康艾注射液對(duì)代償期肝硬化患者多種細(xì)胞因子的影響

孫 彤 陳凱紅 裴 豪 胡敏濤

1.無(wú)錫市第五人民醫(yī)院傳染科 (江蘇無(wú)錫，214005) 2.無(wú)錫市第五人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

我們研究了康艾注射液對(duì)代償期乙型肝炎肝硬化患者血清白細(xì)胞介素 (IL)-10、IL-12、IL-18、干擾素-γ (IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的影響，以探討康艾注射液對(duì)患者免疫功能的調(diào)節(jié)作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2008年3月至2011年10月在無(wú)錫第五人民醫(yī)院傳染科住院的乙型肝炎肝硬化代償期患者60例，病例診斷符合2000年9月西安中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］。隨機(jī)分成兩組，各30例?？蛋M男22例，女8例，年齡32～63(45.10±7.81)歲。對(duì)照組男21例，女9例，年齡30～62(44.87±7.72)歲。健康人組20例為2008年5月至2011年10月于本院體檢科體檢的健康人群，年齡27～61(44.90±9.54)歲。

1.2 治療方法 對(duì)照組患者口服拉米夫定 (0.1g/次，1次/d)及阿德福韋酯膠囊 (10mg/次，1次/d)，兩種藥物均應(yīng)用24周以上。另選用甘草酸制劑、還原型谷胱甘肽，苦黃注射液等。治療組患者在上述治療基礎(chǔ)上，加用康艾注射液40ml加入10%葡萄糖注射液中靜脈點(diǎn)滴，1次/d，療程兩周。

表1 兩組患者治療前后血清5項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果比較(±s，pg/ml)

表1 兩組患者治療前后血清5項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果比較(±s，pg/ml)

與上治療時(shí)間段比較，#P＜0.05，##P＜0.01;兩組不同時(shí)段比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與健康對(duì)照組比較，△△P＜0.01

組別 TNF-α IFN-γIL-10 IL-12 IL-18艾康組(n=30)治療前 55.81±11.67△△ 60.01±12.47△△ 42.09±10.73△△ 121.57±26.49△△ 261.403 ±20.31△△治療1 周時(shí) 68.09 ±19.65△△## 78.10 ±12.48△△## 36.02 ±9.78△△# 163.87 ±38.44△△## 273.63 ±22.10△△##治療兩周時(shí) 46.36 ±12.26 88.91 ±11.41 30.26 ±8.81 183.59 ±42.21△△ 324.22 ±19.23△△對(duì)照組(n=30)治療前 56.86±11.83△△ 60.47±12.72△△ 43.12 ±15.45 123.72±19.92△△ 220.01 ±12.23△△治療1 周時(shí) 78.23 ±15.05△△##＊＊ 70.46 ±11.87△△##＊＊ 40.13 ±13.92△△ 142.08 ±23.03△△##＊＊ 257.98 ±13.59△△##＊＊治療兩周時(shí) 54.54 ±12.81△△##* 77.40 ±13.90△△#＊＊ 36.16 ±9.51△△＊ 159.59 ±14.09##＊＊ 310.84 ±34.27##*健康人組(n=20) 36.47 ±12.45 41.71 ±14.91 18.30 ±6.71 74.89 ±20.27 121.48 ±29.12

1.3 觀察指標(biāo) 所有受試者均于治療前、治療1周及治療兩周時(shí)采集外周靜脈血10 ml，盡快分離血清并分裝，-70℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)錂z。細(xì)胞因子測(cè)定采用雙抗體夾心ELISA法，用全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀讀取450nm A值，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算TNF-α、IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-18濃度 (pg/ml)，具體步驟按說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作。HBV-M采用時(shí)間分辨熒光定量分析法，試劑盒購(gòu)自上?？迫A公司。HBV DNA定量檢測(cè)采用TAG-MAN熒光定量PCR法，試劑盒購(gòu)自上?？迫A公司。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 15.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用±s表示，采用F檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組患者治療前后血清5項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

