夏季多發(fā)病之豬附紅細(xì)胞體病研究進(jìn)展

李東春，尹春博，閻 芳，閻英海

（1.天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 300402；2.天津市獸藥飼料監(jiān)察所，天津 300402）

附紅細(xì)胞體病是一種以高熱、貧血、黃疸為主要癥狀的人畜共患病，由專性血液寄生的附紅細(xì)胞體寄生于紅細(xì)胞表面、血漿及骨髓中而引起。本病雖在人和多種畜禽及野生動(dòng)物中均有發(fā)生，但以對(duì)豬發(fā)病報(bào)道的最多。目前報(bào)道發(fā)生本病的已有30 多個(gè)國(guó)家，我國(guó)從80 年代初就開始報(bào)道豬附紅細(xì)胞體病，但當(dāng)時(shí)尚未引起足夠重視。近年來，隨著養(yǎng)豬業(yè)的不斷發(fā)展，該病的發(fā)生逐漸增多。尤其是2001 年以來對(duì)豬發(fā)生本病的報(bào)道急劇增加，本病不僅引起豬死亡，而且影響豬生長(zhǎng)發(fā)育，出欄推遲，甚至引起種豬繁殖障礙，給養(yǎng)豬業(yè)和廣大養(yǎng)豬戶帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

1 病原學(xué)

1.1 分類

附紅細(xì)胞體是一種多形態(tài)生物體，對(duì)其分類一直存有爭(zhēng)議。根據(jù)《伯吉氏鑒定細(xì)菌學(xué)》（1984 年版）的分類，附紅細(xì)胞體屬于立克次體目，無漿體科,附紅細(xì)胞體屬[1]。但近年對(duì)豬附紅細(xì)胞體16S rRNA 基因序列的分析認(rèn)為，豬附紅細(xì)胞體應(yīng)歸屬于柔膜體目支原體屬，并改名為豬嗜血支原體[2]。

1.2 形態(tài)學(xué)特征

豬附紅細(xì)胞體呈多態(tài)性，環(huán)形、卵圓形、逗點(diǎn)形或桿狀等形態(tài)不一，大小為(0.3～1.3)×(0.5～2.6) μm。 常單獨(dú)或呈鏈狀附著于紅細(xì)胞表面，也可圍繞在整個(gè)紅細(xì)胞上，還有的游離在血漿中。豬附紅細(xì)胞體在發(fā)育過程中，大小和形狀也可發(fā)生改變。處于未成熟階段的豬附紅細(xì)胞體沒有感染性。

1.3 生物學(xué)特性

豬附紅細(xì)胞體對(duì)于干燥和化學(xué)藥劑抵抗力弱，但對(duì)低溫的抵抗力強(qiáng)。一般常用消毒藥均能殺死該病原，如在0.5%石炭酸中37 ℃，3 h 就可以被殺死；但在4 ℃時(shí)可保存15 d，在冰凍凝固的血液中可存活31 d，在加了15%甘油的血清中-79 ℃可保持感染力80 d，凍干保存可存活數(shù)年。豬附紅細(xì)胞體體外培養(yǎng)條件十分苛刻，目前尚不能在非細(xì)胞培養(yǎng)基上培養(yǎng)[3]。

2 流行病學(xué)

豬附紅細(xì)胞體主要在宿主的紅細(xì)胞表面、血漿以及骨髓中生存。豬附紅細(xì)胞體的生活史至今尚不清楚，故其自然傳播途徑也不十分明確。目前認(rèn)為本病主要通過血液或含血的物質(zhì)傳播，如舔食斷尾的傷口，互相斗毆或喝被血污染的尿而發(fā)生附紅細(xì)胞體感染。本病多發(fā)于夏秋季節(jié)或多雨天氣，吸血昆蟲(虱、刺蠅、牛虻、蚊子和疥螨等)是豬附紅細(xì)胞體病的主要傳播媒介。病原體可通過胎盤垂直傳播給胎兒；交配時(shí)，公豬也可通過血污染的精液傳染給母豬；此外，如消毒不徹底的注射、去勢(shì)、打耳號(hào)等，病原體則可經(jīng)傷口傳播。此外，豬附紅細(xì)胞體病的流行與不良的飼養(yǎng)方式、氣候條件等應(yīng)激因素也有很大關(guān)系。

