羅布麻和大葉白麻黃酮類成分的比較研究

鄧翻云，吳敏言，尹傳華，石秋梅，*

（1.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊830046；2.荒漠與綠洲生態(tài)國家重點實驗室，中國科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研究所，新疆烏魯木齊830011）

羅布麻和大葉白麻黃酮類成分的比較研究

鄧翻云1，吳敏言1，尹傳華2，石秋梅1，*

（1.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊830046；2.荒漠與綠洲生態(tài)國家重點實驗室，中國科學(xué)院新疆生態(tài)與地理研究所，新疆烏魯木齊830011）

以羅布麻和大葉白麻為實驗材料。以NaAc-A1C13體系為顯色劑，以金絲桃苷為對照品，用分光光度法于400nm處測定了它們的總黃酮含量；采用高效液相色譜法（HPLC），測定了它們的金絲桃苷含量。結(jié)果表明：羅布麻葉片中的金絲桃苷含量較大葉白麻葉片中的高，前者為0.1%左右，后者含量很低，幾乎檢測不出，大葉白麻花中的含量亦很低；羅布麻葉片和大葉白麻葉片中的總黃酮含量分別為2.6%和2.2%，大葉白麻花中的含量較葉片的低，為0.5%。

羅布麻；大葉白麻；總黃酮；金絲桃苷

Abstract:In this study,the hyperoside contents in Apocynum venetum Linn.and Poacynum hendersonii(Hook.f.)Woodson were measured by HPLC,and the total flavonoid were determined by spectrophotometry with UV absorption wave at 400 nm using hyperoside as a reference substance.Results showed the hypreoside content of leaves in Apocynum venetum Linn.was highest,which was 0.1%,and those of leaves and flower in Poacynum hendersonii(Hook.f.)Woodson were very little,nearly undetectable.The total flavonoid content of leaves in Apocynum venetum Linn.and Poacynum hendersonii(Hook.f.)Woodson was 2.6%and 2.2%,respectively,however that of flowers was significantly lower than that of leaves,which was approximately 0.5%.

Key words：Apocynum venetum Linn.;Poacynum hendersonii(Hook.f.)Woodson;flavonoids;hyperoside

據(jù)《中國植物志》記載，我國羅布麻種類主要有3種：羅布麻（又稱紅麻，小花羅布麻，羅布麻屬羅布麻Apocynum venetum Linn.），大葉白麻（又稱白麻，大花羅布麻，白麻屬大葉白麻Poacynum hendersonii（Hook.f.）Woodson）和白麻（又稱紫斑麻、中花羅布麻，白麻屬白麻Poaynum pictum Schrenk）。人們習(xí)慣把羅布麻、大葉白麻和白麻統(tǒng)稱為“羅布麻”。但現(xiàn)在白麻（Poaynum pictum Schrenk）的分布和數(shù)量很少，很難采集到，因此真正有生產(chǎn)價值的是前兩種（羅布麻和大葉白麻）[1]。

在我國民間，羅布麻和大葉白麻兩種植物的葉片均有被制作羅布麻茶飲的。但在我國“藥典”和其他藥學(xué)文獻中，“羅布麻”一詞，實際是指紅麻Apocynum venetum L。目前已生產(chǎn)的復(fù)方羅布麻片、羅布麻茶和羅布麻煙亦多以紅麻葉為原料[2-3]。因此有些學(xué)者認(rèn)為，羅布麻Apocynum venetum L不能與大葉白麻A.hendersonii Hook.f.混為一談?，F(xiàn)在許多以大葉白麻葉充作羅布麻茶，也只能是代用品，更不應(yīng)作為羅布麻葉藥用。大葉白麻能否代替羅布麻作為羅布麻茶原料，關(guān)鍵在于它們主要有效成分有何異同。從多種紙層析和薄層層析分析的結(jié)果看，羅布白麻葉浸膏和羅布紅麻葉浸膏的化學(xué)成分基本相同；兩者各含氨基酸15種，種類亦基本相同，總含量紅麻略高于白麻；所含的微量元素兩者亦基本相同[3]。但也有人說三種羅布麻的成分有較大差異[2,4]。

