• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    氣相色譜-質(zhì)譜法定性分析麝香保心丸揮發(fā)性入血成分的研究

    2012-09-07 13:39:28郭黎安王淑萍向麗姜鵬張衛(wèi)東柳潤輝第二軍醫(yī)大學(xué)訓(xùn)練部藥學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室上海200433
    藥學(xué)實(shí)踐雜志 2012年3期
    關(guān)鍵詞:龍腦麝香揮發(fā)性

    郭黎安,王淑萍,向麗,姜鵬,張衛(wèi)東,柳潤輝(第二軍醫(yī)大學(xué),.訓(xùn)練部;.藥學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室,上海 200433)

    氣相色譜-質(zhì)譜法定性分析麝香保心丸揮發(fā)性入血成分的研究

    郭黎安a,王淑萍b,向麗b,姜鵬b,張衛(wèi)東b,柳潤輝b(第二軍醫(yī)大學(xué),a.訓(xùn)練部;b.藥學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室,上海 200433)

    目的建立氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)定性分析麝香保心丸揮發(fā)性入血成分的方法。方法健康雄性SD大鼠給予麝香保心丸混懸液灌服(劑量3.4 g/kg體重),于口服30 min后肝門靜脈取血,蛋白沉淀法處理血漿樣品進(jìn)行GC-MS分析。分析條件:Thermo TR-5 ms色譜柱;Xcalibur色譜工作站;載氣為氦氣;載氣流速為1.0 ml/min;進(jìn)樣口溫度為220℃;離子源溫度為250℃;梯度升溫;進(jìn)樣體積為1 μl;分析時間59 min。結(jié)果通過比較麝香保心丸提取液、空白組及給藥組,及與在線NIST05數(shù)據(jù)庫比對,共識別和鑒定10個化學(xué)成分,其中6個為麝香保心丸中原型成分,其余4個為代謝物。結(jié)論本研究建立了一種快速篩選麝香保心丸中揮發(fā)性入血成分的方法,可為其深入研究提供基礎(chǔ)。

    麝香保心丸;血清藥物化學(xué);冠心病;氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

    麝香保心丸為國家中藥保護(hù)品種,其經(jīng)麝香、人參、蘇合香、肉桂、蟾酥、牛黃、冰片7種藥物配伍組合而成。臨床上主要用于冠心病,動脈粥樣硬化,心肌缺血及心肌纖維化等的治療,效果顯著?,F(xiàn)代藥理研究表明,麝香保心丸具有一系列藥理活性,其可提高NO的水平[1]、提高內(nèi)皮型NO合酶基因的表達(dá)等作用[2]以及能減輕微小血管的損害,下調(diào)MMP-2mRNA和蛋白表達(dá)[3],改善心肌缺血引起的心肌壞死等[4],盡管對其整體藥效機(jī)制評價較多,但其主要藥理活性成分,即復(fù)方主要藥效物質(zhì)尚未得到充分闡明。

    由于中藥復(fù)方為中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下的多味藥材經(jīng)配伍組合后的有機(jī)整體,先前的生物活性導(dǎo)向下的植化系統(tǒng)分離模式不能完全闡明中藥復(fù)方的藥效物質(zhì),因?yàn)樗雎粤酥兴帍?fù)方整體作用機(jī)制,而且不能反映中藥復(fù)方中的化學(xué)成分體內(nèi)動態(tài)變化過程。近年來,中藥血清藥物化學(xué)研究已經(jīng)成為快速篩選中藥體內(nèi)活性成分的一種有效手段。該技術(shù)基于“口服中藥經(jīng)胃腸道吸收入血的成分有最大可能成為真正藥效成分”的理論,廣泛應(yīng)用于多個中藥復(fù)方藥效成分的篩選[5~7],成果顯著。

    麝香保心丸含有的植物二次代謝產(chǎn)物主要分為揮發(fā)性成分與非揮發(fā)性成分組成。本課題組前期研究已經(jīng)闡明了其主要非揮發(fā)成分[8],但麝香保心丸中揮發(fā)性成分尚未完全探討。因此,本研究基于中藥血清藥物化學(xué)理論,建立氣相色譜-質(zhì)譜法(GCMS)定性分析中藥復(fù)方麝香保心丸揮發(fā)性入血成分,擬為中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)研究提供技術(shù)手段。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器質(zhì)譜儀:Thermo GC DSQⅡ氣相色譜儀;Xcalibur色譜工作站;KS5200H超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);BP211D型電子天平(德國Sartorius);Anke TGL-16C型離心機(jī);Vortex QL-901型渦旋器。

