分析前處理對(duì)比濁法凝血儀檢測(cè)結(jié)果的影響

盧美紅，景蓉蓉

（南通大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇南通226001）

分析前處理對(duì)比濁法凝血儀檢測(cè)結(jié)果的影響

盧美紅，景蓉蓉

（南通大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇南通226001）

目的研究不同分析前處理方法對(duì)比濁法凝血儀檢測(cè)結(jié)果的影響。方法將乳糜血20份、健康人血20份，分別用常規(guī)法、高速離心法和手工法進(jìn)行PT、APTT檢測(cè)；將溶血標(biāo)本21份、血量不足標(biāo)本30份和重新補(bǔ)抽來(lái)的51份標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行PT、APTT檢測(cè)。結(jié)果健康人標(biāo)本常規(guī)法、高速離心法、手工法檢測(cè)的PT，APTT結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。而乳糜血標(biāo)本常規(guī)法檢測(cè)PT、APTT結(jié)果高，甚至檢測(cè)不出，經(jīng)高速離心處理后結(jié)果與手工法比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；溶血、血量不足等問(wèn)題標(biāo)本的PT、APTT結(jié)果與重新采血后標(biāo)本的結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），特別是血量不足時(shí)APTT明顯延長(zhǎng)。結(jié)論乳糜血、溶血、血量不足等問(wèn)題標(biāo)本大大影響了光電比濁法凝血儀檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，分析前標(biāo)本的處理是保證其檢測(cè)結(jié)果可靠性的一個(gè)重要因素。

血漿凝血酶原時(shí)間；活化部分凝血活酶時(shí)間；分析前處理；乳糜；溶血；血量不足

凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APPT)是臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查項(xiàng)目，它們反映內(nèi)、外源性凝血因子是否異常，主要用于手術(shù)前檢查、血栓病治療和彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)治療抗凝劑使用的監(jiān)測(cè)等。手工測(cè)定法為經(jīng)典方法，但操作程序復(fù)雜，效率低，不能適應(yīng)于大醫(yī)院大批量標(biāo)本的檢測(cè)，而且人為主觀因素對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較大。我科使用的Sysmex CA7000血液凝固分析儀具有測(cè)定成本低速度快、對(duì)正常外觀標(biāo)本的測(cè)定準(zhǔn)確度和精密度高等優(yōu)點(diǎn)，得到廣泛使用，是解決大批量標(biāo)本測(cè)定的關(guān)鍵手段。其原理為：光電比濁法即當(dāng)一束光(光源鹵素?zé)?通過(guò)樣品杯，會(huì)發(fā)生透射和散射，樣品杯中的血漿在凝固過(guò)程中，纖維蛋白原逐漸轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，其理學(xué)性狀發(fā)生改變，導(dǎo)致透射光和散射光強(qiáng)度發(fā)生改變，由此判斷凝固終點(diǎn)[1]。由于許多凝血因子是具有生物活性的蛋白質(zhì)，極易失活，而凝血過(guò)程又是一個(gè)相當(dāng)復(fù)雜的生理病理過(guò)程，其測(cè)定影響因素比較多，其中標(biāo)本的影響是一個(gè)重要的因素，如乳糜血、溶血、血量不足、標(biāo)本未及時(shí)送檢等問(wèn)題大大影響了結(jié)果的準(zhǔn)確性。在臨床檢測(cè)中經(jīng)常會(huì)遇到此類(lèi)標(biāo)本，嚴(yán)重干擾了臨床醫(yī)師及時(shí)準(zhǔn)確判斷，從而延誤最佳治療時(shí)間，可見(jiàn)樣本分析前處理是保證檢測(cè)可靠性的一個(gè)重要方面。本人對(duì)幾種影響因素和處理方法分別進(jìn)行了探討。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑Sysmex CA7000血液凝固分析儀、TGL-16C臺(tái)式普通高速離心機(jī)，測(cè)定條件室溫20℃～25℃，濕度＜80%，測(cè)定時(shí)嚴(yán)格進(jìn)行質(zhì)量控制。試劑、質(zhì)控品均為Sysmex公司提供。

1.2 標(biāo)本來(lái)源健康血漿對(duì)照組：隨機(jī)收集我院2010-2011年住院患者非乳糜標(biāo)本20份，排除心臟、腎臟、肝臟疾病和口服抗凝藥物。乳糜血血漿組：20份乳糜血來(lái)自我院2010-2011年住院患者，排除心臟、腎臟、肝臟疾病和口服抗凝藥物。按外觀將標(biāo)本分為輕中度乳糜、重度乳糜，分別為15份、5份。溶血、血量不足組：收集我院2010年12月至2011年6月住院送檢的嚴(yán)重溶血標(biāo)本21份，血量不足標(biāo)本30份。

