芫荽提取物抗菌活性研究

邊名鴻，曹新志，劉芳，熊亞林

（四川理工學(xué)院生物工程學(xué)院，四川自貢643000）

芫荽提取物抗菌活性研究

邊名鴻，曹新志*，劉芳，熊亞林

（四川理工學(xué)院生物工程學(xué)院，四川自貢643000）

分別用石油醚、95%乙醇、水浸提冷凍干燥的芫荽，研究提取物的抗菌活性及pH、溫度、NaCl對提取物抑菌活性的影響。結(jié)果表明，僅水浸提物對細菌的抑菌效果較為明顯，最低抑菌濃度小于或等于10%。具有良好的熱穩(wěn)定性，在pH 6，2.0%NaCl的條件下抑菌效果較好。

芫荽；抑菌；防腐劑

Abstract:Freeze-dried coriandrum was extracted by three methods.They were petroleum ether,95%-ethanol and water respectively.Antibacterial experiment indicated that only water extract presented significant antimicrobial activity and the minimum inhibition concentration(MIC)was below 10%of original extract.The inhibition effect of coriandrum extracts on microorganisms and the effects of pH value,temperature and NaCl concentration on its antimicrobial activities were discussed.The results showed that the antibacterial activity of coriandrum extracts was stable under heating and had the best antibacterial effects at pH 6 with 2.0%NaCl concentration.

食品防腐是一個古老的話題，一直以來人們采用高鹽腌制、高糖蜜制、酸、酒、煙熏以及在水中、地下存放等放來來延長食品保質(zhì)期。隨著工業(yè)發(fā)展，化學(xué)防腐劑在食品加工行業(yè)中廣泛利用，但隨著人們對食品安全的重視，對食品防腐方法提出了更高的要求，試圖尋找更安全可靠、高效的防腐劑[1]。為了滿足食品安全的要求，減少和避免化學(xué)防腐劑的使用，從天然產(chǎn)物中獲取防腐劑，成為研究熱點。

芫荽，最早叫“胡荽”，原產(chǎn)地為地中海沿岸及中亞地區(qū),我國各地均有栽培，可以入藥，也作為香辛料被人們廣泛實用，富含維生素，正癸醛（decanal），壬醛（nonanal），芳樟醇（linalool)及異香豆精類物質(zhì)等[2-5]。國內(nèi)外對其果實有一些研究報道，主要集中在精油提取，對其莖葉生理功能包括防腐功效的研究報道相對較少[6-7]。芫荽既可作為調(diào)味品，又具有防腐功能，作為天然食品防腐劑有著很好的應(yīng)用前景。本文研究了芫荽提取物針對不同微生物的抑菌情況，以及不同條件下的抗菌活性，為芫荽作為新型安全天然食品防腐劑提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料

芫荽，市售。

1.1.2 供試菌種

大腸桿菌（E.coli）、枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）、啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae Hansen）、青霉（P.ericillinm）：由四川理工學(xué)院生物工程學(xué)院微生物基礎(chǔ)實驗室提供。

82例患者中，急性血栓9例，血栓大?。洪L0.6～22.0 cm，直徑0.7～3.3 cm，彩色多普勒超聲檢查病變靜脈管腔明顯增寬，其內(nèi)充滿低或無回聲，血管壁與血栓界限清晰，無增厚，病變處無血流信號；陳舊性血栓73例，其中28例為伴有再通的不全性血栓，彩色多普勒超聲顯示病變靜脈管徑粗細不等，管壁局限性或彌漫性增厚，管腔內(nèi)有強弱不等的實性回聲，與血管壁分界不清，局部管腔血流充盈缺損，血流變細，周邊有縫隙狀血流信號。

1.1.3 培養(yǎng)基[8]

細菌用培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；酵母用培養(yǎng)基：葡萄糖牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；霉菌用培養(yǎng)基：馬鈴薯培養(yǎng)基。