    1.2 試藥麝香保心丸制劑由上海和黃藥業(yè)有限公司提供(批號080105),麝香酮(批號M0128)、肉桂酸(批號ASB-00003655-025)、肉桂醛(批號YY90307)、龍腦(批號M0297)、異龍腦(批號111512)5種對照品均購自中國藥品生物制品檢定所,苯甲酸芐脂購自上海鼎瑞化工有限公司。戊巴比妥鈉、肝素鈉均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。正己烷、乙醚、丙酮、氯仿均為分析純,購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)動物SPF級雄性SD大鼠,體質(zhì)量(200 ±20)g,由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供,動物許可證號SCXK(滬)2003-0003,實(shí)驗(yàn)前禁食12 h (自由飲水)。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 麝香保心丸分析及灌胃樣品制備

    2.1.1 麝香保心丸分析樣品制備精密稱定麝香保心丸樣品500 mg,研細(xì),于10 ml容量瓶加入乙醚混懸,超聲提取20 min,冷卻至室溫,乙醚補(bǔ)足損失體積,靜置取上清,同法提取兩次,濾液合并,12 000 r/min離心10 min。取上清液過0.45 μm微孔濾膜,1 μl進(jìn)樣GC-MS分析。

    2.1.2 對照品溶液制備分別精密稱取各對照品適量,于10 ml容量瓶中加乙醚至刻度,4℃冰箱中冷藏,備GC-MS分析。

    2.1.3 麝香保心丸灌胃樣品制備精密稱定麝香保心丸樣品適量,研細(xì),于錐形瓶中加入0.5%羧甲基纖維素鈉制成混懸液(濃度:0.34 g/ml)。20只SD雄性大鼠隨機(jī)分為溶劑對照組與給藥組,每組10只,溶劑對照組大鼠給予0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌服。給藥組大鼠給予麝香保心丸混懸液灌服(劑量:3.4 g/kg)。服藥30 min后,所有大鼠腹腔注射1%的戊巴比妥鈉溶液(劑量:0.15 ml/kg)麻醉。肝門靜脈取血5 ml,置于涂肝素鈉的EP管中,4℃,3 000 r/min離心10 min,取上清液,-80℃冰箱冷凍,備用。

    2.2 色譜條件Thermo TR-5 ms色譜柱;Xcalibur色譜工作站;載氣為氦氣;載氣流速1.0 ml/min;進(jìn)樣口溫度220℃;離子源溫度250℃;進(jìn)樣體積1 μl;梯度升溫程序見表1;分析時間59 min。

    表1 梯度洗脫程序

    2.3 質(zhì)譜條件進(jìn)樣各對照品溶液,優(yōu)化GC-MS參數(shù),優(yōu)化的質(zhì)譜條件:EI源,電子能量70 eV,掃描速度5次/s,發(fā)射電流100 μA,掃描周期3 642 amu/ s,離子源溫度250℃,掃描質(zhì)量范圍10~650 u。數(shù)據(jù)分析采用Xcalibur色譜工作站。

    2.4 入血成分認(rèn)定于5 ml EP管中加入血漿樣品250 μl,乙醚1 ml,渦旋1 min,12 000 r/min離心10 min,取上清液,同法萃取兩次,合并上清,真空旋轉(zhuǎn)蒸干,殘?jiān)尤?0 μl乙醚復(fù)溶,離心,取上清液1 μl進(jìn)樣GC-MS分析,比較溶劑對照組與給藥組質(zhì)譜圖,確定麝香保心丸入血成分。質(zhì)譜鑒定過程:于40~500 u范圍內(nèi),分別對空白血漿,給藥血漿以及麝香保心丸提取液的GC-MS色譜圖以1 μl為間隔單位進(jìn)行提取,即分別提取40、41、42、498、499及500等離子,對提取離子色譜圖進(jìn)行比較,分析空白血漿和給藥血漿離子峰度差異,以此鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果如表2所示。