兩組患者 TNF-α、IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-18的水平于治療前比較均無(wú)顯著性意義 (P＞0.05)，且均明顯高于健康對(duì)照組 (P＜0.01);治療后兩組患者TNF-α的水平于治療1周時(shí)達(dá)到峰后下降，治療1周與治療前、治療兩周與治療1周時(shí)比較，均差異有顯著性意義 (P＜0.05);康艾組治療兩周時(shí)TNF-α的水平降至低于治療前的水平 (P＜0.05);對(duì)照組治療后TNF-α水平稍低于治療前，但前后比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05);組間比較，康艾組治療1周及兩周時(shí)的TNF-α水平均低于對(duì)照組 (P＜0.05);兩組患者IL-10水平治療后持續(xù)下降，康艾組治療前、中、后比較，差異均有顯著性意義 (P＜0.05);對(duì)照組IL-10僅治療后與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05);組間對(duì)比，治療兩周時(shí)康艾組IL-10水平低于對(duì)照組 (P＜0.05)。兩組患者 IFN-γ、IL-12、IL-18水平均于治療后迅速上升，兩組治療前、中、后三者之間比較差異均有顯著性意義 (P＜0.05);組間對(duì)比則康艾組治療1周及治療兩周時(shí)的水平均明顯高于對(duì)照組 (P＜0.05)。

2.2 毒副反應(yīng) 兩組患者在治療期間均未出現(xiàn)明顯毒副反應(yīng)。

3 討論

康艾注射液是由人參、黃芪、苦參經(jīng)現(xiàn)代科學(xué)工藝提取有效成份精制而成的新型中藥復(fù)方制劑，具有扶正固本、補(bǔ)中益氣、解毒散結(jié)之功效。人參提取物含有多種皂苷及人參多糖，人參皂苷能增強(qiáng)T細(xì)胞及B細(xì)胞功能，誘導(dǎo)IL-2、干擾素產(chǎn)生及增強(qiáng)LAK細(xì)胞及NK細(xì)胞活性［2］。黃芪在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為上品，為補(bǔ)藥之長(zhǎng)，具有“益氣補(bǔ)虛，扶正固本”之功效。黃芪含有多種氨基酸、微量元素 (硒、錳、鋅、鍺)、總黃酮 (TFA)、黃芪多糖及黃芪總苷等多種有效成分［3］，黃芪多糖能提高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能，增強(qiáng)T細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞、IL-2活性［4］?？鄥⑺靥崛∥锏闹饕煞轂檠趸鄥A，氧化苦參堿能穩(wěn)定細(xì)胞膜、激活細(xì)胞膜腺苷酸環(huán)化酶，誘導(dǎo)產(chǎn)生肝細(xì)胞微粒體藥物代謝酶、清除自由基［5］。

IFN-γ被認(rèn)為是與肝炎病情程度相關(guān)性最好的細(xì)胞因子［6］，IFN-γ主要是由Th(輔助性T細(xì)胞)1類細(xì)胞產(chǎn)生的一種重要的細(xì)胞因子，可以抑制病毒復(fù)制，直接增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷病毒感染的細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞 (CTL)介導(dǎo)的病毒感染細(xì)胞的殺傷［7，8］。IL-10是炎癥過(guò)程的一種負(fù)性調(diào)控因子，屬于Th2細(xì)胞因子，內(nèi)源性IL-10能減少肝細(xì)胞的炎性反應(yīng)及減少中性粒細(xì)胞與肝竇內(nèi)皮細(xì)胞粘附，降低局部炎癥因子活性，限制其對(duì)肝臟的毒性，減輕肝臟損害，IL-10還可通過(guò)調(diào)節(jié)粘附因子的表達(dá)，主要是通過(guò)降低它們的含量而間接保護(hù)肝臟［9］。TNF-α具有多種生物學(xué)效應(yīng)，適量TNF-α可調(diào)整機(jī)體的免疫及代謝作用，增強(qiáng)人體對(duì)入侵病毒等的抵抗力，對(duì)維持機(jī)體內(nèi)部環(huán)境的穩(wěn)定狀態(tài)及抵制各種致病因子具有重要意義，而超值濃度的TNF-α可直接殺傷正常肝細(xì)胞和HBV感染的肝細(xì)胞，TNF-α通過(guò)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的吸附，引起肝臟炎癥反應(yīng)與肝細(xì)胞及肝臟的損害。TNF-α還可通過(guò)激活磷脂酶A產(chǎn)生脂類介質(zhì)使正常肝細(xì)胞破壞，加重肝組織損傷［10］。IL-18具有促進(jìn)Th1等T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞、Mφ等免疫細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性和NK細(xì)胞、NK-T細(xì)胞的殺傷活性，增強(qiáng) CTL、NK等效應(yīng)細(xì)胞FasL表達(dá)，提高對(duì) Fas陽(yáng)性靶(肝)細(xì)胞的殺傷作用，促進(jìn)NK細(xì)胞分泌穿孔素介導(dǎo)對(duì)靶(肝)細(xì)胞的殺傷［11］。IL-12在功能上與IL-18相似，亦可誘導(dǎo)Th1等細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ［11］，可獨(dú)立地作用于 NK和 CTL細(xì)胞，倡導(dǎo)細(xì)胞毒肝臟炎性反應(yīng)，而且還具有增強(qiáng)IL-18的炎性作用的功能［12］。

