中藥質量控制方法研究進展

黃玉慧，郭力

我國是中藥資源大國，儲藏豐富，共計12,807種，其中藥用植物11,146種，藥用動物1,581種，藥用礦物80種[1]，如何優(yōu)質高效地利用好我國豐富的中藥資源關系到中醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展。長久以來，原始、單一的中藥質量控制方法，一直制約著中藥質量的提高，這也是制約我國中藥走向國際的障礙之一。要使中藥走出國門，真正的被全世界接受，我們就要努力提高中藥質量并提高中藥質量控制的標準。尋找既能被國際接受又能體現出我國中藥特色的質控指標。

1 中藥質量控制常規(guī)方法

1.1 來源鑒別[2]

來源鑒別主要是對根、莖、葉、花、果實等器官，以及孢子囊、子實體等繁殖器官進行形態(tài)觀察[3]。來源鑒別首先保證了用藥的正確性，避免了藥物誤用的情況。但中藥品種繁多，給來源鑒別帶來了一定的困難，但DNA分子遺傳鑒別技術的引入使得這一問題迎刃而解。

1.2 顯微鑒別

顯微鑒別是利用顯微技術對中藥進行顯微結構分析，以確定其品種和質量的一種鑒定方法，包括組織鑒定和粉末鑒定[4]。《中國藥典》2010版一部幾乎每味中藥項下都有顯微鑒別及其顯微特征描述。

1.3 物理常數的測定

包括相對密度、旋光度、沸點、熔點等[4]。例如用蔗糖對蜂蜜進行摻假，經旋光度檢查未摻假蜂蜜為左旋，摻假蜂蜜為右旋[5]。

1.4 理化鑒別

理化鑒別主要包括顯色反應、沉淀反應、泡沫反應、溶血指數、微量升華、熒光分析等，方法精密度不高，專屬性差，使用時需排除干擾。在檢測淀粉的存在時就常使用碘顯色實驗[6]，李紅武等[7]使用茚三酮顯色反應來測定煙草中氨基酸的含量。

1.5 紫外-可見分光光度法

該法主要用于主成分或有效成分在200～400 nm處有最大吸收波長的中藥。中藥化學成分多且復雜，在測定中紫外吸收光譜常常彼此干擾、重疊，因此該法主要用于提取純化后的大類成分如總黃酮、總生物堿、還原糖、皂苷類等成分的測定。

1.6 紅外光譜法

紅外光譜具有很強的特征性，能為中藥材的整體成分分析提供大量信息，該法具有快速、準確、干擾小等特點，主要用于物質的鑒別和結構分析。圖雅[8]等人運用該法對蒙藥草烏花藥材中有效成分進行了鑒別和結構分析，并對提取工藝進行了篩選；李冰寧[9]等人利用紅外光譜測定了炮制前后水蛭化學成分的結構變化。

1.7 高效液相色譜法

高效液相色譜法具有分離效能高、分析速度快、準確度高、重現性好等優(yōu)點，廣泛應用于中藥有效成分含量測定中。通過指標性成分或特異性成分的含量測定可為藥材質量的優(yōu)劣、真?zhèn)吻闆r提供一定依據。因這一方法的普遍性，《中國藥典》2010版中絕大部分藥材和制劑都采用此法來測定藥材中有效成分的含量以保證藥材的質量[10]。

2 中藥質量控制新方法

控制中藥中某一或某幾種成分的含量并不等同于真正意義上的中藥質量控制，這也不能反應中藥的整體性，因此通過某種單一的方法來對中藥實行全面的質量控制是不科學的。隨著科學技術的發(fā)展以及各種新儀器的問世，應用于中藥質量控制的方法和手段也不斷增加，從原來單一的質控指標發(fā)展到現在的多質控指標，這使得中藥質量控制標準全面提高。用于質量控制的新方法主要有：