    2.4.1 原型化合物鑒定由于空白血漿與給藥血漿的質(zhì)譜離子流圖幾乎相同,背景噪音掩蓋了目標(biāo)化合物的響應(yīng)值。為扣除噪音干擾,本研究采用提取離子的方法對空白血漿與給藥血漿圖譜進(jìn)行處理。設(shè)定提取離子波動范圍±0.5u,原型化合物鑒定方法如上所述,如提取離子m/z 55,空白血漿與給藥血漿圖譜如圖1所示。給藥血清圖譜中于36.8 min處出現(xiàn)一差異峰,通過與對照品及NIST05數(shù)據(jù)庫比對,該化合物最終被確定為麝香酮。同理,龍腦、異龍腦、苯甲酸芐酯、肉桂醛及肉桂酸經(jīng)同樣方法鑒定。

    2.4.2 代謝產(chǎn)物鑒定代謝產(chǎn)物鑒定方法如上所述,當(dāng)提取離子為m/z 108時,給藥后血清和空白血清的提取離子色譜圖如圖2所示。通過給藥血漿與空白血漿對比,于保留時間25.7、26.6及26.9 min處的出現(xiàn)3個差異峰,且在麝香保心丸提取液色譜圖中未見,提示其可能為代謝成分。經(jīng)過NIST05數(shù)據(jù)庫比對,3個化合物被鑒定bicycle[2,2,1]heptan-2-ol,2-allyl-1,7,7-trimethyl,2,6,10-trimethyltetradecane及2-butyl-5-methyl-3-[2-methylprop-2-enyl?cyclohexanone。

    表2 GC-MS鑒定的入血成分和代謝產(chǎn)物

    圖1 提取離子m/z 55的空白血漿(A)、給藥血漿(B)色譜圖及差異色譜峰碎片離子圖(C)

    圖2 提取離子m/z 108的空白血漿質(zhì)譜圖

    3 討論

    本文基于氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),對中藥復(fù)方麝香保心丸揮發(fā)性入血成分進(jìn)行研究,共確認(rèn)10個入血成分,包括6個原型成分及4個代謝產(chǎn)物。在已鑒定的這些成分中,很多化合物對心血管疾病有著積極的治療和預(yù)防作用。如肉桂中的肉桂醛能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞粘附因子的產(chǎn)生,可以減少血小板聚集和血栓形成,有利于對抗動脈粥樣硬化[9,10]。麝香酮抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞與中性粒細(xì)胞黏附及其表面ICAM-1、VCAM-1和CD44表達(dá),有利于緩解心血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷后的炎癥反應(yīng)[11]。只含有龍腦和異龍腦的人工冰片則能使冠狀竇血流量回升,減慢心率,降低心肌氧耗量[12]。這些化合物對于心血管積極的治療作用也從另一方面驗(yàn)證了本研究的可靠性。本研究過程中的方法學(xué)優(yōu)化及結(jié)果如下:

    3.1 給藥劑量確定本研究分別考察了不同給藥劑量(0.8、1.7和3.4 g/kg)大鼠血漿中的入血成分,經(jīng)對比GC-MS圖譜主要化合物特征離子(麝香酮m/z 55、肉桂酸m/z 147、龍腦和異龍腦m/z 95)峰度,發(fā)現(xiàn)麝香保心丸中主要的揮發(fā)性成分在3.4 g/kg劑量下的色譜峰較高,所以給藥劑量選擇為3.4 g/kg。

    3.2 取血時間點(diǎn)的確定本研究分別考察了不同取血時間(15、30、60 min)大鼠血漿中的入血成分,從提取特征離子色譜峰中發(fā)現(xiàn),30 min時間點(diǎn)的血漿樣品質(zhì)譜圖中發(fā)現(xiàn)麝香酮、肉桂酸、龍腦和異龍腦均有色譜峰出現(xiàn),給藥60 min后取血漿樣品質(zhì)譜圖中各目標(biāo)離子的提取離子色譜峰變小,冰片中龍腦、異龍腦的色譜峰甚至消失。所以選擇30 min為最佳時間點(diǎn)。