3 發(fā)病機(jī)理

豬附紅細(xì)胞體的細(xì)絲狀結(jié)構(gòu)可嵌入紅細(xì)胞的細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜產(chǎn)生小而深的凹陷和變形，通透性和脆性增加而發(fā)生溶血。另外，豬附紅細(xì)胞體引起的紅細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和形狀的改變，可導(dǎo)致膜上原先被遮蔽的抗原表位暴露出來或者已有抗原發(fā)生變化，引起自身免疫性溶血而導(dǎo)致貧血[4]。據(jù)E.Luwig、Hoelzle等報(bào)道，豬附紅細(xì)胞體在紅細(xì)胞上的定位蛋白為HspA1 和MSG-1。

豬附紅細(xì)胞體急性感染可導(dǎo)致嚴(yán)重的血液凝固障礙，引起出血。

豬附紅細(xì)胞體聚集在紅細(xì)胞表面，削弱了紅細(xì)胞攜帶氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力，使糖酵解增強(qiáng)，消耗血糖并產(chǎn)生大量乳酸，引起低血糖和酸中毒，從而使患豬出現(xiàn)呼吸、心跳加快和體溫升高等癥狀[5]。

4 臨床癥狀

潛伏期6～10 d，體溫可升高至40～42 ℃。根據(jù)病程長(zhǎng)短可分為3 種類型。

4.1 急性型

少見，多表現(xiàn)為突然死亡，全身紅紫，指壓不褪色，有的患豬突然癱瘓，食欲廢絕，無端嘶叫或痛苦呻吟，肌肉顫抖，四肢抽搐。死亡時(shí)口、肛門排血。病程1～3 d。

4.2 亞急性型

患豬體溫升高達(dá)39.3～42 ℃，死前體溫下降。初期精神委頓，食欲減退但飲水增加，而后食欲廢絕，飲水量明顯下降或不飲，患豬顫抖轉(zhuǎn)圈或不愿站立，離群臥地，尿少而黃。病初便秘，糞球帶有黏液或黏膜，之后腹瀉，有時(shí)便秘和腹瀉交替出現(xiàn)。后期病豬耳朵、頸下、胸前、肢下、四肢內(nèi)側(cè)等部位皮膚紅紫，指壓不褪色，有時(shí)身體各部位皮膚的紅紫連成一片，整個(gè)豬呈紅色，所以常稱為“紅皮豬”。并且毛孔出現(xiàn)淡黃色汗跡，有的病豬流涎，呼吸困難，咳嗽，眼結(jié)膜發(fā)炎。病程3～7 d，或死亡，或轉(zhuǎn)為慢性經(jīng)過。

4.3 慢性型

患豬體溫在39.5 ℃左右，食欲不佳，主要表現(xiàn)為貧血和黃疸?；钾i全身被毛粗亂無光澤，皮膚燥裂，層層脫落，但不癢。黃疸程度表現(xiàn)不一，皮膚和眼結(jié)膜呈淡黃色，有時(shí)皮膚呈現(xiàn)橘黃色。尿呈黃色，大便干如栗狀，表面帶有黑色至鮮紅色血液?；即瞬『?，新生仔豬因過度貧血而死亡；斷奶仔豬不能發(fā)揮最佳生長(zhǎng)性能；肥育豬生長(zhǎng)緩慢、出欄延遲；母豬常流產(chǎn)、死胎、不發(fā)情或發(fā)情后屢配不孕，乳頭腫大堅(jiān)硬；公豬性欲減退，精子活力減低。此時(shí)，患豬易繼發(fā)其他疾病，引起全身出現(xiàn)膿腫、潰瘍、丘疹或結(jié)節(jié)，兩眼或一側(cè)眼結(jié)膜長(zhǎng)期紅腫、流淚，有灰黃色眼屎，呼吸困難，咳嗽，腹瀉等。病程長(zhǎng)，死亡或成為僵豬。