2.1 高效毛細管電泳法

高效毛細管電泳（HPCE）是具備電泳和色譜技術兩大優(yōu)點的一種以樣品電荷大小、等電點、極性強弱、親和行為等為依據的新型分離分析方法[11]。具有高靈敏度、高分辨率、高柱效、速度快、樣品消耗少、成本低、重現性好等特點, 被廣泛應用于生物工程、醫(yī)學臨床檢驗、藥物分析等領域。對于同分異構體化合物的分離，高效液相色譜法的分離效果并不是很好，但使用HPCE法就可以很好的解決這一問題。黃先敏等[12]使用HPCE法測定了柴胡中丁香酚的含量；鄭一寧等[13]采用此方法分離了麻黃堿和偽麻黃堿，初步探討了分離原理，并建立了相應的檢測方法。

2.2 指紋圖譜鑒定技術

中藥指紋圖譜是指某種或某一地區(qū)的中藥材或中成藥中所共有的、具有其特征性的某類或幾類成分的色譜或光譜圖譜。單一的研究方法無法反映中藥的復雜性和整體性，也難以全面反映和有效控制中藥材及中成藥的內在品質，而指紋圖譜是從藥材的全成分分析出發(fā)，這點符合中藥的整體性，使質量控制從控制主要成分或有效成分過渡到對藥物整體化學成分的控制。在中藥的用藥實踐中發(fā)現某一類或幾類有效成分含量高并不代表其藥材的質量好、臨床療效好，這使得我們對中藥的控制必須從藥材的整體性出發(fā)。目前在中成藥的質量控制中，一些不法商販為節(jié)約成本直接使用提取物來進行投料，對這一類假藥就可以使用指紋圖譜鑒定技術來對其進行檢驗。王桂紅等[14]利用此技術對不同產地的青皮進行了比較。趙欣等[15]也通過指紋圖譜鑒定技術對不同產地的黃精做了比較，并整體的評定了其質量的優(yōu)劣。

2.3 多維色譜及光譜聯用技術的應用

色譜具有分離能力強、檢測靈敏度高、分析速度快的優(yōu)勢，但卻不能對未知化合物進行鑒定，而質譜、紅外光譜、核磁共振波譜等則具有很強的鑒定未知化合物結構的能力。因此，色譜和光譜的聯用實現了不同技術的優(yōu)勢互補，既能分離復雜化合物又能鑒定化合物的結構。此項技術的的使用使樣品的分離、定量、定性成為一個連續(xù)的過程。該法具有靈敏度高、選擇性強、速度快、專屬性強、鑒別能力強等優(yōu)點。目前使用最多的為液相色譜質譜聯用儀（LC-MS）、氣相色譜質譜聯用儀（GCMS）。LC-MS主要用于不揮發(fā)性化合物、極性化合物、熱不穩(wěn)定化合物及大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析測定。劉瑞等[16]運用LC-MS鑒定了大青葉水提液中的5種化學成分。GC-MS主要用于揮發(fā)性成分的定性定量分析，判斷化合物的分子結構、準確地測定化合物的分子量，以及農殘的檢測。江德甜等[17]利用GC-MS對17種農藥建立了檢測、定量和結構確認的方法。目前，LC-MS的譜庫不是十分完善，容易出現“假陽性”，如需確定化合物結構還需要借助于液相色譜-飛行時間質譜（HPLC-TOP-MS）全掃描模式[18]或核磁共振等儀器的分析。相比LC-MS，GC-MS的譜庫相對完善，鑒定化合物結構更具準確性。

2.4 電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）

該法主要用于測定常量元素和痕量元素的含量，相比原子吸收光譜法、原子發(fā)射光譜法，在測定微量元素方面具有噪音更小、靈敏度更高、準確性更高的優(yōu)點。ICP-MS非常靈敏，對痕量元素也能檢出，可用于中藥中有害重金屬元素的檢測，這一方法在中藥質量安全性控制方面起著越來越重要的作用。溫慧敏等[19]運用ICP-MS測定了黨參、莪術、桔梗和龍膽中的重金屬元素，并初步建立了鉛、鎘、汞、砷四種有害元素的檢測方法。譚鐳等[20]也運用此法測定了10批金銀花和白芷中的5種有害金屬元素。