    3.3 樣品前處理方法優(yōu)化本研究分別考察了不同前處理方法對入血成分的影響,經(jīng)比較,乙醚溶液比正己烷/氯仿(10∶1)混合溶液提取效率要高,正己烷/氯仿(10∶1)混合溶液對麝香酮提取效果較差,所以最終選擇乙醚萃取法作為處理血樣方法。綜上所述,本研究建立了一種快速篩選中藥復(fù)方麝香保心丸中揮發(fā)性入血成分的方法,麝香保心丸藥效物質(zhì)得以最大程度闡釋,這些化合物在機(jī)體的作用靶點(diǎn)和信息調(diào)控機(jī)制將是今后深入研究的重點(diǎn)。通過學(xué)科間的交叉融合,尤其是生物信息學(xué)和生物色譜技術(shù)等現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的的應(yīng)用有利于揭示中藥藥效物質(zhì)對機(jī)體的調(diào)控機(jī)理,展現(xiàn)中藥復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)協(xié)同作用的特點(diǎn),為中藥復(fù)方現(xiàn)代化研究提供可靠技術(shù)手段。

    [1]羅心平.麝香保心丸對大鼠心肌梗塞后左室膠原改建影響的研究[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,1998,4(7):20.

    [2]李勇,羅心平,范維琥,等.麝香保心丸對兔動脈壁一氧化氮代謝的影響[J].中國急救醫(yī)學(xué),1999,19(8):451.

    [3]王學(xué)忠,章萍,王岳松,等.基質(zhì)金屬蛋白酶-2在DHR心臟中的表達(dá)及麝香保心丸的影響[J].中國中醫(yī)急癥,2006,15 (8):893.

    [4]于榕,史念青,魯映青.麝香保心丸對家兔心肌梗死的作用及機(jī)制[J].中國藥理學(xué)會,2000,17(3):1.

    [5]Lv YH,Zhang X,Liang X,et al.Characterization of the constituents in rat biological fluids after oral administration of Fufang Danshen tablets by ultra-performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight mass spectrometry[J].J Pharm Biomed A-nal,2010,52(11):155.

    [6]Wang SP,Liu L,Wang LL,et al.Screening and analysis of the multiple absorbed bioactive components and metabolites in rat plasma after oral administration of Jitai tablets by high-performance liquid chromatography/diode-array detection coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry[J].Rapid Commun Mass Spectrom,2010,24(16):1641.

    [7]Hu YM,Wang YT,Stephen CW,et al.Identification of the major chemical constituents and their metabolites in rat plasma and various organs after oral administration of effective Erxian Decoction (EXD)fraction by liquid chromatography mass spectrometry[J].Biomed Chromatogr,2010,24(22):479.

    [8]Jiang P,Liu RH,Dou SS,et al.Analysis of the constituents in rat plasma after oral administration of Shexiang Baoxin pill by HPLCESI-MS/MS[J].Biomed Chromatogr,2009,23(17):1333.

    [9]Liao BC,Hsieh CW,Liu YC,et al.Cinnamaldehyde inhibits the tumor necrosis factor-α-induced expression of cell adhesion molecules in endothelial cells by suppressing NF-κB activation: Effects upon IκB and Nrf2[J].Toxicol Appl Pharmacol,2008,229(2):161.

    [10]Huang JQ,Wang SW,Luo XX,et al.Cinnamaldehyde reduction of platelet aggregation and thrombosis in rodents[J].Thromb Res,2007,119(3):337.

    [11]何秀娟,李萍,邱全瑛,等.麝香酮抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞與中性粒細(xì)胞黏附及其表面ICAM-1、VCAM-1和CD44表達(dá)[J].中國免疫學(xué)雜志,2006,22(2):148.

    [12]江文德,徐端正,胡國鈞,等.冠心蘇合丸的藥理研究及其簡化制劑-蘇冰滴丸的理論基礎(chǔ)[J].藥學(xué)學(xué)報,1979,14(11): 655.

