五種檢測(cè)淋球菌方法的比較

顏俊青，邢俊，王丹丹

(海南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南?？?70102)

五種檢測(cè)淋球菌方法的比較

顏俊青，邢俊，王丹丹

(海南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南?？?70102)

目的探討5種檢測(cè)方法對(duì)淋球菌的檢出率及其影響因素，為臨床淋球菌性尿道炎、陰道炎的診斷提供檢測(cè)方法上的參考。方法用直接涂片法、快速檢查試紙片法、淋球菌培養(yǎng)法、SPA協(xié)同凝集法、金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法分別對(duì)160份樣本進(jìn)行淋球菌檢測(cè)。結(jié)果以淋球菌培養(yǎng)法為檢測(cè)“金標(biāo)準(zhǔn)”，直接涂片法敏感性和特異性分別為72%和63%、快速檢查試紙片法為79%和68%、SPA協(xié)同凝集法為93%和71%、金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法為95%和96%。結(jié)論從各方面因素(如快速性、特異性及敏感性等)考慮，SPA協(xié)同凝集法及金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法適合作為門診的常規(guī)檢查方法。

淋球菌；分泌物；檢測(cè)方法；敏感性

淋球菌是引起尿道、陰道感染的常見菌，正確檢測(cè)淋球菌，是診斷和治療淋球菌性尿道炎、陰道炎的關(guān)鍵。幾年來，我們使用過的檢測(cè)方法有多種，包括直接涂片法、淋病快速檢查試紙片法、淋球菌培養(yǎng)法、SPA協(xié)同凝集法及金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法。5種方法都有其各自的優(yōu)缺點(diǎn)，從2010年4月至2011年10月，我們同時(shí)用5種方法分別對(duì)160例疑似淋球菌性尿道炎陰道炎患者的分泌物作比較性檢驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料采集160例門診疑似患者的尿道或陰道分泌物，其中男108例，女52例，同時(shí)抽取靜脈血2 ml用于金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)。

1.2 試劑革蘭染色劑由深圳貝索公司提供(生產(chǎn)批號(hào)：0411061)，淋球菌快速檢查試紙片購自桂林中輝生物技術(shù)有限公司(生產(chǎn)批號(hào)：2010030101)，淋球菌選擇培養(yǎng)基由廣東省江門市凱林生物公司生產(chǎn)(生產(chǎn)批號(hào)：100207)。SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)試劑盒由白求恩醫(yī)科大學(xué)地方病研究所生產(chǎn)(生產(chǎn)批號(hào)：2010030909)。金標(biāo)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)試劑盒由福建三明市藍(lán)波生物技術(shù)研究所生產(chǎn)(生產(chǎn)批號(hào)：201002011)。

1.3 方法

1.3.1 直接涂片法①將分泌物厚薄適中地制成涂片，待涂片自然干燥后固定；②加結(jié)晶紫染液1 min，清水沖洗；③加碘液1 min，水洗；④加脫色液，不時(shí)搖動(dòng)30 s，至無紫色脫落為止，水洗；⑤加復(fù)染液30 s水洗；⑥待干后用油鏡尋找革蘭氏陰性雙球菌。

1.3.2 快速檢查試紙片法用潔凈棉簽將分泌物(如分泌物太稠，可先用生理鹽水浸濕棉簽后再取)涂于桔紅色的試紙片，也可用試紙片直接粘取分泌物進(jìn)行檢測(cè)。粘涂分泌物后10～20 s，即可與比色表進(jìn)行比較，試紙片顏色在陰性范圍，表示非淋菌感染，顏色在陽性范圍，表示可能有淋球菌感染。

1.3.3 淋球菌培養(yǎng)法將分泌物均勻涂布于培養(yǎng)基上，置燭缸(含5%～10%CO2環(huán)境)37℃溫箱培養(yǎng)24～48 h。選擇圓形、凸起、濕潤、光滑、半透明或灰白色、有粘性的菌落制作成薄片。革蘭染色，油鏡尋找革蘭陰性雙球菌。同時(shí)進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)，如氧化酶反應(yīng)呈陽性，再加上菌體、菌落形態(tài)等符合者，基本上可判斷為淋球菌。必要時(shí)，可進(jìn)一步做生化鑒定。

1.3.4 SAP協(xié)同凝集試驗(yàn)取1滴生理鹽水于潔凈玻片上，與待檢標(biāo)本混合，或用浸有濕鹽水的棉簽取分泌物點(diǎn)于玻片上，加1滴試劑，用玻片角輕輕攪拌混勻，放置1～3 min，呈現(xiàn)肉眼可見凝集顆粒、液體透明者為陽性，2 min內(nèi)無肉眼可見之凝集顆粒為陰性。

1.3.5 金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法①加試劑A2滴于反應(yīng)板孔中，待液體充分吸入；②用吸管加樣(血清用生理鹽水作4倍稀釋)0.15 ml(4滴)于反應(yīng)板孔中，待液體充分吸入；③去除藍(lán)色過濾蓋；④加試劑B3滴于反應(yīng)板孔中，待液體吸入；⑤后觀察結(jié)果；⑥結(jié)果判斷：孔中央有紅色圓斑者為陽性，無紅色圓斑者為陰性。

2 結(jié)果

以淋球菌培養(yǎng)法為“金標(biāo)準(zhǔn)”，在160例疑似患者樣本中檢出淋球菌陽性樣本128例，同時(shí)比較其他4種方法的檢出敏感性和特異性。見表1。

