冷沉淀制備的關(guān)鍵控制環(huán)節(jié)

蘇紅 譚愛玲 許少英 胡文娟 車胡毓

冷沉淀是新鮮冰凍血漿在1 ℃～4 ℃條件下不溶解的白色沉淀物，其中主要含有五種成分：纖維蛋白原(Fg)、FⅧ、血管性假血友病因子(vWF)、凝血因子XⅢ、纖維結(jié)合蛋白(Fn)等多種成分。冷沉淀是存在于血液中的一種功能性成分，具有廣泛的生理功能和很高的臨床應(yīng)用價值。近年來，冷沉淀的應(yīng)用已突破傳統(tǒng)的用于甲型血友病、纖維蛋白原及凝血因子缺乏所致的出血性疾病的治療，在臨床腫瘤手術(shù)、多發(fā)傷和手術(shù)創(chuàng)傷、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)、深度燒傷、黏膜和皮膚疾病、自發(fā)性氣胸、糖尿病足等方面得到廣泛應(yīng)用，并且取得了顯著的效果。冷沉淀中FⅧ 因子極其不穩(wěn)定，F(xiàn)Ⅷ的體內(nèi)生物半衰期變化較大，一般為8～12 h，其活性易喪失[1-2]。新鮮速凍血漿(FFP)融化后，F(xiàn)Ⅷ因子活性隨著時間的延長而有明顯的降低，其活性衰減了41.17%[3]。從全血采集到新鮮冰凍血漿的制備再到冷沉淀的制備的很多環(huán)節(jié)都會影響冷沉淀的最終質(zhì)量。因此，筆者通過實際工作中證明，在制備冷沉淀過程中注意把握關(guān)鍵環(huán)節(jié)，才能制備出優(yōu)質(zhì)的冷沉淀。

1 資料與方法

1.1 一般資料 冷沉淀原料漿來源：本中心流動采血車采集的四聯(lián)袋全血，要求在6 h之內(nèi)制備并凍結(jié)成塊的且各項檢測合格的新鮮冰凍血漿。

1.2 儀器設(shè)備 美國 SORVALL RC-12BP大容量冷凍離心機，費森尤斯 Compomat G4血液分離機，低溫操作臺，低溫周轉(zhuǎn)冰箱，4 ℃貯血冰箱/恒溫水浴箱，塑料卡子，MBF21血漿速凍機、熱合機。

1.3 方法

1.3.1 制備優(yōu)質(zhì)的冷沉淀原料漿 (1)全血(原料)的選擇：制備冷沉淀選擇采血順暢、采集到的全血及時將資料錄入電腦后即放貯血專用冰箱儲存。目前我國自愿無償獻血已取代計劃無償獻血，多以街頭采血為主，接血司機應(yīng)按規(guī)定及時將血接回中心待檢庫。(2)保持良好的冷鏈系統(tǒng)：街頭采集的血液應(yīng)儲存在2 ℃～6 ℃冰箱中，血液從采血點到待檢庫的運輸必須裝入已降溫的血液專用隔熱冷藏箱中，不能放入常溫容器更不能僅用塑料袋包裝。(3)盡快低溫分離成分血：血液從全血到分離成紅細胞和血漿操作過程，要盡量縮短暴露于室溫下的時間，因此盡快并保持低溫分離是保證血液質(zhì)量、減少FⅧ 因子衰減的關(guān)鍵。把握好時間、溫度這兩個關(guān)鍵環(huán)節(jié)，能夠最大限度減少血漿中FⅧ等不穩(wěn)定成分的損失，得到優(yōu)質(zhì)的新鮮冰凍血漿，新鮮冰凍血漿中凝血因子Ⅷ含量必須≥0.7 IU/ml[2]。