    Identification of volatility components of Shexiang Baoxin pill in rat plasma by GC-MS

    GUO Li-ana,WANG Shu-pingb,XIANG Lib,JIANG Pengb,ZHANG Wei-dongb,LIU Run-huib(a.Second Military Medical University,Training Department;b.School of Pharmacy,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China)

    ObjectiveTo identify the volatile components in rat serum of Shexiang Baoxin Pill(SBP)by gas chromatography couples with mass spectrometry(GC-MS).MethodsSerum samples from control and SBP administration rats were deproteinated by adding methanol prior to gas chromatography.The separation was carried out on a Thermo TR-5 ms column(30 m×0.25 mm I.D.).The inlet temperature was set at 220℃and ion source temperature was 250℃with gradient warming.The carrier gas was N2 with a gas flow rate of 1.0 ml/min,and the injection volume was 1μl.The total analysis time was 59min.The data acquisition were performed on Xcalibur workstation.ResultsTen components including 6 components from SBP and 4 metabolites were observed from a comprehensive analysis of the chromatography of SBP solution.All the observed components were identified by using the online NIST05 library.ConclusionAn integrated method for screening volatile bioactive components in serum after oral administration of SBP was established,which provided helpful information for further mechanism research.

    Shexiang Baoxin pill;serum pharmacochemistry;coronary heart diseases;GC-MS

    R541.4

    A

    1006-0111(2012)03-0207-04

    10.3969/j.issn.1006-0111.2012.03.013

    2012-04-16

    [修回日期]2012-05-09

    郭黎安(1978-),女,講師.E-mail:gla@smmu.edu.cn.

    柳潤輝.Tel:(021)81871245,E-mail:lyliurh@126.com.