表1 4種檢測(cè)方法敏感性和特異性比較(%)

3 討論

本研究結(jié)果顯示，檢測(cè)的敏感性由低到高依次是：直接涂片法、快速檢查試紙片法、SPA協(xié)同凝集法、金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法、淋球菌培養(yǎng)法。5種方法中，直接涂片法的敏感性最低(72%)，與韓景銀等[1]報(bào)道的結(jié)果(68%)相近。其主要原因可能是部分患者正在治療或曾經(jīng)治療過，或治療不當(dāng)已轉(zhuǎn)變?yōu)槁匝装Y，致使分泌物中淋球菌數(shù)大大減少所造成。其次，女性分泌物中雜菌過多也產(chǎn)生一定的影響。有資料表明，在男性患者中敏感性為90%，女性為50%～60%，因此，世界衛(wèi)生組織推薦用培養(yǎng)法檢查女性患者[2]。

快速檢查試紙片法最大的優(yōu)點(diǎn)就是“快速”(10～20 s)[3]，該方法利用產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的淋球菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶，破壞青霉素中的β-酰胺環(huán)形成青霉噻唑。但是β-內(nèi)酰胺酶并非淋球菌所獨(dú)有，能引起泌尿系感染的大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌等，也可以產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶[4]，因此該法缺乏特異性。即使試紙顏色在陽性范圍，也只表示可能感染淋球菌，需進(jìn)一步作確證試驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)所檢測(cè)敏感性為79%，與常同潔[5]所報(bào)道的83%相似。

SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)，是用已知抗體來檢測(cè)未知抗原的一種免疫反應(yīng)。由于有特異性標(biāo)記的葡萄球A蛋白(SPA)的介導(dǎo)，從而使反應(yīng)的敏感度顯著提高。該法除具有特異性強(qiáng)、敏感度高的特點(diǎn)外，還有操作簡便、不受雜菌干擾，對(duì)初期感染(尤其是女性)患者的診斷該法不失為一種可靠的檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)所測(cè)敏感性達(dá)93%，與楊勤德等[6]所報(bào)道的檢測(cè)結(jié)果(92%)基本相同，但是對(duì)菌量太少的慢性患者的診斷則不如金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法。

金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法，其反應(yīng)原理是：斑點(diǎn)反應(yīng)板上的固相淋球菌抗原(人工合成多肽)特異地與血清中抗淋球菌抗體(IgG或IgM)結(jié)合形成復(fù)合物，膠體金標(biāo)記的抗人IgG紅色圓斑。該法與SPA協(xié)同凝集法雖然都是一種特異性很強(qiáng)的免疫學(xué)反應(yīng)，但不同的是，該法是用已知抗原檢測(cè)未知抗體，而且使用膠體金做標(biāo)記以提高反應(yīng)的靈敏度。由于該法檢測(cè)的對(duì)象是血清中的抗淋球菌抗體，只有在抗體產(chǎn)生之后且達(dá)到一定的滴度方能出現(xiàn)陽性反應(yīng)。所以該法對(duì)初期感染的診斷不如SPA協(xié)同凝集法敏感。本實(shí)驗(yàn)所檢測(cè)敏感性達(dá)到95%，較馬遠(yuǎn)方等[7]所報(bào)道的87%為高，這可能跟所選病例數(shù)及地域差異有關(guān)。

淋球菌培養(yǎng)法，目前國外推薦選擇培養(yǎng)基有改良的TM培養(yǎng)基和NYG培養(yǎng)基。國內(nèi)采用巧克力瓊脂或血瓊脂培養(yǎng)基，均含有抗生素，可抑制許多其他細(xì)菌生長，文獻(xiàn)報(bào)道，該法培養(yǎng)敏感性男性為80%～95%，女性為80%～90%[8]，與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果較接近。淋球菌培養(yǎng)法的檢出率雖然比較高，但操作較為繁雜，耗時(shí)也較多，不利于門診快速診斷。

總之，從快速性、敏感性及特異性等方面綜合考慮，我們主張以SPA協(xié)同凝集法及金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法作為門診的常規(guī)方法，以直接涂片法及淋球菌培養(yǎng)法作為協(xié)助方法。

[1]韓景銀,魏麗華,王玉英,等.直接涂片法檢查淋球菌技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室控制[J].陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn),2004,7(1)：63.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].南京：東南大學(xué)出版社,2004：459.

[3]吳志華.現(xiàn)代性病學(xué)[M].廣州：廣東人民出版社,2006：98-117.

[4]呂火祥,劉建棟,沈蓓瓊.全自動(dòng)細(xì)菌分析系統(tǒng)在檢測(cè)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶細(xì)菌中的臨床應(yīng)用[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,1999,22(5)：284-286.

[5]常同潔.淋病快速檢查試紙片臨床使用觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,1996,32(6)：18.

[6]楊勤德,張玉芳,李新忠.SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)快速檢測(cè)淋球菌[J].臨床薈萃,1997,(18)：848.

[7]馬遠(yuǎn)方,孫會(huì)升.免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)淋球菌抗原的研究[J].中華皮膚科雜志,1992,25(5)：309-310.

[8]王振勇,洪為松,楊勝.聚合酶鏈反應(yīng)與淋球菌培養(yǎng)法檢測(cè)淋病奈瑟茵的比較研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志,2005,4 (4)：245-246.

R446.5

B

1003—6350（2012）18—084—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.18.040

2012-06-11)

顏俊青(1973—)，男，海南省萬寧市人，主管檢驗(yàn)師，本科。