舌蓮胃康膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究Δ

匡菊香，劉遠(yuǎn)文，張倩茹，李群芳，周旭美（遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州遵義 563003）

舌蓮胃康膠囊由半枝蓮、白花蛇舌草、莪術(shù)、三七、白術(shù)、石斛等8味藥材組成，具有清熱解毒、活血化瘀、消徵除瘕等功效，在臨床上用于慢性萎縮性胃炎的治療。為了控制該制劑質(zhì)量，筆者對(duì)膠囊中白花蛇舌草、莪術(shù)、三七進(jìn)行了薄層色譜（TLC）鑒別；并用高效液相色（HPLC）法對(duì)膠囊中半枝蓮的主要活性成分野黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

Technologies 1200 Series HPLC儀（美國Agilent公司）；BS224S電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）；RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；SHB-ⅢA循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城工貿(mào)有限公司）；98-Ⅱ-B磁力攪拌電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司）；SQ7200HPT超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司）。

野黃芩苷（批號(hào)：110842-200605）、吉馬酮（批號(hào)：111665-200902）、三七皂苷R1（批號(hào)：110745-200617）、蘆?。ㄅ?hào)：100080-200707）對(duì)照品均購于中國食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純；舌蓮胃康膠囊由遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院自制（批號(hào)：201012-1、201012-2、201012-3、201012-4、201012-5、201012-6）。

2 舌蓮胃康膠囊的制備

根據(jù)舌蓮胃康處方比例稱取各藥材適量，其中三七洗凈，低溫干燥，粉碎，過60目篩，備用；其余藥物加藥材6倍量水，提取3次，每次1 h；合并藥物水提液，過濾，濃縮至1 g∶1 mL，再用65%的乙醇沉淀，所加乙醇為藥物濃縮液體積的6倍，沉淀時(shí)間為24 h，過濾，減壓回收乙醇，藥液濃縮成稠浸膏，然后低溫真空干燥成干浸膏，粉碎，過60目篩，與三七粉末混合均勻，裝2號(hào)硬膠囊（約0.38 g/粒），備用。并按相同方法，分別制備缺莪術(shù)、白花蛇舌草、三七的3種陰性樣品。

3 定性鑒別[1，2]

3.1 莪術(shù)的TLC鑒別[3]

取本品內(nèi)容物5 g，置密閉錐形瓶中，加石油醚（45℃）50 mL（功率：350 W，頻率：59 kHz）處理20 min，離心，過濾，收集濾液，殘?jiān)蒙倭渴兔严礈?，過濾，合并濾液并揮干，殘?jiān)訜o水乙醇5 mL溶解，作為供試品溶液；取缺莪術(shù)的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液；另取吉馬酮對(duì)照品2 mg，加無水乙醇制成0.4 mg·mL-1的溶液，作為對(duì)照品溶液。照TLC法[2]試驗(yàn)，取上述3種溶液各20 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（45℃）-丙酮-乙酸乙酯（94∶5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%的香草醛硫酸溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。莪術(shù)的TLC見圖1。

3.2 三七的TLC鑒別[4]

取本品內(nèi)容物5 g，加水50滴，攪勻，再加以水飽和的正丁醇50 mL，密閉超聲30 min，離心，取上清液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液；取缺三七的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液；取三七皂苷R1對(duì)照品2.5 mg，加甲醇制成0.5 mg·mL-1的溶液，作為對(duì)照品溶液。照TLC法[2]試驗(yàn)，取上述3種溶液各20 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10 ℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。三七的TLC見圖2。

3.3 白花蛇舌草的TLC鑒別

取本品內(nèi)容物5 g，加甲醇50 mL，密閉，振搖10 min，濾過，作為供試品溶液；取缺白花蛇舌草的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液；取蘆丁照品5 mg，加甲醇制成0.5 mg·mL-1的溶液，作為對(duì)照品溶液。參照TLC法[2]試驗(yàn)，取上述3種溶液各20 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（8∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%的三氯化鋁溶液，待揮干后置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無干擾。白花蛇舌草的TLC見圖3。

圖1 莪術(shù)的TLC1.供試品；2.對(duì)照品；3.陰性對(duì)照Fig 1 TLC of Rhizoma Curcumae1.test sample；2.reference standard；3.negative control

圖2 三七的TLC1.供試品；2.對(duì)照品；3.陰性對(duì)照Fig 2 TLC of Panax notoginseng1.test sample；2.reference standard；3.negative control

圖3 白花蛇舌草的TLC1.供試品；2.對(duì)照品；3.陰性對(duì)照Fig 3 TLC of Hedyotic diffusa1.test sample；2.reference standard；3.negative control

4 野黃芩苷的含量測(cè)定[2，5，6]