1.2 方法

1.2.1 芫荽的凍干

冷凍干燥機，物料單位面積質(zhì)量1260 g/m2，干燥時間12 h。

1.2.2 芫荽提取物制備

凍干芫荽，粉碎后過60目篩，分別取石油醚、95%乙醇、水作為非極性、半極性、極性溶劑進行提取，提取后離心，取上清液。定義1mL原液含有1g芫荽凍干粉的提取物[9]。浸提條件為：料液比為 1∶30（g/mL），40 ℃水浴搖床，130 r/min，12 h。

1.2.3 供試菌菌懸液的制備

上述供試菌種原種均用相應(yīng)的培養(yǎng)基斜面活化,用接種環(huán)挑取少量菌體到裝有10 mL無菌生理鹽水的試管中，漩渦振蕩制成菌懸液備用。

1.2.4 抑菌試驗[10]

濾紙片法測定提取液抑菌作用。取直徑6 mm的濾紙片，分別放入水提取原液、95%乙醇提取原液、石油醚提取原液、水提取空白、95%乙醇提取空白、石油醚提取空白浸泡4 h，120℃下濕熱滅菌備用。將供試菌液各取0.5 mL，與相應(yīng)培養(yǎng)基制成含菌平板，將紙片用鑷子放入培養(yǎng)基表面，每菌3個重復(fù)。細菌37℃培養(yǎng)24 h，霉菌和酵母28℃培養(yǎng)48 h。精確測量個抑菌圈直徑。

1.2.5 最低抑菌濃度（MIC）測定

最低抑菌濃度（MIC）：完全沒有菌生長的最低提取物濃度為最低抑菌濃度。

將抑菌效果最好的提取原液用無菌水配置成25%、20%、15%、10%、5%、2.5%的濃度系列,按紙片法測定各濃度下的抑菌圈直徑。

1.2.6 不同pH、溫度、NaCl濃度對提取物抑菌活性的影響[11]

不同pH對提取物抑菌活性的影響試驗：以大腸桿菌及枯草芽孢桿菌作為供試菌，將適量水提原液及pH調(diào)節(jié)液注入牛津杯中，使終濃度為原液的10%，以不同pH空白液作為對照，經(jīng)恒溫培養(yǎng)后測其抑菌圈大小。

不同溫度對提取物抑菌活性的影響試驗：分別將10%原液在不同溫度下處理30 min后，取0.2 mL注入牛津杯中，培養(yǎng)24 h后測其抑菌圈大小。

不同NaCl濃度對提取物抑菌活性的影響試驗：以大腸桿菌及枯草芽孢桿菌作為供試菌，研究不同NaCl濃度梯度對10%原液的抑菌活性影響。按照一般食品加鹽量，選擇鹽濃度為：1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溶劑提取原液對供試菌株的抑菌作用

不同溶劑提取原液對供試菌株的抑菌效果見表1。

表1 凍干芫荽提取原液抑菌性能試驗結(jié)果Table 1 Antimicrobial activity of 3 kinds of coriandrum extracts against four species of microbes mm

從表1結(jié)果可以看出，所得到的芫荽水提取液對大腸桿菌和枯草芽孢桿菌均有很強的抑制作用，對大腸桿菌的抑制效果強于枯草芽孢桿菌，說明其對革蘭氏陰性菌的抑制效果更好。對于酵母和霉菌沒有明顯的抑制效果。而乙醇提取液、石油醚提取液的抑菌效果都不明顯，初步說明了芫荽中的有效抑菌成分是水溶性的物質(zhì)。

2.2 紙片浸泡時間的確定

取大小一致，直徑為6 mm的濾紙片，放入水提取液中，浸泡 1、2、4、6、8 h，濕熱滅菌后，以大腸桿菌為供試菌，觀察其抑菌效果，結(jié)果見表2。

表2 不同浸泡時間芫荽抑菌性能試驗結(jié)果Table 2 The effect of soaking time on the antimicrobial activity of coriandrum extracts