1.3.2 制備優(yōu)質(zhì)的冷沉淀 (1)設(shè)備的準(zhǔn)備：采用冰箱融化法制備時，需提前10～14 h將原料漿放在4 ℃貯血冰箱內(nèi)融化，每層擺放200 ml血漿10袋(室溫超過30 ℃進擺放13袋)。每部冰箱放5層，血漿之間不能重疊，使其融化成帶小冰碴的糊狀半流質(zhì)。采用恒溫搖擺式水浴融化法制備時，原料血漿提前放入預(yù)置溫度為2 ℃的融化箱中，制備當(dāng)日解凍期間將離心機溫度設(shè)定在0 ℃～4 ℃ ，并打開低溫操作臺及開始預(yù)冷血漿速凍機使溫度降至-50 ℃。做好設(shè)備預(yù)設(shè)達到適合該成分血溫度要求是保證產(chǎn)品質(zhì)量的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。(2)融化冷沉淀原料血漿：將血漿輕放入血漿解凍箱，啟動解凍程序，在2 ℃循環(huán)水浴中自行融化，隨時觀察血漿的融化情況，此環(huán)節(jié)可設(shè)定時鐘。由于血漿融化需99～120 min，定時鐘可提醒工作人員，避免出現(xiàn)融化過度的情況。選擇恰當(dāng)?shù)娜诨K點很關(guān)鍵，以筆者經(jīng)驗，當(dāng)多數(shù)血漿融化至冰塊直徑4～5 cm、厚度約l cm時，終止融化最為恰當(dāng)。經(jīng)過配平、離心，待分離時，冰塊基本融化剩少量冰渣，冷沉淀達最佳分離狀態(tài)。如果選擇冰渣量很少或基本無冰渣為終點，就會融化過度，待分離時，有的會出現(xiàn)冷沉淀溶解的狀況，造成冷沉淀含量降低；如果選擇終點提前，冰塊過大，會造成冷沉淀容量超標(biāo)?？焖僭诘蜏夭僮髋_上配平血漿，在已降溫的離心機離心。美國 SORVALL RC-12BP大容量冷凍離心機可設(shè)0 ℃～4 ℃、4036 g、8 min。盡快分離熱合速凍。(3)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：由200 ml FFP制備的冷沉淀：FVⅢ含量≥80 IU/200 ml，F(xiàn)g含量≥(150～200)ml，容量(25±5)ml/袋。符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)則為合格[4]。

2 結(jié)果

筆者所在中心2010年2-5月份冷沉淀質(zhì)量控制結(jié)果顯示，被抽檢16份冷沉淀中有12份合格，4份不合格，每月抽檢的冷沉淀都有一份不合格，不合格率25%。不合格原因均為FⅧ 因子含量達不到80 IU。通過對上述各個環(huán)節(jié)的不斷改進和控制，2010年6-9月份冷沉淀質(zhì)量控制科抽檢16份全部合格，合格率為100%。

3 討論

冷沉淀制備的質(zhì)量控制涉及到全血的采集、儲存和運輸、分離以及新鮮冰凍血漿的融化、分離、入庫等諸多環(huán)節(jié)，任何一個環(huán)節(jié)的失控，都會影響到冷沉淀的最終質(zhì)量。質(zhì)量控制的關(guān)鍵是減少冷沉淀中的不穩(wěn)定成分FⅧ 因子的損失。在工作量大時，要先分離用做冷沉淀原料漿的血液，減少FⅧ因子損失。分離出的血漿盡快置-50 ℃血漿速凍機30 min速凍成型后，移入-18 ℃以下冰箱保存，留作冷沉淀原料漿。冷沉淀原料漿各袋容量差別最好不超30 ml，這樣能保證基本同步融化。若容量差超過40 ml，血漿融化程度差別很大，影響冷沉淀質(zhì)量。本中心已全部采用費森尤斯 Compomat G4血液分離機分離血漿，按照設(shè)定的程序進行操作，容量達到標(biāo)準(zhǔn)化，避免了人為做成的容量差異，為制備優(yōu)質(zhì)的冷沉淀打下良好基礎(chǔ)。密閉式分離在低溫操作臺上進行，所得冷沉淀成品入庫前應(yīng)放在低溫操作臺上，注意盡量降低環(huán)境溫度。因FⅧ的活性隨溫度的升高破壞很大，所以控制的核心內(nèi)容是保持血液的冷鏈系統(tǒng)，最大限度地減少血液/血制品在常溫下的時間。盡快放到速凍機復(fù)凍后將冷沉淀在-18 ℃以下冰箱保存?？刂坪迷O(shè)備和環(huán)境溫度、制備的最佳時間等環(huán)節(jié)，才能保證制備出合格優(yōu)質(zhì)的冷沉淀。要保證各個環(huán)節(jié)的的嚴(yán)格受控，制備優(yōu)質(zhì)的冷沉淀，除了配備必要的設(shè)備外，還要提高員工的質(zhì)量意識和效率意識，提高專業(yè)技能，兩個方面缺一不可。

[1]田兆嵩.臨床輸血進展(何子毅，田兆嵩，冷沉淀的臨床應(yīng)用)[M].成都：四川科學(xué)技術(shù)出版社，2010：9.

[2]楊孝順，安梅，阮光萍，等.冷沉淀在臨床外科手術(shù)中的應(yīng)用[J].中國輸血雜志，2005，18(3)：255-257.

[3]楊江存，李芒會，于青，等.新鮮冰凍血漿融化后不同放置時間凝血因子的變化[J].中國輸血雜志，2005，18(3)：2l1-2l2.

[4]中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn).GB18469-2001.全血及成分血質(zhì)量要求[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2002：9-10.