新疆的大葉白麻資源豐富，該地區(qū)市場上出售的羅布麻茶原料幾乎都是大葉白麻葉。因此，為更好地開發(fā)利用大葉白麻資源，弄清兩者主要有效成分的異同顯得尤為重要。黃酮類物質(zhì)，尤其金絲桃苷和異槲皮苷物質(zhì)，是其主要的活性成分。本文比較測定了羅布麻和大葉白麻葉片、花中的總黃酮和金絲桃苷含量，該研究對新疆大葉白麻這一重要資源植物的開發(fā)利用有重要意義。

1 試驗材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

LC-201OA-VP高效液相色譜儀：日本島津；紫外分光光度儀：上海棱光技術(shù)有限公司；BS200S電子天平：北京賽利斯天平有限公司；水浴鍋：上海蘇達實驗儀器有限公司；索氏提取器；研缽。

1.1.2 試劑

石油醚、乙醇等有機溶劑均為分析純。

1.1.3 原料

金絲桃苷對照品純度99%，購買于天津一方科技有限公司。實驗材料羅布麻和大葉白麻葉、花由新疆綠康羅布麻有限公司提供，新疆大學(xué)生物科學(xué)系鑒定。

1.2 樣品供試液制備

參考石秋梅等（2009）中方法[5]，將干燥的大葉白麻葉、羅布麻葉和大葉白麻花碾磨后，精密稱取約1 g樣品，用濾紙包裹好，置于索氏提取器中，加石油醚50mL，提取至近無色，棄去石油醚，取出濾紙包，將濾紙敞開，揮干溶劑，將脫脂后的樣品轉(zhuǎn)移置索氏提取器中，加70%乙醇40 mL，回流提取2 h，提取液放冷，過濾，再加70%乙醇40 mL，回流提取2 h，過濾。收集兩次的濾液，用70%乙醇定容至100 mL，搖勻備用。每個樣做3個重復(fù)。

1.3 對照品溶液制備

精密稱取金絲桃苷對照品4.9mg，用70%乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中，制成含金絲桃苷0.049mg/mL的溶液，保存于4℃冰箱備用。

1.4 總黃酮含量的測定

1.4.1 顯色方法（AlCl3-NaAc顯色法）

精密量取樣品供試液1.0 mL，置10 mL容量瓶中，加 0.5 mL 0.6 mol/L AlCl3，再加 1.5 mL 1 mol/L NaAc,搖勻，放置20 min，加70%乙醇至刻度。以零號管（不加樣品供試液）為空白，400 nm處測吸光值A(chǔ)[5]。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取金絲桃苷對照品溶液 0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，按上述顯色方法（1.4.1）測吸光值A(chǔ)。以A值（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)，進行線性回歸。其回歸方程（n=6）為：y=0.0337x，R2=0.9975。

1.4.3 樣品中總黃酮含量的測定

精密量取樣品供試液1.0 mL，按上述顯色方法（1.4.1）在400 nm處測吸光值A(chǔ)，根據(jù)回歸方程，計算出樣品中總黃酮含量。

1.5 金絲桃苷含量的測定

1.5.1 色譜條件

主要參考中華人們共和國藥典貫葉金絲桃中金絲桃苷含量的測定方法[6]。具體條件如下：填充柱為十八烷基硅烷鍵合硅酸，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液（體積比 16∶84），檢測波長 360 nm，流速 1.0 mL/min，柱溫40℃。

1.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取對照品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 與7.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，各加70%乙醇至刻度。按上述色譜條件各取10 μL進樣。以濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得峰面積─濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程（n=7）為：y=18489x-1492.9，R2=0.9987。

1.5.3 樣品中金絲桃苷含量的測定

取已制備好的樣品提取液（1.2）經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，各取10 μL上述按上述色譜條件（1.5.1）進樣。

