DNA定量分析法在惡性胸腔積液診斷中的應(yīng)用價值＊

王俊利，潘明志，楊鳳蓮，平 靜，韋葉生，常正義，滕元姬，農(nóng)樂根

（右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院:1.檢驗(yàn)科；2.《右江醫(yī)學(xué)》編輯部；3.中醫(yī)藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)室；4.病理科，廣西 百色 533000）

胸腔積液中找到腫瘤細(xì)胞是確診惡性胸腔積液的最常用方法，但當(dāng)脫落到胸腔積液的腫瘤細(xì)胞稀少、多種因素引發(fā)惡性腫瘤細(xì)胞發(fā)生破壞、分化良好的腺癌細(xì)胞與增生的間皮細(xì)胞形態(tài)混淆存在時，脫落細(xì)胞學(xué)診斷的敏感性將降低。1998年Motherby等［1］報(bào)道胸腔積液找癌細(xì)胞單次檢驗(yàn)的陽性率僅為58%。細(xì)胞DNA已逐步應(yīng)用于宮頸細(xì)胞病理學(xué)輔助診斷中，但該技術(shù)應(yīng)用于胸腔積液鑒別診斷則少有報(bào)道。本研究應(yīng)用全自動DNA定量分析技術(shù)診斷胸腔積液，并與脫落細(xì)胞學(xué)檢查進(jìn)行比較，以探討其在良、惡性胸腔積液鑒別診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院細(xì)胞室2009年10月至2010年8月胸腔積液標(biāo)本324例。男164例，女160例，中位年齡58.2歲（18～82歲），所有病例均經(jīng)組織病理學(xué)、影像學(xué)、實(shí)驗(yàn)室檢查或結(jié)合臨床明確診斷，其中惡性胸腔積液患者142例，分別為肺癌89例，肝癌18例，胃癌10例，乳腺癌9例，賁門癌6例，卵巢癌4例，胰腺癌3例，惡性胸膜間皮瘤2例，多發(fā)性骨髓瘤1例。良性胸腔積液182例，其中結(jié)核性102例，漏出液65例（肝硬化52例、尿毒癥8例、心力衰竭5例），炎癥性10例，乳糜胸2例，良性胸膜間皮瘤3例。

1.2 方法 每例胸腔積液標(biāo)本取200mL離心涂片，制成6張薄層細(xì)胞片，3張用于常規(guī)巴氏染色，3張用于Feulgen染色。

1.2.1 脫落細(xì)胞學(xué)檢查 3名細(xì)胞學(xué)診斷醫(yī)師盲法閱片判定結(jié)果。如有疑問，3名細(xì)胞病理學(xué)專家會診判定。診斷結(jié)果分為4類:（1）未見到癌細(xì)胞；（2）見到少許異型細(xì)胞；（3）見到可疑癌細(xì)胞；（4）見到癌細(xì)胞。

1.2.2 細(xì)胞DNA定量分析 采用本院細(xì)胞室的全自動細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)分析Feulgen染色涂片，對染色片中的每一個細(xì)胞核進(jìn)行掃描分析，根據(jù)每個細(xì)胞核的123個核特征參數(shù)值自動進(jìn)行分類和計(jì)數(shù)，并綜合分析。參照文獻(xiàn)［2－3］制訂結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):細(xì)胞核DNA含量以DNA指數(shù)（DNA Index，DI）表示，當(dāng)二倍體細(xì)胞DI為1，G2／M期的四倍體細(xì)胞DI為2時，DI在1.1～1.9之間 細(xì)胞數(shù)超過15%或存在3個以上DI＞2.5時診斷為惡性胸腔積液。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，率的比較應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 脫落細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果 324例胸腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，142例惡性胸腔積液檢出癌細(xì)胞患者87例，182例良性胸腔積液檢出癌細(xì)胞患者10例，細(xì)胞學(xué)檢查敏感性為61.27%，特異性為94.51%，準(zhǔn)確率為79.94%。

2.2 細(xì)胞DNA定量分析結(jié)果 182例良性胸腔積液中182例呈現(xiàn)二倍體為良性；142例惡性胸腔積液中細(xì)胞DNA定量分析后達(dá)到惡性胸腔積液診斷標(biāo)準(zhǔn)的有135例。細(xì)胞DNA定量分析檢測良、惡性胸腔積液的敏感性為95.07%，特異性為100%，準(zhǔn)確率為97.84%。

2.3 細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)與脫落細(xì)胞學(xué)診斷比較 脫落細(xì)胞學(xué)準(zhǔn)確率為79.94%，細(xì)胞DNA定量分析檢測的準(zhǔn)確率為97.84%，兩種方法的準(zhǔn)確率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝4.87，P＝0.027）。經(jīng)脫落細(xì)胞學(xué)診斷為惡性的87例胸腔積液標(biāo)本經(jīng)DNA定量分析均達(dá)到惡性診斷標(biāo)準(zhǔn)，兩者有很高的符合率。細(xì)胞學(xué)漏診的55例惡性胸腔積液標(biāo)本經(jīng)DNA定量分析法找到癌變細(xì)胞48例，經(jīng)過細(xì)胞學(xué)重復(fù)檢查有30例發(fā)現(xiàn)少數(shù)可疑癌變細(xì)胞。142例惡性胸腔積液DNA定量分析有7例（7／142，4.93%）為正常二倍體，故細(xì)胞DNA定量分析也存在一定的假陰性。