    猜你喜歡
    龍腦麝香揮發(fā)性
    The Last Ground of the Lone Loyalist: Wen Tianxiang and His Journey Northward
    鈰基催化劑在揮發(fā)性有機(jī)物催化燃燒治理中的研究進(jìn)展
    分子催化(2022年1期)2022-11-02 07:11:20
    麝香保心丸
    麝香保心丸
    揮發(fā)性有機(jī)物污染環(huán)保治理新思路的探討
    勐臘毛麝香化學(xué)成分研究
    龍腦樟去油枝葉中總多酚的酶解-超聲輔助提取及抗氧化活性
    中國林業(yè)產(chǎn)業(yè)聯(lián)合會龍腦產(chǎn)業(yè)分會成立儀式暨天然龍腦高峰論壇在吉安舉行
    吹掃捕集-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測定水中18種揮發(fā)性有機(jī)物
    Water is Found in Moon Rocks
    netflix在线观看网站| 少妇精品久久久久久久| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美日韩成人在线一区二区| 欧美激情高清一区二区三区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 黄片小视频在线播放| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲五月色婷婷综合| 又黄又粗又硬又大视频| 国产精品一区二区免费欧美| 国产单亲对白刺激| 91国产中文字幕| 久久精品国产亚洲av高清一级| av有码第一页| av在线播放免费不卡| 国产在线一区二区三区精| 亚洲精品中文字幕在线视频| 下体分泌物呈黄色| 亚洲精品av麻豆狂野| e午夜精品久久久久久久| 中亚洲国语对白在线视频| 久久久国产精品麻豆| 另类亚洲欧美激情| 丁香六月天网| 激情视频va一区二区三区| 精品国产国语对白av| 老司机午夜福利在线观看视频 | 国产午夜精品久久久久久| 午夜福利乱码中文字幕| 老司机靠b影院| 97人妻天天添夜夜摸| netflix在线观看网站| av天堂久久9| 人妻久久中文字幕网| 国产麻豆69| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲精华国产精华精| 国产av精品麻豆| 国产精品免费一区二区三区在线 | 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产免费现黄频在线看| 国产精品av久久久久免费| 国产黄色免费在线视频| 一区在线观看完整版| 日本wwww免费看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久久国产一区二区| 伦理电影免费视频| 精品国内亚洲2022精品成人 | 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 丰满饥渴人妻一区二区三| 99国产极品粉嫩在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 欧美黑人欧美精品刺激| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久热在线av| 热re99久久精品国产66热6| 高清视频免费观看一区二区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 不卡av一区二区三区| 91成人精品电影| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 在线av久久热| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产成人系列免费观看| 免费观看人在逋| 国产成人欧美在线观看 | 国产又爽黄色视频| 老司机影院毛片| 最新在线观看一区二区三区| 咕卡用的链子| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 丝袜美腿诱惑在线| 久久久久视频综合| 国产精品国产高清国产av | 电影成人av| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲精品一二三| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 黄色视频在线播放观看不卡| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲人成77777在线视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 在线观看舔阴道视频| 日本五十路高清| 欧美激情高清一区二区三区| 高清av免费在线| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲精品一二三| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产99久久九九免费精品| 中文字幕制服av| 美女高潮到喷水免费观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久热在线av| 免费在线观看影片大全网站| 欧美日本中文国产一区发布| 精品久久久久久电影网| 我要看黄色一级片免费的| 免费少妇av软件| 人成视频在线观看免费观看| 国产片内射在线| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美日韩福利视频一区二区| 91九色精品人成在线观看| 亚洲第一av免费看| 在线看a的网站| 成人18禁在线播放| 动漫黄色视频在线观看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产一区二区在线观看av| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产淫语在线视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久精品国产a三级三级三级| 性色av乱码一区二区三区2| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 777久久人妻少妇嫩草av网站| kizo精华| 美女主播在线视频| netflix在线观看网站| 国产xxxxx性猛交| 日韩人妻精品一区2区三区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 老汉色∧v一级毛片| 久久久国产精品麻豆| 狂野欧美激情性xxxx| 午夜激情av网站| 99精品欧美一区二区三区四区| av福利片在线| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产不卡一卡二| 免费人妻精品一区二区三区视频| 99国产精品99久久久久| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产黄色免费在线视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲成人免费av在线播放| 亚洲av欧美aⅴ国产| 91老司机精品| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久久久久久精品吃奶| 久久人妻av系列| 在线观看www视频免费| 国产在线免费精品| 在线av久久热| 国产亚洲av高清不卡| 国产在线免费精品| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久国产精品麻豆| 成人三级做爰电影| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久久国产一区二区| 妹子高潮喷水视频| 成在线人永久免费视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 在线观看www视频免费| 免费高清在线观看日韩| 国产人伦9x9x在线观看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产免费福利视频在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 涩涩av久久男人的天堂| 久久精品91无色码中文字幕| 丁香六月欧美| 精品一区二区三卡| 国产黄频视频在线观看| netflix在线观看网站| 一区福利在线观看| 一区在线观看完整版| 我要看黄色一级片免费的| 18禁国产床啪视频网站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产在线免费精品| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 