5 剖解變化

尸體消瘦，耳廓、腹下、四肢內(nèi)側(cè)有出血性紫斑，皮下脂肪黃染，血液凝固不良、稀薄、呈櫻桃紅色。肝臟土黃色，腫大，切面多汁呈黃色。膽囊腫大，膽汁充盈、黏稠、黃染。脾臟嚴(yán)重腫大，暗黑色，質(zhì)地軟。腎包膜易剝離、外膜有散在的針尖或粟米大小的出血點(diǎn)。胃高度膨脹，胃、腸道、膀胱充血、出血。全身淋巴結(jié)充血腫脹。心包積液，心臟冠狀溝水腫。肺部無明顯變化，偶見細(xì)小壞死灶。

6 診斷方法

依據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀和剖解變化可對(duì)本病作出初步診斷，確診必須結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查，方法包括病原鏡檢、血清學(xué)方法，以及分子生物學(xué)技術(shù)等。

6.1 病原鏡檢

多以直接鏡檢為主，常采用鮮血壓片和涂片染色法。

6.1.1 鮮血壓片法

取靜脈血1 滴(可加入3.8%枸櫞酸鈉抗凝血)加到等量生理鹽水壓片鏡檢(400～1 000 倍)，見有紅細(xì)胞變形如針芒狀、鋸齒狀、菠蘿狀或不規(guī)則形狀且不停地上下抖動(dòng)，紅細(xì)胞上有圓形或棒狀附著物、或血漿中有若干小顆粒，稱鮮血壓片陽性，可初步診斷為豬附紅細(xì)胞體病。

6.1.2 鮮血涂片染色鏡檢法

取鮮血1 滴推片，干燥固定后染色，置于高倍顯微鏡下可觀察到以下情況：瑞氏染色法見紅細(xì)胞周圍及血漿中有藍(lán)色顆?；蛘酃庑晕镔|(zhì)，姬姆薩氏染色見紅細(xì)胞周圍及血漿中有紫紅色折光性顆粒，吖啶橙染色見紅細(xì)胞周圍及血漿中有黃綠色熒光物質(zhì)。此外還可進(jìn)行肝臟涂片染色鏡檢。

6.1.3 電鏡檢測(cè)

利用掃描電子顯微鏡和透射電子顯微鏡可以研究豬附紅細(xì)胞體的形態(tài)、結(jié)構(gòu)，侵襲紅細(xì)胞的方式，以及受損紅細(xì)胞的結(jié)構(gòu)形態(tài)。由于電鏡價(jià)格因素以及切片制作等操作技術(shù)的復(fù)雜性使得該法在基層普及應(yīng)用較為困難。

6.2 血清學(xué)方法

此類方法主要有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。

國(guó)內(nèi)，張守發(fā)等[6]運(yùn)用葡聚糖G200 色譜法純化豬附紅細(xì)胞體抗原，獲得了不與豬血清發(fā)生交叉反應(yīng)的、特異性抗原，用該抗原建立的ELISA 方法的敏感性、特異性、穩(wěn)定性均高于間接血凝試驗(yàn)。然而，該方法對(duì)于支原體肺炎、豬霍亂、豬大腸桿菌病和弓形蟲病鑒別性不強(qiáng)，存在交叉反應(yīng)。Hozole等[7]用豬附紅細(xì)胞體重組抗原rMSG1、rHspA1 建立了ELISA 方法，其敏感性和特異性等同或高于天然抗原ELISA。但總的來說，血清學(xué)方法難以診斷慢性感染和潛伏期患豬，靈敏性還有待進(jìn)一步提高。

6.3 分子生物學(xué)技術(shù)

用于檢測(cè)豬附紅細(xì)胞體的分子生物學(xué)技術(shù)主要包括核酸分子雜交技術(shù)和PCR方法兩大類，對(duì)后者的研究報(bào)道較多。

