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    海南黎族哮喘ORMDL3基因多態(tài)性研究

    2012-09-03 02:26:20丁毅鵬何海武石慧芳姚紅霞
    海南醫(yī)學 2012年11期
    關鍵詞:黎族多態(tài)性基因型

    丁毅鵬,何海武,石慧芳,林 莉,陳 山,姚紅霞

    (1.海南省人民醫(yī)院急救中心,海南 ???570311;2.海南省農墾總醫(yī)院,海南 ???570311)

    哮喘是一種慢性支氣管炎疾病,現全世界大約有1億多人患病[1-2]。哮喘是由基因、環(huán)境因素等共同作用下導致的疾病。近年來研究表明,17號染色體基因單核苷酸多態(tài)性(SNPs)與多個民族的哮喘易感性相關,可能是另一個與哮喘基因可能為一個新的哮喘相關基因[3]。本研究選擇了該基因上兩個多態(tài)性位點rs7216389和rs11650680,分析海南黎族人群哮喘基與ORMDL基因多態(tài)性間的關系,現報道如下:

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 120例哮喘患者均為海南黎族,年齡18~72歲,平均(53.6±6.9)歲;男性62例,女性58例。2005-2007年海南黎族支氣管哮喘現況研究中確診及在當地醫(yī)院住院或門診的哮喘患者,均符合1997年中華醫(yī)學會呼吸病學分會哮喘學組支氣管哮喘的診斷標準[4]。對照組150例均為健康黎族成人,經胸部X線檢查、肺功能測定排除有肺部等呼吸系統疾病,排除心、腦及內分泌等疾病,最近2個月無感染史,1周內無使用過任何藥物。年齡20~73歲,平均(50.3±5.9)歲,男性79例,女性71例。哮喘組與對照組兩組間年齡、性別及居住環(huán)境比較差異無統計學意義,具有可比性。

    1.2 研究方法

    1.2.1 模板DNA的制備及PCR方法 基因組DNA從研究對象空腹靜脈血中用酚氯仿提取,通過聚合酶鏈反應(PCR)擴增目的DNA。ORM2DL3基因rs7216389上游引物為:5'-GGTGGGGTGGCTCACGCCTG2TAATC-3';下 游 引 物 5'-TTGTCTTT GGAAATCCAGC2CCTGCC-3';rs11650680 上 游 引物為:5'-TTACCGGGTTTACGGTTGG A-3';下游引物為:5'-TCCAACCGTAAACCCGGTAA-3'[5]。PCR總反應體積為50 μl;無菌去離子水30 μl,10×反應緩沖液5 μl,MgCl2溶液(215 mmol/L)3 μl,4×dN TP 混合物4 μl,上、下游引物各4 μl,Taq 酶2 μl,模板DNA 2 μl。PCR 循環(huán)條件:95℃預變性60 s,95℃變性50 s,58℃退火50 s,72℃延伸75 s,循環(huán)30次;72℃后延伸10 min。

    1.2.2 限制性內切酶酶切及基因型的鑒定 反應總體積25 μl,無菌去離子水10 μl,Buffer G反應緩沖液5 μl,BSA(10g/L)(Promega 公司)2 μl,限制性內切酶NspⅠ10 IU,37℃水浴14 h過夜。個體DNA樣本經PCR擴增后以2%瓊脂糖凝膠進行電泳,溴化乙錠染色,在紫外燈下觀察結果。

    1.2.3 rs7216389和rs11650680位點基因型相關性分析 按照基因型的不同對rs7216389所有研究對象分為TT基因型、TC基因型和CC基因型和rs11650680所有研究對象分為CC基因型、CT基因型和TT基因型進行統計。

    1.3 統計學方法 采用SPSS13.0軟件對數據進行分析,樣本數據用均數±標準差(±s)表示,率間的比較采用χ2檢驗方法進行,相關性分析采用Spearman分析,P<0.05為差異有統計學意義。

