土家藥大山黃連抑菌實驗

吳宗暉 田 菂

(1.吉首市人民醫(yī)院，湖南 吉首 416000; 2.湘西自治州民族中醫(yī)院，湖南 吉首 416000)

大山黃連，系土家族民間常用的一種民族藥。民間又稱大車前、水紅菜、翳子草。來源于龍膽科獐牙菜屬植物雙點獐牙菜 Swertia bimaculata(Sieb.et Zucc.)Hook.f.et Thoms的全草［1］，性寒、味苦，具有清熱解毒、清肝利膽、止瀉消炎等作用。土家醫(yī)常用于消化不良，胃炎，急、慢性肝炎，膽囊炎，目赤腫痛，牙痛，腸炎，流行性感冒，尿路感染等疾病?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)其主要成分為獐牙菜苦苷等有效成分，可用于多種炎癥。大山黃連提取物抑菌實驗研究方面尚未見報道。為此，我們對大山黃連藥液進行了抑菌實

驗研究?，F(xiàn)將結果報道如下。

1 材料

1.1 藥材:采自湖南保靖縣呂洞山，當?shù)亓暦Q“大山黃連”。藥物標本經(jīng)內(nèi)蒙古大學生物系馬毓泉教授鑒定為龍膽科獐牙菜屬植物雙點獐牙菜Swertia bimaculata(Sieb.et Zucc.)Hook.f.et Thoms 。

1.2 標準菌株:金黃色葡萄球菌ATCC29213;表皮葡萄球菌ATCC12228;大腸埃希菌 ATCC25922;銅綠假單胞菌ATCC27853;糞腸球菌ATCC29212。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，購于北京海淀區(qū)微生物培養(yǎng)基制品廠。

1.3 供試菌株菌種:來源于本院微生物學實驗室保存的菌種，用前經(jīng)過鑒定，為典型菌株。1#ATCC12228表皮葡萄球菌、2#ATCC29213金黃色葡萄球菌、3#ATCC25922大腸埃希菌、4#ATCC27853銅綠假單胞菌、5#ATCC29212糞腸球菌、6#蠟樣芽胞桿菌(嘔吐物標本分離)、7#肺炎克雷伯菌肺炎(痰標本分離)、8#銅綠假單胞菌(痰標本分離)。

2 方法

2.1 藥液制備:稱取大山黃連藥材50g碎成粗末，置于燒杯中，加適量純化水浸泡1h后煎煮，沸后用文火再煎30min，濾出煎液后向燒杯中加入適量純化水按上法再煎煮1次，合并2次濾液減壓濃縮至50mL，置4℃保存?zhèn)溆?。藥液濃度相當?毫升含1g生藥。

2.2 瓊脂稀釋法:將不同濃度的抗菌藥物，加入融化并冷至50。C左右的定量M－H瓊脂中，制成含不同抗菌藥物濃度的平板，接種受試菌，孵育后觀察細菌生長情況，肉眼觀察以抑制細菌生長的瓊脂平板所含最低藥物濃度判為MIC。

2.3 含藥瓊脂平板制備:藥物制成1g/mL，按1:5、1:10、1:20、1:40配制成藥物瓊脂平板。瓊脂厚度約4mm(90mm直徑平板傾倒瓊脂總量為25ml)。

2.4 接種物制備與接種:用直接菌落懸液法制備濃度相當于0.5麥氏標準比濁管的菌懸液，再1:10稀釋。含藥瓊脂平板使用前，從2～8。C冰箱取出置35。C孵箱30min，待瓊脂平板表面水分干燥后進行接種。以接種環(huán)取制備好的菌液(約1～2μL)接種于瓊脂平板表面，形成直徑為5～8mm的菌斑，每個菌斑含菌數(shù)約為104CFU。接種順序是先接種無藥對照平板，而后從低藥物濃度向高藥物濃度平板。

2.5 孵育:瓊脂平板接種好菌液后，將平板置室溫待菌液被瓊脂吸收后(一般不超過30分鐘)把瓊脂平板倒置放入(35±2)。C孵箱孵育20～24h。

2.6 結果判讀:將平板置于暗色、無反光物體表面判讀試驗終點，以抑制細菌生長最低藥物濃度為MIC。接種處出現(xiàn)單個菌落或模糊薄霧狀可忽略不計。［2、3、4］

3 結果

對革蘭氏陽性菌有較好的抑菌性，除9#空白對照1:5、1:10、1:20、1:40 均未生長;藥物濃度為 1:5 時 1#、2#、3#、4#4株革蘭氏陽性菌均未見生長，1:10時除3#、4#有較弱的生長外余2株均見明顯生長，1:20時皆呈明顯生長;其余菌株在藥物濃度為1:5時即有明顯生長。如表1所示:1#ATCC29213金黃色葡萄球菌、2#ATCC12228表皮葡萄球菌、3#ATCC29212糞腸球菌、4#蠟樣芽胞桿菌(嘔吐物標本分離)、5#ATCC27853銅綠假單胞菌、6#ATCC25922大腸埃希菌、7#肺炎克雷伯菌肺炎(痰標本分離)、8#銅綠假單胞菌(痰標本分離)、9#空白對照。藥液濃度為1克/毫升生藥。

表1 大山黃連抑菌試驗結果

4 討論

抗生素從發(fā)現(xiàn)至今已成為了人類抵御細菌感染的有力武器。［5、6、7］但隨著抗生素的長期應用甚至濫用，越來越多的細菌對現(xiàn)有的抗生素產(chǎn)生了耐藥性，降低了現(xiàn)有抗生素的效率。由于中藥及民族藥的特殊性，細菌較少對中藥及民族藥產(chǎn)生耐藥性，并且中藥及民族藥具有毒副作用小，取材方便，經(jīng)濟實惠的優(yōu)點，因此研究和開發(fā)中藥及民族藥抗生素對解決耐藥菌株的問題具有重大意義，這也受到了眾多學者的廣泛關注。大山黃連抑菌實驗表明，對部分革蘭氏陽性菌有較好抑制作用，為治療因革蘭氏陽性菌感染引起的疾病提供了科學依據(jù)。大山黃連對其它菌株菌種無抑制作用。本次實驗結果對中藥及民族藥抗生素的開發(fā)和臨床的用藥都有一定的參考價值。本次實驗僅進行了單味民族藥的體外抑菌實驗，而中藥及民族藥在體內(nèi)的作用機制及其有效成分都極為復雜，在人體內(nèi)是否能達到體外實驗的效果還有待進一步的研究。

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