3 討 論

脫落細(xì)胞學(xué)診斷是細(xì)胞診斷醫(yī)師根據(jù)細(xì)胞形態(tài)的變化對細(xì)胞性質(zhì)作出判斷，帶有一定的主觀性。此外，如果胸腹腔積液內(nèi)存在細(xì)胞數(shù)量少、細(xì)胞形態(tài)不典型等問題時，常難以判定其良、惡性。雖然借助免疫細(xì)胞學(xué)方法可輔助診斷其良、惡性，但由于該方法敏感性不高而易出現(xiàn)誤診的問題［4－6］。

DNA是細(xì)胞生長、分化和繁殖的基礎(chǔ)，正常細(xì)胞核內(nèi)均有23對染色體。當(dāng)出現(xiàn)核增大、染色質(zhì)變粗、深染、核形態(tài)不規(guī)則等形態(tài)學(xué)改變時，提示細(xì)胞DNA的含量發(fā)生改變。絕大多數(shù)實(shí)體腫瘤細(xì)胞DNA為非整倍體，即異倍體，所以DNA異倍體細(xì)胞的出現(xiàn)可視為惡性腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志之一。另外，在細(xì)胞發(fā)生惡變過程中其核形態(tài)學(xué)改變一般要晚于細(xì)胞DNA含量的改變。惡性胸腔積液中一般都有處在分裂時期的癌細(xì)胞，即存在異倍體，因此通過細(xì)胞DNA定量分析可及早發(fā)現(xiàn)細(xì)胞是否癌變。細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)是通過檢測胸腔積液脫落細(xì)胞的核內(nèi)DNA含量來判定細(xì)胞良、惡性質(zhì)的。本研究中87例經(jīng)脫落學(xué)檢查檢測到癌細(xì)胞的惡性標(biāo)本胸腔積液，DNA定量分析均達(dá)到惡性診斷標(biāo)準(zhǔn)，兩者有很高的符合率。此外，在細(xì)胞學(xué)漏診的55例惡性胸腔積液中經(jīng)DNA定量分析法找到癌變細(xì)胞48例，經(jīng)過細(xì)胞學(xué)重復(fù)檢查有30例發(fā)現(xiàn)少數(shù)癌變細(xì)胞。故而DNA定量分析技術(shù)可快速識別胸腔積液中存在的少數(shù)惡性腫瘤細(xì)胞，其診斷結(jié)果較脫落細(xì)胞學(xué)檢查方法更客觀和準(zhǔn)確。由此可見，部分的胸腔積液癌變細(xì)胞標(biāo)本在常規(guī)的臨床細(xì)胞學(xué)檢查中往往會產(chǎn)生漏診，DNA定量分析技術(shù)在一定程度上可以減少假陰性的發(fā)生。

DNA定量分析系統(tǒng)對142例惡性胸腔積液分析，存在7例假陰性結(jié)果，經(jīng)過仔細(xì)分析原因如下:（1）其中有5例出現(xiàn)假陰性原因是胸腹腔積液中癌變細(xì)胞含量較少，同時因胸膜炎并存導(dǎo)致大量的白細(xì)胞和間皮細(xì)胞數(shù)量增加后掩蓋癌變細(xì)胞，這與吳麗娟等［7］運(yùn)用FCM 細(xì)胞DNA分析胸腹腔積液良、惡性的研究中出現(xiàn)假陰性的原因一致；（2）其中有2例出現(xiàn)假陰性原因是在實(shí)驗(yàn)操作過程中由于標(biāo)本抗凝不佳，出現(xiàn)凝塊，這2例標(biāo)本經(jīng)重新取樣并抗凝送檢后DNA定量分析檢測為陽性。

綜上所述，細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)對鑒別診斷良性及惡性胸腔積液具有很好的診斷價值，較脫落細(xì)胞學(xué)檢查更敏感和客觀。將兩種方法聯(lián)合應(yīng)用可有效地提高胸腔積液良、惡性性質(zhì)判定的準(zhǔn)確率，為臨床治療及判斷預(yù)后提供依據(jù)。

［1］Motherby H，Nadjari B，Remmerbach T，et al.Static DNA cytometry as a dignosic acid in effusion cytology:DNA aneuploidy for identification of neoplastic cells in equivocal［J］.Anal Quant Cytol Histol，1998，20（3）:162－168.

［2］Palcic B，Carner DM，MacAulay CE，et al.Oncometrics imaging corporation and xillix technologies corpration［J］.Acta Cytol，1996，40（1）:67－72.

［3］Doudkine A，MacAulay C，Poulin N，et al.Neclear texture measurements in image cytometry［J］.Pathological，1995，87（3）:286－299.

［4］王俊利，韋葉生.良惡性胸腹腔積液鑒別診斷的研究進(jìn)展［J］.右江醫(yī)學(xué)，2010，38（6）:763－765.

［5］孫小蓉，汪建.脫落細(xì)胞學(xué)診斷［M］.武漢:湖北科學(xué)技術(shù)出版社，2006:234－235.

［6］吳禮國，曾曉華，趙芝蓉.聯(lián)合檢測生存素CEA、CA125對胸腹腔積液性質(zhì)鑒別的價值［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2011，40（4）:337－338.

［7］吳麗娟，陳偉，張雪瑩，等.流式細(xì)胞術(shù)DNA分析用于良惡性胸腹腔積液鑒別診斷的回顧性研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2007，36（10）:896－898.