2.5 “一測多評”技術

“一測多評”技術是通過中藥有效成分間存在的內在函數關系和比例關系，通過測定1個成分(對照品可以得到者)，來實現多個成分(對照品沒有或難以得到)的同步監(jiān)控，這是“一測多評”的基本設計思想。其運用校正因子能夠在對照品短缺的情況下，實現多指標成分的含量測定?！吨袊幍洹?010版一部黃連項下收載了此方法用于測定小檗堿、巴馬汀、黃連堿、小檗堿、藥根堿的含量[8]。王智民[21]等通過建立人參皂苷Rb1和其他8種皂苷的紫外相對校正因子，實現了只有一個對照品測定三七中多個人參皂苷的含量。“一測多評”技術的運用解決了中藥化學對照品分離難度大或單體不穩(wěn)定或價格昂貴等問題，有望成為適合中藥特點的多指標質量評價新模式。

2.6 薄層-生物自顯影技術

薄層-生物自顯影技術是一種集色譜分離、鑒定、活性測定于一體的抗菌活性物質檢測方法，該法結合了比色法與色譜分離技術兩者的優(yōu)點。中藥成分十分復雜，通過薄層生物自顯影技術能使我們在薄層板上初步了解抗菌活性成分的相對極性，為后續(xù)分離該化合物提供了依據?！吨袊幍洹?010版一部中熟地黃中應用了此項技術[8]；趙江林[22]等運用該法對滇重樓中的抗大腸桿菌、白色念珠菌、稻瘟病菌的有效成分進行了檢測分離。

2.7 DNA分子遺傳標記技術

DNA分子遺傳標記技術是以DNA分子特征作為遺傳標記而進行物種鑒別。傳統(tǒng)的中藥鑒別方法主要是通過對藥材的形、色、氣、味等表面特征的分辨來實現，然而我國中藥資源非常豐富，即便是同一種藥用植物個體間也存在較大的差異，同種藥物中也不斷有變種出現，這就給傳統(tǒng)的鑒別技術帶來了極大的挑戰(zhàn)。DNA分子遺傳標記技術是建立在核酸水平上的一項新技術，其鑒定結果更加準確可靠，此法廣泛運用于藥用植物種質資源鑒定、藥用植物遺傳多樣性、藥用植物親緣關系分析等方面[23]。黃璐琦等[24]對興安白芷、祁白芷、杭白芷三者共29個個體的基因組進行檢測，通過計算遺傳距離發(fā)現祁白芷、杭白芷屬于同一類群。曹雅男等[25]運用此方法對4種正品龍膽的43個個體的遺傳多樣性和個體間的遺傳距離進行了分析?！吨袊幍洹?010版一部中烏梢蛇、蘄蛇項下也運用了本方法。

3 總結與展望

隨著科技的發(fā)展, 越來越多的新技術、新儀器不斷涌現，這些技術、儀器運用在中藥質量控制中使得中藥質控方法不再單一、片面，而越來越趨向于多方法(包括傳統(tǒng)方法和新方法)的聯合使用。這使我們能更全面的控制中藥質量，對中藥質量控制標準的提高起著非常重要的作用。目前中藥質控不僅從有效成分的含量上進行控制，也在中藥的整體性、安全性方面有了全面的控制。從2005版《中國藥典》和2010版《中國藥典》之間的差異也可看出中藥質控標準的提高，質控標準的提高有利于西方國家對我國傳統(tǒng)醫(yī)藥的認可，從而為中醫(yī)藥的發(fā)展以及國際化做好鋪墊，使之更多的服務于世人。我們也應該更加的努力鉆研，爭取在中藥質量控制方面找到更好更科學的方法來全面、高效的控制中藥質量。

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