    2 結 果

    2.1 PCR反應產物及酶切產物結果判定 從圖1可見,ORMDL3基因rs7216389位點CC型PCR反應產物片段長度約為520 bp,TT型約為320 bp和 280 bp,TC 型 為 520 bp、320 bp和 280 bp;ORMDL3基因rs11650680位點CC型PCR反應產物片段長度約為600 bp,TT型約為250 bp和180 bp,TC型為600 bp、250 bp和180 bp。

    圖1 PCR反應產物及酶切產物結果

    2.2 ORMDL3基因rs7216389位點基因型分布 從表1可見,rs7216389位點基因型在哮喘組與對照組分布有差異,其中以TT型差異具有統計學意義(P<0.05)。經spearman分析,TT基因型與哮喘呈正相關(r=0.775,P<0.05)。

    表1 rs7216389位點基因型分布[例(%)]

    2.3 ORMDL3基因rs11650680位點基因型分布 從表2可見,rs11650680位點基因型在哮喘組與對照組分布有差異,其中以TT型和CC型具有統計學意義(P<0.05)。經spearman分析,TT和CC基因型與哮喘呈正相關(r分別為0.674和0.853,P均<0.05)。

    表2 RMDL3基因rs11650680位點基因型分布[例(%)]

    3 討論

    ORMDL基因是2002年在科學家對色素性視網膜炎進行基因測序時發(fā)現的,屬于一種全稱為ORM1-like gene family的新基因家族。該家族可在酵母、脊椎動物等中表達,而在人類中,其由3個成員基因(ORMDL1、ORMDL2和ORMDL3)組成。ORMDL基因家族非常保守,人類ORMDL同系物可以使酵母突變體恢復功能[4]。ORMDL基因,尤其是ORMDL3基因已被多項研究證明其與哮喘相關性強[6-7]。但也有研究發(fā)現,ORMDL3基因SNP在不同人種中表達可能存在一定差異。有研究發(fā)現,ORMDL3基因中的SNP rs7216389與蘇格蘭青少年哮喘易感性及病情惡化相關[8];而在Galanter等[9]的研究中,不同人種ORMDL3基因中的SNPs(rs4378650、rs12603332)與哮喘易感性相關。

    根據以上研究基礎,本實驗立足于研究海南黎族居民中ORMDL3基因SNP表達情況。研究結果顯示:黎族哮喘患者ORMDL3基因中rs7216389(TT型)和rs11650680(TT和CC)表達均與正常對照組有顯著性差異。這結果與Leung等[10]以中國南方兒童為研究對象的結果相符,該結果表明,rs7216389和rs11650680可能與海南黎族居民哮喘相關,但其確切聯系尚待進一步多中心研究加以證實。

    [1]金 哲,王金鳳,吳奎武,等.哮喘相關基因ORMDL3研究進展.醫(yī)學研究雜志[J].2010,39(7):113-115.

    [2]Beasley R.The burden of asthma with specific reference to the United States[J].JAllergy ClinImmunol.2002,109(5):S482-489.

    [3]Ober C,Hoffjan S.Asthma genetics 2006:the long and winding road to gene discovery[J].Genes Immun,2006,7:95-100.

    [4]Lars H,Miquel T,Gemma M,et al.ORMDL proteins are a conserved new family of endoplasmic reticulum membrane proteins.Genome Biology[J].2002,3(6):1-16.

    [5]孫 婧,李喬俊,徐 飛,等.兒童哮喘與ORMDL3基因多態(tài)性關系的研究[J].中國康復理論與實踐[J].2010,16(4):361-363.

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    [8]Tavendale R,Macgregor DF,Mukhopadhyay S,et al.A polymorphism controlling ORMDL3 expression is associated with asthma that is poorly controlled by current medications[J].J Allergy Clin Immuno.2008,121(4):860-863.

    [9]Galanter J,Choudhry S,Eng C,et al.ORMDL3 gene is associated with asthma in three thnically diverse populations.Am J Respir Crit Care Med.2008,177(11):1194-1200.

    [10]Leung TF,Hy SY,Ng MC,et al.Asthma and atopy are associated with chromosome 17q21 markers in Chinese children[J].Allergy,2009,64(4):621-628.

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