狠狠狠狠99中文字幕| 9色porny在线观看| 亚洲成人免费av在线播放| 又大又爽又粗| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 99国产精品一区二区蜜桃av | 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久国产精品大桥未久av| 午夜久久久在线观看| 老司机靠b影院| 亚洲七黄色美女视频| 精品一区二区三区av网在线观看 | 亚洲人成电影免费在线| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 捣出白浆h1v1| 欧美成人免费av一区二区三区 | tube8黄色片| 亚洲五月婷婷丁香| 精品久久久精品久久久| 国产精品免费一区二区三区在线 | 中文字幕最新亚洲高清| 国产日韩欧美亚洲二区| 青草久久国产| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 大码成人一级视频| 不卡一级毛片| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲色图综合在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 久久久国产成人免费| 国产精品国产高清国产av | 人人妻人人澡人人看| 国产精品98久久久久久宅男小说| 老司机影院毛片| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 丁香欧美五月| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品久久久久久精品电影小说| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美中文综合在线视频| 99久久人妻综合| 久久精品成人免费网站| 91九色精品人成在线观看| 久久av网站| 777米奇影视久久| 黄色 视频免费看| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 男女无遮挡免费网站观看| 精品国产乱码久久久久久小说| av免费在线观看网站| 免费高清在线观看日韩| 我的亚洲天堂| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 制服诱惑二区| 日日夜夜操网爽| 在线 av 中文字幕| 青青草视频在线视频观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| h视频一区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲第一av免费看| 大型av网站在线播放| 最新在线观看一区二区三区| 激情在线观看视频在线高清 | a级片在线免费高清观看视频| 后天国语完整版免费观看| 色综合婷婷激情| 男女午夜视频在线观看| 老司机影院毛片| 亚洲综合色网址| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲av电影在线进入| 欧美成人免费av一区二区三区 | 女性被躁到高潮视频| av视频免费观看在线观看| 免费看十八禁软件| 我的亚洲天堂| 午夜福利视频在线观看免费| 久久免费观看电影| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美激情久久久久久爽电影 | 宅男免费午夜| 男女边摸边吃奶| 欧美一级毛片孕妇| 99国产精品一区二区三区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产成人系列免费观看| 国产精品av久久久久免费| cao死你这个sao货| 香蕉国产在线看| 人妻久久中文字幕网| 日日夜夜操网爽| 大型黄色视频在线免费观看| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美精品一区二区免费开放| 午夜免费鲁丝| 啦啦啦在线免费观看视频4| 女性被躁到高潮视频| 色在线成人网| 女性生殖器流出的白浆| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产一区二区 视频在线| 国产精品一区二区精品视频观看| 人妻 亚洲 视频| 99riav亚洲国产免费| 欧美国产精品一级二级三级| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲,欧美精品.| 少妇粗大呻吟视频| 99re6热这里在线精品视频| 人人妻人人澡人人看| 免费日韩欧美在线观看| 丝袜喷水一区| 久久精品91无色码中文字幕| 丰满迷人的少妇在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 在线天堂中文资源库| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久精品国产a三级三级三级| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 桃花免费在线播放| 午夜免费鲁丝| 亚洲全国av大片| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产单亲对白刺激| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 久久久久久久大尺度免费视频| 天堂动漫精品| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 宅男免费午夜| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 999久久久国产精品视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产单亲对白刺激| 免费日韩欧美在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 男男h啪啪无遮挡| 啦啦啦 在线观看视频| 天堂8中文在线网| 国产伦理片在线播放av一区| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 国产激情久久老熟女| 搡老岳熟女国产| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| av线在线观看网站| 久久这里只有精品19| 91字幕亚洲| 午夜精品久久久久久毛片777| 999久久久精品免费观看国产| 高清毛片免费观看视频网站 | 亚洲情色 制服丝袜| 宅男免费午夜| 国产精品一区二区免费欧美| 高清视频免费观看一区二区| 色视频在线一区二区三区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 另类精品久久| 中文欧美无线码| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲七黄色美女视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产片内射在线| 国产xxxxx性猛交| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产91精品成人一区二区三区 | 97人妻天天添夜夜摸| 成在线人永久免费视频| 国产av国产精品国产| 99国产极品粉嫩在线观看| 久9热在线精品视频| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲黑人精品在线| 免费日韩欧美在线观看| 五月开心婷婷网| 亚洲国产中文字幕在线视频| 丝袜人妻中文字幕| 无限看片的www在线观看| 久久久国产精品麻豆| av天堂久久9| 久久亚洲精品不卡| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 99九九在线精品视频| 高清视频免费观看一区二区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 手机成人av网站| 欧美黄色片欧美黄色片| 女警被强在线播放| 九色亚洲精品在线播放| 深夜精品福利| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 女性被躁到高潮视频| 国产成人精品在线电影| 久久久久精品国产欧美久久久| 一个人免费看片子| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 老司机深夜福利视频在线观看| 另类亚洲欧美激情| 高清在线国产一区| 国产精品亚洲一级av第二区| 日韩三级视频一区二区三区| 高清在线国产一区| 