本研究結(jié)果顯示：康艾組IFN-γ、IL-12、IL-18水平均高于對(duì)照組，表明康艾組患者之Th1應(yīng)答強(qiáng)于對(duì)照組;而Th2特異性細(xì)胞因子IL-10于治療后均持續(xù)下降，表明Th2應(yīng)答呈減弱傾向，治療兩周時(shí)康艾組水平低于對(duì)照組，提示對(duì)照組之Th2應(yīng)答強(qiáng)于康艾組。因艾康組Th1應(yīng)答優(yōu)于對(duì)照組，而Th2應(yīng)答弱于對(duì)照組，有助于艾康組患者病情更早康復(fù)或阻止其病情繼續(xù)加重，此結(jié)果與潘宇［13］的研究相符。

總之，在代償期肝硬化患者中應(yīng)用康艾注射液，可以促進(jìn)Th1應(yīng)答，促進(jìn)炎癥消退，使患者盡早康復(fù)或阻止病情進(jìn)一步加重。

［1］中結(jié)醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)、病毒性肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)［J］.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2001，11(1)：56-60.

［2］高志棣，王濰博，考軍，等.康艾注射液對(duì)結(jié)直腸癌術(shù)后輔助化療患者相關(guān)疲勞的防治作用 ［J］.中國(guó)中醫(yī)急癥，2010，19(2)：221-222.

［3］胡聯(lián)民，廖天華，蔡凱.康艾注射液聯(lián)合放療治療乳腺癌骨轉(zhuǎn)移30例療效觀察［J］.河北中醫(yī)，2010，32(10)：1544-1545.

［4］趙東利，張曉智，張瑩冰.康艾注射液對(duì)食管癌放療患者細(xì)胞免疫功能影響的臨床研究 ［J］.陜西醫(yī)學(xué)雜志，2005，34(12)：1509-1510.

［5］劉瑜，張蕊，呂云，等.康艾注射液對(duì)惡性腫瘤化療患者生活質(zhì)量的影響［J］.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，31(5)：43-45.

［6］肖明，管小琴.Th相關(guān)細(xì)胞因子與乙型、丙型肝炎［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)·流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊(cè)，2005，32(3)：177-180.

［7］江軍，繆曉輝，蔡雄.阿德福韋酯和拉米夫定對(duì)慢性乙型肝炎患者IFN-γ和IL-4的影響比較 ［J］.臨床肝膽病雜志，2007，23(3)：176-178.

［8］吳霜.Th1/Th2細(xì)胞相關(guān)因子對(duì)乙肝疫苗免疫效果的影響［J］.內(nèi)科，2008，3(1)：57-59.

［9］萬(wàn)裴琦，黃力毅.IL-10基因多態(tài)性在乙型肝炎發(fā)病機(jī)制中作用的研究進(jìn)展 ［J］.內(nèi)科，2007，2(3)：398-400.

［10］王西棟，張廣蘭.乙型肝炎患者血清IL-2、IL-6、IL-8和TNF-α水平研究［J］.預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇，2008，14(4)：309-310.

［11］唐寶璋，田庚善.白細(xì)胞介素18與病毒性肝炎 ［J］.中華傳染病雜志，2005，23(3)：212-214.

［12］李天一，葉衛(wèi)江，張松平.慢性重型肝炎患者血清IL-18、IL-12和IFN-γ的表達(dá)及人工肝治療 ［J］.江蘇醫(yī)藥，2008，34(5)：438-440.

［13］潘宇.Th細(xì)胞及其細(xì)胞因子與登革病毒致病機(jī)制關(guān)系的研究進(jìn)展［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)·免疫學(xué)分冊(cè)，2003，26(3)：148-151.