4.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax Edipse XDB-CN（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.6%冰醋酸溶液（12∶88）；檢測(cè)波長：335 nm[2]；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。色譜見圖4。

圖4 高效液相色譜圖A.野黃芩苷對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照Fig 4 HPLC chromatogramsA.scutellarin control；B.test sample；C.negative control

4.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取野黃芩苷對(duì)照品5.0 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.1 mg·mL-1的野黃芩苷對(duì)照品溶液，置冰箱內(nèi)貯藏，備用。

4.3 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物20.13 g，置于索氏提取器中，加石油醚于85℃提取至無色，棄去石油醚，藥渣將石油醚揮干，加甲醇繼續(xù)提取至無色，甲醇液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行濃縮，將濃縮后的甲醇液轉(zhuǎn)移入50 mL量瓶中定容，取定容后的甲醇液25 mL，用乙酸乙酯萃取3次（每次20 mL），棄去乙酸乙酯層，甲醇層用稀鹽酸調(diào)pH值為1～2之間，再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，每次20 mL，將乙酸乙酯層置水浴鍋上蒸干，用甲醇溶解轉(zhuǎn)移入5 mL量瓶中定容，作為供試品溶液。

4.4 線性關(guān)系考察

精密吸取野黃芩苷對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，按“4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μL測(cè)定。以野黃芩苷檢測(cè)濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝40 442X－40.937（r＝0.999 8，n＝6）。結(jié)果表明，野黃芩苷檢測(cè)濃度在0.01～0.10 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

4.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取野黃芩苷對(duì)照品溶液（濃度為0.04 mg·mL-1）20 μL，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定野黃芩苷峰面積，記錄色譜圖。結(jié)果，RSD＝0.88%（n＝6），表明儀器精密度良好。

4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：201010-3）適量，共6份，按“4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣，按“4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，RSD＝1.87%（n＝6），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

4.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：201010-3）適量，共6份，按“4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，RSD＝0.95%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

4.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品（批號(hào)：201010-3，野黃芩苷含量為2.318 0 mg·g-1，取樣量為0.6 g）適量，共6份，精密稱定，分別加入相同量（10 mL）的野黃芩苷對(duì)照品溶液，按“4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，平均回收率為97.86%，RSD＝1.62%（n＝6）。

4.9 樣品含量測(cè)定

任取 6個(gè)批號(hào)（批號(hào)：201012-1、201012-2、201012-3、201012-4、201012-5、201012-6）的舌蓮胃康膠囊適量，按“4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，并按外標(biāo)法計(jì)算野黃芩苷的含量。結(jié)果，6批樣品的含量分別為2.327、2.298、2.287、2.263、2.331、2.314 mg·g-1，平均含量為2.303 mg·g-1，RSD＝1.13%（n＝6）。

5 討論

本品方中三七為名貴藥材，傳統(tǒng)常規(guī)服用方法為打粉直接內(nèi)服，故直接粉碎為末，與其他藥物提取物的干浸膏粉末混合，在制備時(shí)應(yīng)充分混合均勻，然后灌裝膠囊。

采用HPLC法測(cè)定野黃芩苷含量時(shí)，對(duì)野黃芩苷樣品提取所用溶劑、提取時(shí)間、提取方法以及流動(dòng)相的選擇進(jìn)行了多次考察篩選。在配制樣品溶液時(shí)，先用石油醚進(jìn)行索氏提取，再用甲醇提取，最后用乙酸乙酯進(jìn)行雙重處理，此法能去除大量雜質(zhì)、純化野黃芩苷，減少干擾；通過多次試驗(yàn)，采用乙腈-0.6%冰醋酸溶液（12∶88）作為野黃芩苷含測(cè)的流動(dòng)相，能保證色譜圖中保留時(shí)間較短、基線較平、峰形對(duì)稱好、理論板數(shù)高、分離度好、無拖尾現(xiàn)象，利于提高檢測(cè)效率。綜上，所建標(biāo)準(zhǔn)可用于舌蓮胃康膠囊的質(zhì)量控制。

[1]齊宗韶.色譜法在中國藥典2005年版一部、二部中的應(yīng)用[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2007，8（1）：69.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄34、109、附錄36.

[3]王 婷，李鐵福，林紹強(qiáng)，等.莪術(shù)醇的分離鑒定及含量測(cè)定[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26（5）：1 018.

[4]王術(shù)玲.人參、三七、黃芪的薄層色譜鑒別[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2003，4（2）：48.

[5]張 沂，王 強(qiáng)，蔡清宇，等.復(fù)方苦芩軟膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥房，2010，21（19）：1 781.

[6]張新廣，王冬梅，丁少波.潰結(jié)愈灌腸劑的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥房，2010，21（23）：2 144.