HPLC 法測(cè)定交通心腎膠囊中鹽酸小檗堿含量

郭桂玲

（上海賽金生物醫(yī)藥有限公司 上海 201203）

中藥復(fù)方制劑交通心腎膠囊由黃連，肉桂，益智，枸杞等13味中藥材組成，具有交通心腎,補(bǔ)腎益精,精主安神的功效。用于心腎不交，肝腎陰虛所致的心悸不寧，虛煩不寐，多夢(mèng)易醒，眩暈耳鳴，腰膝酸軟，遇事善忘，五心煩熱，神疲乏力，尿頻等癥。方中黃連為君藥，其主要成分為鹽酸小檗堿。目前其含量測(cè)定采用的是薄層色譜掃描法，但其樣品處理時(shí)間較長(zhǎng)，測(cè)定方法繁瑣，重復(fù)性較差。采用HPLC法測(cè)定中成藥中的鹽酸小檗堿含量有較多文獻(xiàn)報(bào)道[1-6]，為此，本文應(yīng)用HPLC法[7]對(duì)交通心腎膠囊中鹽酸小檗堿含量測(cè)定進(jìn)行研究，以探索更加快捷，簡(jiǎn)便的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

日本島津公司LC-10 AVP高效液相色譜儀；德國(guó)賽多利斯BP211 D型電子分析天平；鹽酸小檗堿對(duì)照品，批號(hào)：110713-200208（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；交通心腎膠囊，規(guī)格：0.36 g/粒（上海××藥業(yè)股份有限公司）；甲醇、乙腈均為一級(jí)色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

ODS C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-水（3∶4，1.0 L中含磷酸二氫鉀3.4 g和十二烷基硫酸鈉1.7 g）；檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm；流速1.0 ml/min；柱溫：30 ℃；理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 對(duì)照品的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成0.05 mg/ml的對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取交通心腎膠囊內(nèi)容物適量，混勻，精密稱取0.36 g，置100 ml量瓶中，加入鹽酸-甲醇（1∶100）約95 ml，60 ℃水浴加熱15 min，取出，超聲處理30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，即得。

2.4 線性關(guān)系的考察[8]

精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液4，8，12，16，20μl依次進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以進(jìn)樣量（X）對(duì)峰面積（Y）進(jìn)行回歸，求得回歸方程為Y=4.2389 X+0.0146，r=0.999 8，表明鹽酸小檗堿在0.2~1.0 μg之間的線性關(guān)系良好(圖1)。

2.5 陰性對(duì)照試驗(yàn)

取缺黃連的群藥按其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制備陰性對(duì)照品，依樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，結(jié)果在鹽酸小檗堿對(duì)照品（圖2）吸收峰位置處無(wú)干擾（圖3）。

圖1 鹽酸小檗堿線性關(guān)系圖

圖2 鹽酸小檗堿對(duì)照品色譜圖

圖3 陰性空白樣品色譜圖

圖4 交通心腎膠囊供試品色譜圖

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10 μl重復(fù)進(jìn)樣5次，鹽酸小檗堿對(duì)照品面積平均值為2 040 518，RSD為0.30%（表1）。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液常溫放置，分別在0，0.5，1，3，6 h測(cè)定，結(jié)果平均峰面積為1 991 844，RSD為0.33%（表2）。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一樣品，精密稱取6份，按供試品溶液制備方法處理并測(cè)定，結(jié)果鹽酸小檗堿的平均含量為12.29 mg/g，RSD為2.39%（表3）。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的交通心腎膠囊樣品適量，加入鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液（0.466 mg/ml）3 ml，按供試品溶液制備方法處理并測(cè)定，計(jì)算回收率（表4）。

表1 鹽酸小檗堿精密度試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

表2 交通心腎供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

表3 交通心腎中鹽酸小檗堿重復(fù)性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

表4 鹽酸小檗堿加樣回收率測(cè)定結(jié)果

2.10 供試品溶液制備方法的比較

原標(biāo)準(zhǔn)的供試品溶液制備方法（TLC法）取交通心腎膠囊內(nèi)容物適量，混勻，精密稱取0.36 g，置100 ml量瓶中，加入鹽酸-甲醇（1∶100）約95 ml，60 ℃水浴加熱15 min，取出，超聲處理30 min，室溫放置過(guò)夜，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 μm濾膜過(guò)濾，即得。

修改后的供試品制備方法，超聲處理后無(wú)需室溫放置過(guò)夜，直接進(jìn)行下一步的樣品處理即可。

精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定5批樣品鹽酸小檗堿含量（表5）。

表5 交通心腎膠囊中鹽酸小檗堿含量測(cè)定結(jié)果（n=5）

2.11 供試品含量測(cè)定方法的比較

用新建立的HPLC方法與原標(biāo)準(zhǔn)TLC檢測(cè)方法 3批交通心腎膠囊中鹽酸小檗堿的含量分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表6。

表6 交通心腎膠囊中鹽酸小檗堿含量測(cè)定比較結(jié)果（n=3）

3 討論

本品原來(lái)所用TLC含量測(cè)定方法，在操作過(guò)程中受相對(duì)濕度、溶劑蒸汽、溫度、展距等客觀影響以及點(diǎn)樣位置及點(diǎn)樣體積等人為因素的影響，其自動(dòng)化程度及重復(fù)性方面相對(duì)不高。通過(guò)HPLC法對(duì)交通心腎膠囊中鹽酸小檗堿含量測(cè)定的研究，對(duì)其線性、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性進(jìn)行考察，結(jié)果顯示，HPLC法快速、簡(jiǎn)捷，有效的節(jié)約了操作時(shí)間，人為因素減少，自動(dòng)化程度高，與原方法所測(cè)定數(shù)據(jù)相比較，具有較好的重復(fù)性，可以代替原方法用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1] 謝敏，柯雪紅，陳彩英，等. 反相高效液相色譜法測(cè)定胃腸舒膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J]. 中藥新藥臨床藥理,2004, 15(2): 113-114.

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[3] 董鈺明, 張樹江, 陳曉峰, 等. HPLC測(cè)定天參膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J]. 蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2006, 32(2): 50-52.

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[6] 李建強(qiáng), 孫清, 劉文義. HPLC法測(cè)定清胃瀉火膠囊中鹽酸小檗堿的含量[J]. 齊魯藥事, 2006, 25(9): 530-531.

[7] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典2010版二部[M].北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010: 29-31.

[8] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典2010版二部[M].北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010: 194-195.