現(xiàn)，Trp攜帶者的血壓水平也明顯升高［3］，而其血中去甲腎上腺素水平卻未見升高。Mo等［4］的研究認為，β3－AR基因Trp64Arg多態(tài)性與中國男性肥胖高血壓患者有關。陳慧等［5］研究證實，β3腎上腺能受體基因多態(tài)性與高血壓病相關，并與患者首次心腦血管事件相關。目前也有部分研究證實β3－AR基因Trp64ArgSNP與EH無關。美國人在阿拉斯加愛斯基摩人的調(diào)查研究中發(fā)現(xiàn)，該基因突變與血壓無關。日本人研究發(fā)現(xiàn)該基因突變與血脂異常有關，患動脈粥樣硬化的危險性很大，但與血壓和心肌缺血的關系不大，在我國東北EH高危人群、中國香港人群、歐洲青少年人群中的研究均證實，β3－AR基因Trp64ArgSNP與EH無相關性［6，7］。譚虹等［8］研究表明，EH組、對照組β3－AR基因Trp64Arg突變頻率差異無統(tǒng)計學意義，但雜合子攜帶者的BMI顯著高于非攜帶者。作為EH危險因素之一的BMI與Trp64ArgSNP相關，說明其可能是通過影響EH發(fā)生的潛在危險因素如BMI來發(fā)揮作用。王廣宇等［9］研究證實β3－AR基因Trp64Arg突變，可導致腹型肥胖的聚集和早期動脈粥樣硬化的產(chǎn)生。

本研究表明，蒙古族高血壓病患者β3－AR基因Trp64Arg突變頻率與對照人群比較，差異有統(tǒng)計學意義，說明β3－AR基因突變可能不是原發(fā)性高血壓病的易感基因，這與美國及日本學者的研究是相同的。但β3－AR基因Trp64Arg突變者的BMI顯著高于非攜帶者。β3－AR基因Trp64Arg突變者的TG、血糖、胰島素、尿酸與非攜帶者基因型比較，差異有統(tǒng)計學意義。說明β3－AR基因Trp64Arg突變對高血壓病發(fā)生的影響可能是通過影響高血壓病發(fā)生的潛在危險因素，如BMI、血糖代謝、血脂代謝來發(fā)揮作用。

β3－AR基因Trp64Arg突變對高血壓病發(fā)生的影響可能存在人種與地區(qū)的差別。另外，疾病的發(fā)生涉及多個基因，可能是多個具有不同功能的基因共同作用的結果，對多基因、復雜疾病的研究，采用單體型分析可能更準確。單體型是同一染色體上各位點基因緊密連鎖組成的基因單位，比單核苷酸多態(tài)性分析具備更多的遺傳信息量。此外，因樣本、中間表型的選擇等均存在潛在的問題，故如何建立一種更為合理的分析方法是值得探索的問題。

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