1.3 方法

1.3.1 乳糜血處理的方法將健康血漿對(duì)照組、乳糜血血漿組標(biāo)本分別用常規(guī)法、手工法和高速離心法進(jìn)行檢測(cè)。常規(guī)法：將健康人血漿組、乳糜血漿組，常規(guī)離心3 000 r/min，15 min后立即在Sysmex CA7000血液凝固分析儀上檢測(cè)PT、APTT。手工法：常規(guī)法剩余的血漿用手工法測(cè)定血漿中的PT、APTT重復(fù)測(cè)定2～3次，取其平均值。高速離心法：所剩余的血漿用高速離心專(zhuān)用塑料管密封后以15 000 r/min離心10 min后，用注射器抽取下層清亮血漿(即去乳糜血漿)在CA7000上檢測(cè)PT、APTT值。

1.3.2 溶血、血量不足的處理方法采用Sysmex CA7000血液凝固分析儀檢測(cè)PT、APTT值，對(duì)51份標(biāo)本進(jìn)行再次抽血復(fù)檢，將先后兩次結(jié)果進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0軟件，采用配對(duì)t檢驗(yàn)分析。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳糜血的處理結(jié)果健康對(duì)照血漿組：20份標(biāo)本經(jīng)常規(guī)離心法、高速離心法、手工法檢測(cè)的PT、APTT結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。乳糜血血漿組：15例輕、中度乳糜血標(biāo)本常規(guī)法與高速離心及手工法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，常規(guī)法結(jié)果偏高，而高速離心和手工法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，5例高度乳糜標(biāo)本常規(guī)離心均未能檢測(cè)出PT、APTT結(jié)果，而對(duì)高速離心后去脂肪乳糜血漿檢測(cè)結(jié)果與手工法測(cè)定結(jié)果比較，PT、APTT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表1。

表1 對(duì)照組與乳糜組三種方法的檢測(cè)結(jié)果

表1 對(duì)照組與乳糜組三種方法的檢測(cè)結(jié)果

注：“-”表示未測(cè)出結(jié)果。

2.2 溶血、血量不足的處理結(jié)果溶血、血量不足等問(wèn)題標(biāo)本的PT、APTT結(jié)果與二次采血后標(biāo)本的結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，特別是血量不足時(shí)APTT明顯延長(zhǎng)。血液量略低于凝血抗凝管刻度線便有APTT延長(zhǎng)的現(xiàn)象，往往易被檢測(cè)者忽略，從而誤導(dǎo)臨床診斷用藥，見(jiàn)表2、表3。

表2 問(wèn)題標(biāo)本與重新采血標(biāo)本的PT結(jié)果

表2 問(wèn)題標(biāo)本與重新采血標(biāo)本的PT結(jié)果

表3 問(wèn)題標(biāo)本與重新采血標(biāo)本的APPT結(jié)果

表3 問(wèn)題標(biāo)本與重新采血標(biāo)本的APPT結(jié)果

3 討論

脂血標(biāo)本通常由于餐后以及某些病理狀態(tài)下血漿中含有大量的乳糜微粒時(shí)產(chǎn)生，因乳糜微粒顆粒較大能使光發(fā)生散射，而使血漿外觀混濁。一般情況下應(yīng)空腹抽血，從而消除高脂對(duì)凝血結(jié)果的影響。但有的患者采血前食用高脂飲食，出現(xiàn)了乳糜血。另外由于脂肪乳注射液是臨床上常用的營(yíng)養(yǎng)劑，對(duì)于那些對(duì)能量需求較高的消耗性疾病患者，如大面積燒傷、外傷急救、外科大手術(shù)前后及長(zhǎng)期禁食患者，提供足夠的熱量和營(yíng)養(yǎng)，對(duì)于改善患者的氮平衡具有極其重要的意義[2]。但是，患者輸注脂肪乳后抽取的血樣，會(huì)使血液標(biāo)本呈乳糜樣外觀。雖然有些學(xué)者提出采用最合適的脂肪乳輸注時(shí)間，可避免這些影響，但卻只對(duì)常規(guī)患者有效。而對(duì)于術(shù)后或急診、搶救患者的凝血功能檢測(cè)，依然困擾臨床及實(shí)驗(yàn)室。為克服乳糜血對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，本人查閱文件發(fā)現(xiàn)已有資料顯示文獻(xiàn)報(bào)道去除高脂肪乳糜的方法有標(biāo)本放置法[1]、高速離心法[3]、過(guò)濾法等。放置法需要很長(zhǎng)時(shí)間，不能及時(shí)檢測(cè)，延誤診治時(shí)機(jī)，另有報(bào)道凝血標(biāo)本存放一段時(shí)間后對(duì)結(jié)果有影響，特別是對(duì)APTT影響明顯[4]。過(guò)濾法、低溫高速離心法對(duì)設(shè)備要求較高，一般實(shí)驗(yàn)室不易裝備。常溫高速離心機(jī)價(jià)格低，實(shí)驗(yàn)室容易裝備。