2 結(jié)果

2.1 羅布麻和大葉白麻的總黃酮含量

將樣品提取液的吸光值代入回歸方程，即可計算出各樣品中總黃酮見圖1?？芍?，羅布麻葉、大葉白麻葉和大葉白麻花中的總黃酮平均含量分別為2.6%、2.2%和0.5%。

2.2 羅布麻和大葉白麻樣品色譜圖

對照品金絲桃苷、羅布麻葉、大葉白麻葉、大葉白麻花金絲桃苷樣品提取液色譜圖見圖2。從圖2-A可知，金絲桃苷保留時間為18.1 min，3個樣品中羅布麻葉的含量較高，大葉白麻葉中的含量及其微弱，幾乎檢查不到。

2.3 羅布麻和大葉白麻金絲桃苷含量

將各樣品提取液的峰面積代入其回歸方程，即可計算出各樣品中金絲桃苷的含量。結(jié)果見圖3。

結(jié)果表明，羅布麻葉、大葉白麻葉和大葉白麻花的金絲桃苷平均含量分別為0.12%、0.007%和0.02%。

3 結(jié)論

通過對羅布麻和大葉白麻葉和花總黃酮和金絲桃苷含量含量的測定，可得出如下結(jié)論：

1）本研究采用的色譜條件可用來檢測羅布麻體內(nèi)金絲桃苷含量。

2）羅布麻葉片的總黃酮含量較大葉白麻的高些，分別為2.6%和2.2%，同時，前者的金絲桃苷含量亦高于后者。由此結(jié)果可以看出，以黃酮類作為主要功效成分時，羅布麻葉的效果較大葉白麻好。但作為羅布麻茶原料，大葉白麻能否替代羅布麻，還需更深入的實驗，需對其他黃酮類成分進行更系統(tǒng)的比較測定。

3）目前市場上出售的羅布麻茶有葉茶和花茶兩種，主要是以大葉白麻葉和花作為原料的。從上述實驗結(jié)果可知，大葉白麻花中總黃酮含量為0.5%左右，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于葉中的含量，因此，以類黃酮作為主要功效成分時，花茶的效果不如葉茶。

[1]張衛(wèi)明,肖正春,顧龔平,等.羅布麻資源利用與羅布麻植物分類問題[J].中國野生植物資源,2006,25(2):15-19

[2]張云峰,魏東,郭祀遠(yuǎn),等.大花羅布麻的化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2006,18(6):954-957

[3]嚴(yán)秀珍,胡昌奇,周軍良,等.白麻和紅麻化學(xué)成分的測定[J].中成藥研究,1987,12:27-29

[4]周麗,王效山,黃和平,等.2005.不同產(chǎn)地羅布麻葉總黃酮的含量測定[J].現(xiàn)代中藥研究與實踐,19(5):37-38

[5]石秋梅,帕孜來提.吐魯洪,阿不都拉.阿巴斯.大葉白麻不同部位總黃酮和金絲桃苷含量[J].食品科學(xué),2009,30(8):263-266

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2005年版·一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005:159

Comparative Study of the Flavonoids Component in Apocynum venetum Linn.and Poacynum hendersonii(Hook.f.)Woodson

DENG Fan-yun1,WU Min-yan1,YIN Chuan-hua2,SHI Qiu-mei1,*
(1.College of Life Science and Technology,Xinjiang University,Urumqi 830046,Xinjiang,China;2.State Key Laboratory of Desert and Oasis Ecology,Xinjiang Institute of Ecology and Geography,Chinese Academy of Sciences,Urumqi 830011,Xinjiang,China)

2011-11-10

新疆大學(xué)“國家大學(xué)生創(chuàng)新性實驗計劃”項目（編號：101075518）；荒漠與綠洲生態(tài)國家重點實驗室開放基金（編號：200901-03）

鄧翻云（1987—），女（漢），在讀本科生，主要從事植物有效成分分析。

*通信作者：石秋梅（1976—），女（漢），副教授，博士，主要從事植物有效成分分析。