表2的結(jié)果表明，4 h之前，抑菌圈大小隨著浸泡時間的延長而增大，4 h之后紙片上的抑菌物質(zhì)達到飽和，抑菌圈大小不再增加。因此選擇紙片浸泡時間為4 h為最佳。

2.3 最低抑菌濃度（MIC）的測定

將水提原液用無菌水稀釋為不同濃度,進行最小抑菌濃度測定。并選用頭孢拉定作為對比。測定結(jié)果見表3。結(jié)果得出，芫荽水提取液對大腸桿菌的最低抑菌濃度為8%，對枯草芽孢桿菌的最低抑菌濃度為10%。

2.4 pH對芫荽提取物抑菌活性的影響

選取 pH4、5、6、7、8 五個水平，對 pH 對芫荽提取物抑菌活性的影響作了初步研究，如表4。結(jié)果表明，pH為6時，抑菌作用最好。從表4結(jié)果得出，pH為4~5時，主要是樣液酸度的增加導(dǎo)致抑菌想象較好，但R樣/R比值很小，說明此酸性條件下，提取物的抑菌效果比較差。同理，pH為6時R樣/R比值最高，說明此條件下提取物抑菌效果較好。

表3 水提取液的MICTable 3 The minimum inhibition concentration(MIC)of water extracts mm

表4 pH對芫荽提取物抑菌活性的影響Table 4 The effect of pH value on the antimicrobial activity of coriandrum extracts

2.5 不同溫度對提取物抑菌活性的影響

選取溫度水平為 40、60、80、100、121 ℃，短時（30 min）處理樣液后觀察其抑菌效果，結(jié)果見表5。

表5 溫度對芫荽提取物抑菌活性的影響Table 5 The effect of temperature on the antimicrobial activity ofcoriandrum extracts

從表5可以看出，80℃以下的熱處理，基本不影響提取物抑菌活性。100℃及以上處理后，有少量懸浮物出現(xiàn)，可能是提取物中存在的少量大分子物質(zhì)，芫荽香味變薄，從表中數(shù)據(jù)反應(yīng)出提取物抑菌活性仍然較好，說明了芫荽提取物中主要的抑菌物質(zhì)對熱的穩(wěn)定性較好。

2.6 NaCl對芫荽提取物抑菌活性的影響

大多食品中含有一定鹽分，因此本論文研究了在不同濃度NaCl環(huán)境中，提取物的抑菌活性，結(jié)果見表6。

表6 NaCl濃度對芫荽提取物抑菌活性的影響Table 6 The effect of NaCl concentration on the antimicrobial activity of coriandrum extracts

如表6所示，R樣/R在鹽濃度2.0%時最高，低鹽狀態(tài)下，提取物的抑菌活性反而增強，可能是與鹽的存在有一定的協(xié)同關(guān)系。具體原因有待進一步研究。隨著鹽濃度的增高，抑菌效果也越好，但從R樣/R反應(yīng)出，此時起主要作用的是鹽濃度增高所帶來的高滲透壓。

3 結(jié)論

本文初步探索了芫荽防腐功效，以期為芫荽作為天然食品防腐劑提供一定的理論參考。分別用石油醚、95%乙醇、水浸提冷凍干燥的芫荽,獲得浸提液，然后進行抑菌試驗，抑菌實驗表明,水提液對不同細菌均有較為明顯的抑制作用,其最低抑菌濃度都小于或者等于10%原液。10%的原液在pH 6，1.5%NaCl的條件下抑菌效果較好。

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Study on the Antimicrobial Activity of Coriandrum Extracts

BIAN Ming-hong,CAO Xin-zhi*,LIU fang,XIONG Ya-lin
（College of Bioengineering,Sichuan University of Science&Engineering,Zigong 643000,Sichuan,China）

2011-12-07

四川教育廳川菜發(fā)展研究中心科技項目（CC10Z09）

邊名鴻（1979—），女（漢），講師，碩士研究生，研究方向：發(fā)酵工程。

*通信作者：曹新志，教授。