溶血往往是由于針頭過(guò)細(xì)、抽入氣泡、止血帶壓迫時(shí)間過(guò)長(zhǎng)以及運(yùn)輸過(guò)程不當(dāng)?shù)仍蛟斐傻?。溶血?huì)使紅細(xì)胞內(nèi)成分釋放，激活凝血機(jī)制，對(duì)凝血結(jié)果有影響。血量不足是我室臨檢組標(biāo)本拒收的主要原因，正常情況下血液與抗凝劑(109mmol/L的枸櫞酸鈉)比例應(yīng)按9：1配比，否則會(huì)改變血漿中的鈣離子濃度而影響測(cè)定結(jié)果[5]。抽取抗凝血時(shí)一定要按比例采血，采集血后應(yīng)立即輕輕混勻，避免血液凝固[6]。嚴(yán)重溶血、血量不足等不合格的標(biāo)本應(yīng)拒收，通知臨床重新采集后再做檢測(cè)。因此檢驗(yàn)?zāi)δ茏詈每崭钩檠?，如果遇到高脂飲食、術(shù)后、急診、搶救患者等生理、病理情況下的乳糜血標(biāo)本，特別是高度乳糜血標(biāo)本時(shí)，手工法等以光電比濁法為原理的血凝儀檢測(cè)結(jié)果不可靠，建議使用簡(jiǎn)單可行的高速離心。

[1]叢玉隆,王淑娟.今日臨床檢驗(yàn)學(xué)[M].北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社,1997：196-198.

[2]任峰,孟慶忠.脂肪乳劑的臨床應(yīng)用[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用, 2009,3(8)：132.

[3]陳建蕓,石凌波,任峰.高速離心法消除高血脂對(duì)凝血酶原時(shí)間測(cè)定的影響[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2005,20(4)：401-402.

[4]馮荔,馮忠盈,曹文俊.標(biāo)本存放時(shí)間對(duì)凝血指標(biāo)影響的實(shí)驗(yàn)評(píng)估[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,25(1)：8-9.

[5]蔡煥榮,潘秀賢.PT、APTT實(shí)驗(yàn)影響因素的探討[J].海南醫(yī)學(xué), 2011,2(6)：105-106.

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Effect of pre-processing on the results of blood coagulation analyzer through turbidimetric method.

LU Mei-hong,JING Rong-rong.Department of Clinical Laboratory,the Affiliated Hospital of Nantong University,Nantong 226001,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo investigate the influence on test results with different pre-processing by applying turbidimetric method on blood coagulation analyzer.MethodsWe detected PT and APTT from 20 chylous blood specimens and 20 blood specimens of healthy individuals by routine method,high speed centrifugation and manual method,respectively.PT and APTT were also measured from 21 hemolytic specimens,30 insufficient blood volume specimens and 51 re-sampling specimens at the same time.ResultsNo statistically significant differences was found between PT and APTT results of the healthy individuals by routine method,high speed centrifugation and manual method(P＞0.05).There was also no statistically significant difference between PT and APTT results of chylous blood specimens by high speed centrifugation and manual method(P＞0.05),but the results of PT and APTT by routine method were higher.Differences in hemolytic specimens and insufficient blood volume specimens before and after re-sampling was statistically significant,and the results of APTT were significantly higher in insufficient blood volume specimens(P＜0.05).ConclusionProblems such as chylemia,haemolysis and insufficient blood significantly influenced the accuracy of blood coagulation analyzer based on turbidimetric method.Pre-processing is an important element which ensures the reliability of test.

Prothrombin time(PT);Activated partial thromboplastin time(APTT);Pre-processing;Chylous; Hemolysis;Insufficient blood

R446.11

B

1003—6350（2012）18—080—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.18.038

2012-03-01)

盧美紅（1975—），女，江蘇省南通市人，主管技師，學(xué)士。