在线观看一区二区三区激情| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产精品影院久久| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 亚洲色图综合在线观看| 美女午夜性视频免费| 热99re8久久精品国产| 国产成人免费无遮挡视频| 久久狼人影院| 精品熟女少妇八av免费久了| 热99国产精品久久久久久7| 欧美黑人欧美精品刺激| 两人在一起打扑克的视频| 美女国产高潮福利片在线看| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产精品免费大片| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产亚洲欧美在线一区二区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 18禁美女被吸乳视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 首页视频小说图片口味搜索| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 成人黄色视频免费在线看| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美黄色淫秽网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 国产精品久久久久久精品古装| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 最近最新中文字幕大全免费视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 制服诱惑二区| 亚洲精品在线观看二区| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 久久人人97超碰香蕉20202| 99香蕉大伊视频| 热re99久久精品国产66热6| 成人免费观看视频高清| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产一区二区三区综合在线观看| 99久久国产精品久久久| 国产极品粉嫩免费观看在线| 美国免费a级毛片| 99在线人妻在线中文字幕 | 少妇的丰满在线观看| 亚洲美女黄片视频| 人人妻人人澡人人看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久精品国产a三级三级三级| 国产一区二区在线观看av| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 精品国产一区二区久久| 国产高清视频在线播放一区| 操出白浆在线播放| 成人国产一区最新在线观看| 久久久国产成人免费| 欧美 日韩 精品 国产| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲全国av大片| 一进一出抽搐动态| 自线自在国产av| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 男人舔女人的私密视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 大片电影免费在线观看免费| 男人舔女人的私密视频| 无人区码免费观看不卡 | 国产成人av教育| 国产在线一区二区三区精| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产在线一区二区三区精| 国产麻豆69| 新久久久久国产一级毛片| 无人区码免费观看不卡 | 国产97色在线日韩免费| 欧美av亚洲av综合av国产av| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲精品国产一区二区精华液| 精品国产一区二区三区四区第35| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 黄频高清免费视频| 国产99久久九九免费精品| 黄色视频不卡| 精品少妇内射三级| 免费高清在线观看日韩| 黑人操中国人逼视频| 女人久久www免费人成看片| 热re99久久国产66热| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 99九九在线精品视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 交换朋友夫妻互换小说| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久精品国产亚洲av高清一级| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 极品教师在线免费播放| 真人做人爱边吃奶动态| 午夜福利视频在线观看免费| 两人在一起打扑克的视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 桃花免费在线播放| 97在线人人人人妻| 亚洲国产av新网站| 12—13女人毛片做爰片一| 最黄视频免费看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 精品国产乱码久久久久久小说| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 免费不卡黄色视频| 国产男靠女视频免费网站| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日本五十路高清| 日韩中文字幕视频在线看片| videos熟女内射| 亚洲成国产人片在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 午夜激情久久久久久久| 国产主播在线观看一区二区| 午夜成年电影在线免费观看| h视频一区二区三区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 日本黄色日本黄色录像| 黑人操中国人逼视频| 亚洲av日韩在线播放| 水蜜桃什么品种好| 最新的欧美精品一区二区| 妹子高潮喷水视频| 操出白浆在线播放| 国产日韩欧美亚洲二区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲第一青青草原| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 大陆偷拍与自拍| 高清欧美精品videossex| 日韩欧美免费精品| 老司机亚洲免费影院| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲七黄色美女视频| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| tocl精华| 在线观看www视频免费| 制服诱惑二区| 自线自在国产av| 性少妇av在线| 亚洲伊人色综图| 久久久久视频综合| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 超色免费av| 亚洲欧美激情在线| 在线观看免费午夜福利视频| 新久久久久国产一级毛片| 人妻久久中文字幕网| 国产一卡二卡三卡精品| 国产在线精品亚洲第一网站| 啦啦啦 在线观看视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产亚洲av高清不卡| 国产熟女午夜一区二区三区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲人成伊人成综合网2020| 波多野结衣av一区二区av| 老司机福利观看| 日韩视频在线欧美| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产成人精品在线电影| 激情在线观看视频在线高清 | 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 女警被强在线播放| 十八禁高潮呻吟视频| 91麻豆av在线| 人妻 亚洲 视频| 日本av手机在线免费观看| 免费高清在线观看日韩| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 久久精品成人免费网站| 亚洲精品在线美女| 午夜精品久久久久久毛片777| 十八禁高潮呻吟视频| 国产亚洲欧美精品永久| 一进一出好大好爽视频| 黄色a级毛片大全视频| 视频区欧美日本亚洲| 热99国产精品久久久久久7| 男女边摸边吃奶| 飞空精品影院首页| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产97色在线日韩免费| h视频一区二区三区| av天堂久久9| 亚洲久久久国产精品| 脱女人内裤的视频| 女人久久www免费人成看片| 欧美乱码精品一区二区三区| 一级片免费观看大全| 亚洲国产欧美日韩在线播放|