豬附紅細(xì)胞體的PCR 檢測(cè)技術(shù)最早由Gwaltney 于1995 年建立，其后得到較快的發(fā)展。PCR 方法具有快速、靈敏性高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，可以檢出潛伏期豬，是檢測(cè)隱性感染豬的一種較好的方法。國(guó)內(nèi)外最初多采用豬附紅細(xì)胞體的16S rRNA 基因序列作為靶序列進(jìn)行檢測(cè)[8]。由于原核微生物的16S rRNA 基因有較高同源性，基于該序列的PCR 方法特異性往往不太高，易造成假陽性結(jié)果。之后研究者又對(duì)豬附紅細(xì)胞體的其他特異性基因進(jìn)行了研究應(yīng)用，以及采用單管巢式PCR 診斷方法提高了檢測(cè)的特異性和靈敏性[9-10]。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 技術(shù)是近年來研究應(yīng)用較多的一種分子生物學(xué)技術(shù)，它實(shí)現(xiàn)了對(duì)目的基因的擴(kuò)增和結(jié)果檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行，與常規(guī)PCR 技術(shù)相比，自動(dòng)化程度、靈敏性更高，且可以對(duì)病原體定量分析。Hoelzle 等[11]于2007 年利用保守的msg1 基因建立了熒光定量PCR檢測(cè)方法，敏感性較常規(guī)PCR 方法提高了4～40 倍，特異性為96.7%。由于國(guó)內(nèi)對(duì)豬附紅細(xì)胞體尚未進(jìn)行系統(tǒng)的分子生物學(xué)分析，因此此類方法用于臨床檢測(cè)實(shí)踐還有待時(shí)日。

7 藥物治療

1）長(zhǎng)效土霉素，每千克體重0.1 mL；或附紅優(yōu)，每千克體重12 mg；或錐滅定，每千克體重0.5 mg，一次肌肉注射；或青霉素8×104IU/kg + 鏈霉素5×104IU/kg，一次肌肉注射。此外，慶大霉素和卡那霉素合用也有一定的效果。

2）貝尼爾，每千克體重7 mg，種公豬及空懷母豬、肥豬一次肌肉注射，隔日一次。

3）附紅凈，每千克體重6 mg，妊娠及哺乳母豬一次肌肉注射，嚴(yán)重者隔日加強(qiáng)一次。仔豬7 日齡肌肉注射一次(將藥液稀釋，每千克體重0.1 mL)，斷奶時(shí)再加強(qiáng)一次。

8 防控措施

1）對(duì)病豬及檢測(cè)陽性豬應(yīng)及時(shí)進(jìn)行隔離。

2）加強(qiáng)環(huán)境消毒，發(fā)病期間豬舍內(nèi)每天2 次，場(chǎng)區(qū)及道路每天1 次。

3）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，盡量減少環(huán)境應(yīng)激。保證飼料優(yōu)質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)全面，減少中途變動(dòng)配方。

4）搞好手術(shù)器械、針頭、牙鉗和耳號(hào)鉗等消毒工作，防止交叉感染。發(fā)病期間應(yīng)嚴(yán)格做到1 頭豬1 個(gè)針頭。

9 討論

1）由于痊愈豬和健康豬的鮮血也大多存在鮮血壓片陽性的現(xiàn)象，故鮮血壓片法不宜作為確診豬附紅細(xì)胞體病的主要依據(jù)。

2）據(jù)報(bào)道，單純豬附紅細(xì)胞體感染的情況下，不會(huì)對(duì)豬群產(chǎn)生太嚴(yán)重的后果。但在當(dāng)今豬病日趨復(fù)雜的情況下，豬場(chǎng)發(fā)病多以多因子致病為主，所以豬場(chǎng)在發(fā)生任意一種病時(shí)即宜采用聯(lián)合用藥和綜合防治措施。

3）因本病還沒有真正的特效藥可用，一般用藥只能起控制病情的作用，所以本病主要在預(yù)防，重在加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保持豬群的合理密度和減少環(huán)境應(yīng)激。

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